Патент на изобретение №2315996

(54) СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ГИПЕРОКСИПРОЛИНУРИИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике. Изобретение касается способа диагностики гипероксипролинурии, включающего взятие пробы суточной мочи и ее анализ на содержание оксипролина. Для определения содержания оксипролина используют фильтровальную бумагу, одну половину которой смачивают 7% раствором хлорамина Б, другую – раствором, содержащим 10 г лимонной кислоты, 5 г очищенного перекристаллизацией п-диметиламинобензальдегида, 10 мл HCl в 25 мл воды. Обработанную таким образом бумагу высушивают и погружают конец, смоченный хлорамином Б, в собранную суточную мочу и ожидают, когда бумага намокнет до уровня, смоченного раствором п-диметиламинобензальдегида. После чего бумагу извлекают и высушивают в струе горячего воздуха; по возникновению коричневого пятна диагностируют наличие гипероксипролинурии, по его отсутствию – отсутствие гипероксипролинурии. Предлагаемый способ прост в исполнении, не нуждается в дорогостоящем оборудовании и не требует длительной предварительной подготовки пробы.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике и применяется для определения гипероксипролинурии в суточной моче.

Известен способ определения концентрации оксипролина в биологическом материале, основанный на выделении и очистке оксипролина на ионообменной смоле Dowex последующим определением концентрации 10% раствором п-диметиаминобензальдегидом в 96% этаноле (Заявка №4950767/14, KZ. Опубл. 15.12.1994).

Однако данный способ является трудоемким и требует предварительной подготовки материала с применением дорогостоящих сорбентов, проведения стандартной пробы, использования спектрофотометрической аппаратуры.

Задачей настоящего изобретения является разработка технически простого, доступного способа определения концентрации оксипролина в моче.

Поставленная задача решается тем, что в способе экспресс-диагностики гипероксипролинурии в суточной моче, включающем взятие пробы и ее анализ на содержание оксипролина, используют индикаторную бумагу, одну часть которой смачивают раствором хлорамина Б, а другую – раствором содержащим лимонную кислоту и очищенный п-диметиламинобензальдегид, при этом появление коричневого пятна диагностирует содержание оксипролина в суточной моче выше нормы, а его отсутствие – содержание оксипролина в пределах нормы.

Способ осуществляют следующим образом.

Для определения содержания оксипролина в суточной моче используют индикаторную бумагу, которая представляет собой отрезок фильтровальной бумаги размером 3×30 мм, смоченный наполовину 7% раствором хлорамина Б, другой половиной раствором, содержащим 10 г лимонной кислоты, 5 г п-диметиламинобензальдегида, 10 мл HCl в 25 мл воды. П-диметиламинобензальдегид подвергают предварительной очистке перекристаллизацией из 96%-ного этанола. Обработанная таким образом бумага тщательно высушивается.

У пациентов, пребывающих не менее суток на бесколлагеновой диете, собирают суточную мочу. Погружают конец индикаторной бумаги, смоченный хлорамином Б, в мочу и ожидают, когда полоска намокнет до уровня, смоченного раствором п-диметиламинобензальдегида. Полоску вынимают и тщательно высушивают в струе горячего воздуха феном. При избыточной экскреции оксипролина в моче на индикаторной полоске в центральной части возникает коричневое пятно, при нормальной экскреции пятно не возникает.

Клинический пример

Содержание свободного оксипролина, измеренного стандартным методом, в суточной моче пациентов Б. и Н. составило 22,3 и 5,9 ммоль/сутки соответственно. При опускании полоски индикаторной бумаги, обработанной вышеуказанным способом, в мочу пациента Б. после просушивания феном возникает коричневое пятно в центральной части полоски, тогда как при опускании полоски индикаторной бумаги в мочу пациента Н. коричневого пятна не возникает. На основании полученных данных сделали вывод о том, что содержание оксипролина в моче больного Б. находится выше нормы, а у больного Н. оно не превышает верхней границы допустимых значений.

Предлагаемый способ позволяет в короткие сроки проводить диагностику гипероксипролинурии.

Предлагаемый способ прост в исполнении, не нуждается в дорогостоящем оборудовании, не требует предварительной подготовки пробы, в качестве реагента используется очищенный высокочувствительный п-диметиламинобензальдегид. Это дает возможность использовать способ в домашних условиях при эксперсс-диагностике состояний, связанных с нарушением экскреции оксипролина.

Способ экспресс диагностики гипероксипролинурии применяется в лаборатории биохимии ФГУН РНЦ “ВТО” им. академика Г.А.Илизарова.

Формула изобретения

Способ диагностики гипероксипролинурии, включающий взятие пробы суточной мочи и ее анализ на содержание оксипролина, характеризующийся тем, что для определения содержания оксипролина используют фильтровальную бумагу, одну половину которой смачивают 7%-ным раствором хлорамина Б, другую – раствором, содержащим 10 г лимонной кислоты, 5 г очищенного перекристаллизацией п-диметиламинобензальдегида, 10 мл HCl в 25 мл воды; обработанную таким образом бумагу высушивают и погружают конец, смоченный хлорамином Б, в собранную суточную мочу; ожидают, когда бумага намокнет до уровня, смоченного раствором п-диметиламинобензальдегида; после чего бумагу извлекают и высушивают в струе горячего воздуха; по возникновению коричневого пятна диагностируют наличие гипероксипролинурии, по его отсутствию – отсутствие гипероксипролинурии.