Патент на изобретение №2317108

(54) СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ПОСТГЕМОРРАГИЧЕСКИХ И ПОСТРЕАНИМАЦИОННЫХ НАРУШЕНИЙ У СОБАК В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

(57) Реферат:

Изобретение относится к экспериментальной биологии. Способ заключается в том, что предварительно перед постановкой эксперимента собакам вводят столбнячный анатоксин в дозе 20 ЕС на 10 кг веса двукратно с интервалом в 10 дней. Изобретение позволяет упростить проведение профилактики осложнений и реанимацию.

Изобретение относится к медицине, а именно к патофизиологии и реаниматологии, и может использоваться для экспериментальной стимуляции восстановления жизненных функций организма, находящегося в терминальном состоянии, а также рекомендоваться для лечения и профилактики постреанимационной патологии сердечно-сосудистой системы у больных с риском развития геморрагического шока.

При изучении профилактического введения препаратов пациентам, перенесшим геморрагический шок или обширную операционную травму, в научной литературе выявлены следующие направления: известны способы профилактики гнойно-септических осложнений в постшоковом и постгеморрагическом периоде путем иммунизации пациентов антистафилококковым иммуноглобулином, гипериммунной антистафилококковой плазмой (Кузин М.И., Костюченок Б.М., Белоцкий С.М., Зуева B.C. и соавт. Клинико-иммунологическая диагностика и иммунотерапия гнойной хирургической инфекции (методические рекомендации). – Москва – 1985. – 18 с.).

Также рядом авторов (Галеев Ф.С., Медведев Ю.А., Туктаров М.Ф. Профилактика, диагностика и лечение синдрома посттравматических и послеоперационных иммунодефицитных состояний в отделениях реанимации и интенсивной терапии (учебно-методическое пособие). – Уфа – 1996 – 27 с.) проводилась коррекция постгеморрагического иммунодефицита путем заместительной иммунотерапии (введением внутривенно лейкомассы, свежезамороженной плазмы крови, иммуноглобулинов), иммуномедиаторных препаратов (интерлейкины, интерфероны), биогенных иммуномодуляторов костномозгового и тимического происхождения (миеломид, Т-активин, тималин).

Технический результат – упрощение способа.

Авторами в доступной научно-медицинской и патентной литературе не обнаружено сведений о профилактическом введении анатоксинов с целью уменьшения нарушений сократимости и проводимости миокарда, предотвращения возникновения сердечной недостаточности в постгеморрагическом и постреанимационном периоде.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

Проводят предварительную иммунизацию очищенным несорбированным столбнячным анатоксином с нагрузкой 1200 ЕС/мг белкового азота, рН 7,0, консервированным формалином, применяемым для иммунизации населения (Бургасов П.Н. Руководство по вакцинному и сывороточному делу. М.: Медицина, 1978), в дозе 20 ЕС на 10 кг веса, двукратно с интервалом в 10 дней. В дальнейшем осуществляют контроль степени иммунизации в реакции кольцепреципитации и НСТ-тесте.

Экспериментальное моделирование клинической смерти от острой кровопотери с последующим оживлением по методу Неговского В.А. (Неговский В.А., Гурвич A.M., Золотокрылина Е.С. Постреанимационная болезнь. – М.: Медицина. – 1979. – 384 с.). Кровопотеря у собак вызывается свободным кровопусканием из левой бедренной артерии. Продолжительность клинической смерти варьирует от 3 до 4 мин 40 с в зависимости от длительности агонального периода. Внутриартериальное центрипетальное нагнетание аутогенной крови начинается ритмично под давлением 110-120 мм рт.ст. и продолжается до восстановления сердечной деятельности. После восстановления сердечной деятельности система переключается на внутривенное переливание (10-15 мм рт.ст.). Искусственная вентиляция легких проводится с помощью аппарата, создающего активный вдох и пассивный выдох из расчета 40-50 мл воздуха на 1 кг массы тела собаки. Частота искусственного дыхания равняется 25-35 вдохам в минуту.

Экспериментальное моделирование длительного геморрагического шока по Уиггерсу длительностью 2 ч с последующей реинфузией аутокрови. Геморрагический шок вызывается путем острого кровопускания из бедренной артерии со стабилизацией артериального давления на уровне 40-50 мм рт.ст. Артериальное давление во время шока поддерживается путем дробного кровопускания или внутриартериального вливания аутокрови. Через 2 ч от начала геморрагического шока осуществляется реанимация путем внутриартериального вливания 50-100 мл крови в течение нескольких секунд с дальнейшим медленным внутривенным ее введением.

С целью изучения структурных нарушений в головном и спинном мозге, различных отделах миокарда проводился забой животных. Забой осуществляется под гексеналовым наркозом электротравмой в 220 В, на 1-е, 2-е, 3-и, 7-е, 14-е, 21-е, 28-е, 35-е сутки постреанимационного периода. Полученный гистологический материал головного мозга красится гематоксилинэозином для выявления общих структурных изменений в ткани мозга по общепринятым методам, а также по Нисслю для проведения морфометрического анализа (Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники. – Л.: Мед-гиз. – 1961. – 340 с), фрагменты миокарда забираются из стенки левого желудочка, правого желудочка, левого и правого предсердия, межжелудочковой перегородки, фиксируются в 10%-ном нейтральном формалине на фосфатном буфере. Для изучения общих структурных изменений миокарда используется стандартная окраска срезов гематоксилин-эозином. Для выявления ранних ишемических изменений миокарда используется окраска по Селье. Для количественной оценки тяжести повреждений сердца применяется способ подсчета “фуксинорганических” кардиомиоцитов, окрашенных по Селье. Также проводится электронно-микроскопическое исследование состояния клеток различных отделов головного и спинного мозга, миокарда. Для трансмиссионной электронной микроскопии исследуемые объекты фиксируются погружением в 2,5% глутаральдегид на фосфатном буфере (рН 7,2) с постфиксацией в 1%-ном растворе четырехокиси осмия. После обезвоживания в спиртах возрастающей концентрации и ацетоне образцы заливаются в эпон-812 или аралдит. Ультратонкие срезы получают на ультратоме 1KB-111, которые затем контрастируют уранил ацетатом и цитратом свинца по Рейнальдсу. Материал исследуют с помощью трансмиссионного электронного микроскопа ЭМВ-100 БР при ускоряющем напряжении 75 кВ. Фотосъемку производят на фотопластины (9×12).

Хронические эксперименты длительностью 5 недель проведены на 41-й собаке, разделенных на 5 групп: 1- и 2-я группы – иммунизированные столбнячным анатоксином, перенесшие клиническую смерть или два часа геморрагического шока, 3- и 4-я группа – контрольные животные, перенесшие терминальные состояния без предварительной иммунизации; 5-я группа – контроль иммунизации (собаки, забитые после перенесенной иммунизации столбнячным анатоксином).

При исследовании выявлено, что при предварительной иммунизации столбнячным анатоксином улучшается течение постреанимационного периода после перенесенной клинической смерти от острой кровопотери и постреинфузионного периода после длительного геморрагического шока. Это подтверждается быстрым и полным в сравнении с контролем восстановлением показателей артериального давления, отсутствием нарушения проводимости сердца, более благоприятным характером восстановления сердечного выброса (определенного методом интегральной реографии с конечностей), лучшей выживаемостью животных (80% – в опытной группе и 67% – в контрольной), при сохранении тонуса сосудистой стенки (по данным реографии). Также в опытной группе быстрее восстанавливается сердечная деятельность (40,4±5,0 с и 45,8±3,9 с соответственно), самостоятельное дыхание (156,0±43,0 с и 360,0±104,0 с соответственно) в сравнении с контролем. В период длительного геморрагического шока и постгеморрагический период отмечается стабилизация артериального давления при наименьшей кровопотере в сравнении с показателями в контрольной группе (24,1±2,4 мл/кг и 25,7±2,5 мл/кг соответственно). Выявляется лучшая, чем в контроле, выживаемость животных (77,8% и 62,5% соответственно), при этом сердечный выброс растет в пределах наилучшего благоприятствования для восстановления функций организма, отсутствуют нарушения проводимости миокарда, сохранен тонус сосудистой стенки.

Установлено, что в ранний постреанимационный период у животных всех групп отмечается нарушение атриовентрикулярной проводимости 1-2-й степени в сроки до 15-30 минут после реанимации, которые при благоприятном исходе регрессируют. У животных, перенесших клиническую смерть на фоне иммунизации столбнячным анатоксином, отмечаются явления атриовентрикулярной блокады 1-й степени до 15 минут постреанимационного периода, в дальнейшем, подобных явлений, как и нарушений внутрижелудочковой проводимости у них не наблюдается.

Что касается морфологических изменений миокарда, то в ходе проведенных экспериментов выявлено преимущественное поражение наиболее функционально отягощенных отделов миокарда – левого желудочка и межжелудочковой перегородки у всех животных, перенесших терминальное состояние. Однако в каждой группе животных имелись свои отличия в морфологической картине постреанимационных изменений.

При предварительной иммунизации столбнячным анатоксином, в ранние сроки после реанимации (до 3-х суток) значительная часть мышечных клеток была с сохраненной поперечной исчерченностью. Встречались единичные дистрофически измененные миоциты. Отмечались признаки спазма и дистонии сосудов микроциркуляции, наиболее выраженные в миокарде правого предсердия. К 3-й неделе наблюдений выраженность этих изменений уменьшалась, а через 5 недель после реанимации они были нивелированы.

При анализе данных, полученных при исследовании постшокового периода, выявлено, что у животных, перенесших длительный геморрагический шок на фоне иммунизации столбнячным анатоксином, наблюдаются лишь явления миграции водителя ритма сердца, тахикардия (преобладающие в период шока) и экстрасистолия в поздние сроки после реинфузии.

При изучении морфологических изменений в миокарде животных, перенесших длительный геморрагический шок на фоне иммунизации столбнячным анатоксином, в ранние сроки преобладали дистрофические изменения, выраженные в левом желудочке и межжелудочковой перегородке, в артериях и артериолах были выражены явления спазма. К 3-й неделе наблюдений дистрофические изменения мышечных клеток уменьшались. В поздние сроки (5 недель) отмечались признаки дистонии микрососудов. Встречались спастически сокращенные артериолы. Характерны – дистония сосудов и нарушения микроциркуляции в миокарде предсердий, сочетающиеся с нарушениями ритма сердца в виде экстрасистолии. При электронно-микроскопическом исследовании клеток миокарда после перенесенного терминального состояния выявлено усиление деления митохондрий, гипертрофия их крист, что свидетельствует об активации энергетических процессов в миокардиоцитах.

В результате использования предлагаемого способа улучшается выживаемость экспериментальных животных после перенесенных терминальных состояний. Данный способ иммунизации можно рекомендовать с целью профилактики развития постгеморрагических нарушений у пациентов, имеющих потенциальный риск развития геморрагического шока.

Формула изобретения

Способ профилактики постгеморрагических и постреанимационных нарушений у собак в эксперименте, заключающийся в том, что предварительно, перед постановкой эксперимента, собакам вводят столбнячный анатоксин в дозе 20 ЕС на 10 кг веса двукратно с интервалом в 10 дней.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 21.06.2008

Извещение опубликовано: 20.03.2010 БИ: 08/2010