Патент на изобретение №2315320

(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ХАРАКТЕРА ТЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ У ПАЦИЕНТОВ С ДЕГЕНЕРАТИВНО-ДИСТРОФИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИЕЙ ТАЗОБЕДРЕННОГО СУСТАВА

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины. Для оценки характера течения дегенеративно-дистрофической патологии тазобедренного сустава у больного осуществляют забор крови из периферической вены. В сыворотке крови определяют содержание растворимых форм молекул главного комплекса гистосовместимости I класса (sHLA-I) и интерферона-гамма (IFN-) с помощью твердофазного иммуноферментного анализа. При одновременном повышении уровня sHLA-I свыше 1300 у.е./мл и IFN- свыше 40 пг/мл судят о быстро прогрессирующем течении заболевания. Использование способа позволяет повысить специфичность и точность оценки характера течения дегенеративно-дистрофической патологии тазобедренного сустава.

(56) (продолжение):

CLASS=”b560m”disease activity. Ann N Y Acad Sci., 2005, 1051, p.111-120, PMID: 16126950, реф., [он-лайн], [найдено 09.04.2007], найдено из базы данных PubMed.

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а точнее – к способам оценки характера течения патологического процесса у больных с дегенеративно-дистрофическими заболеваниями тазобедренною сустава,

Однако эти способы являются малоинформативными и субъективными.

В качестве прототипа нами выбран способ оценки характера течения заболевания, заключающийся в заборе у больных крови, выделении сыворотки и определении в ней уровня С – реактивного белка (СРБ), по повышению которого судят о прогрессирующем течении заболевания [Коваленко В.Н., Борткевич О.П. Остеоартроз. Практическое руководство. К.: Морион, 2003. – С.259].

Однако данный способ мало информативен, так как небольшое повышение СРБ в сыворотке крови отмечается только у пациентов с ранним остеоартритом и только в этих случаях может служить предиктором прогрессирования заболевания.

Задачей настоящего изобретения является повышение специфичности, точности и чувствительности способа.

Поставленная задача решается за счет того, что в способе, включающем забор крови из периферической вены и получении сыворотки, определяют содержание в ней растворимой формы молекулы главного комплекса гистосовместимости I класса (sHLA-I) и интерферона-гамма (IFN-) и при одновременном повышении их уровня свыше 1300 у.е./мл и 40 пг/мл соответственно судят о быстро прогрессирующем течении заболевания.

Способ осуществляют следующим образом. Забирают кровь из периферической вены (5-6 мл) в сухие чистые пробирки. Для образования сгустка образцы крови последовательно выдерживают по 30 минут в термостате при температуре +37°С и в холодильнике при температуре +4°C. После этого свернувшуюся кровь центрифугируют при 200 g 15 минут. Сыворотку отбирают в сухие чистые пробирки.

Для определения содержания sHLA-I лунки планшетов для иммуноферментного анализа сорбируют моноклональные антитела ИКС-53. Сорбирование проводят в течение 16-18 часов при температуре +4-8°C. После отмывания несвязавшихся моноклональных антител в лунки наносят образцы исследуемых сывороток с последующей инкубацией планшетов в течение 1 часа при комнатной температуре и отмывкой несвязавшихся белков. Затем лунки планшетов в тех же условиях обрабатывают рабочим раствором очищенных моноклональных антител ИКО-216, конъюгированных с пероксидазой хрена. Для каждого образца ставят отрицательный контроль. С этой целью используют образцы поликлональных мышиных антител, меченных пероксидазой хрена и разведенных в той же концентрации, что и моноклональные антитела ИКО-216. После заключительной отмывки несвязавшегося конъюгата реакцию проявляют раствором 0,1%-ного ортофенилендиамина в 0,05 М нитратном буферном растворе рН 5,0, содержащем 0,01% перекиси водорода. Реакцию останавливают 1 М раствором Н₂SO₄, и учитывают результаты с помощью фотометра при длине волны 492 нм. Содержание растворимых молекул оценивают по калибровочной прямой, выстроенной прибором при введении различных разведении положительного контроля. Результаты выражают в условных единицах (у.е./мл).

Для определения содержания IFN- в сыворотке крови используют «сэндвич»-вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта применяют два моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к IFN-. Одно из них иммобилизовано на твердой фазе, второе конъюгировано с пероксидазой. На первой стадии анализа IFN-, содержащийся в калибровочных и исследуемых пробах, связывается с антителами, иммобилизованными на внутренней поверхности лунок при инкубации в течение 2 часов при 37°С. На второй стадии анализа иммобилизованный IFN- взаимодействует с конъюгатом вторых антител-биотина в течение 60 минут при 37°С. На последней стадии в лунки планшета вносят авидин-пероксидазу и инкубируют в течение 30 минут при 37°С. Количество связавшеюся коньюгата прямо пропорционально количеству IFN- в исследуемом образце. После каждого этапа выполнения анализа производят промывку планшета фосфатно-солевым буфером с твином-80 для удаления несвязавшихся реагентов. Во время инкубации с субстратной смесью в течение 20-30 минут при комнатной температуре в темноте происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся меченых антител. После измерения оптической плотности раствора при длине волны 492 нм на основании калибровочной кривой, выстроенной прибором после введения известных концентраций контрольного образца, рассчитывают концентрацию IFN- в определяемых образцах. Результаты выражают в пг/мл.

При одновременном повышении уровней sHLA-I и IFN- свыше 1300 у.е./мл и 40 пг/мл соответственно судят о быстро прогрессирующем течении патологического процесса.

Основанием для установления диагностически значимых сывороточных уровней sHLA-I и IFN- явились результаты обследования 78 больных с денеративно-дистрофическими заболеваниями тазобедренных суставов (13 пациентов с коксартрозом I, II, III степени, 22 больных с асептическим некрозом головки бедренной кости III-IV степени и 43 обследуемых с кистевидной перестройкой суставных концов II и III степени).

Значения содержания исследуемых молекул в сыворотке крови пациентов варьировали в большом диапазоне: уровень sHLA-I колебался от 244 до 2224 у.е., a IFN- – от 0 до 785,8 пг/мл.

На основе анализа результатов клинических исследований все пациенты в зависимости от характера течения заболевания были разделены на группы с медленно прогрессирующим (с обострениями заболевания реже одного раза в год – 22 пациента), прогрессирующим (с обострениями заболевания один раз в год – 31 больной) и быстро прогрессирующим течением патологического процесса (с обострениями заболевания 2-3 и более раз в год – 25 пациентов).

У пациентов с медленно прогрессирующим течением заболевания максимальное содержание sHLA-I составило 1043 у.е./мл, IFN- 33,8 пг/мл. Одновременного повышения содержания sHLA-I и IFN- свыше 1300 у.е./мл и 40 пг/мл соответственно не наблюдалось. Среди больных с прогрессирующим течением патологического процесса максимальный уровень sHLA-I-2138 у.е./мл. IFN- – 72,2 пг/мл. Одновременное увеличение уровней обоих иммунорегуляторных молекул отмечено у 12% пациентов. У пациентов с быстро прогрессирующим течением заболевания максимальные уровни исследуемых молекул составили 2224 у.е./мл и 785,8 пг/мл соответственно. Одновременное увеличение обоих иммунологических показателей (уровня sHLA-I более 1300 у.е./мл, а IFN- – выше 40 пг/мл) регистрировалось в 90% случаев.

Клинические примеры

Пример 1. Больная Сивухина И.М., 38 лет, (И.Б. №203652) находилась на стационарном консервативном лечении в Нижегородском НИИ травматологии и ортопедии с 02.10.2002 по 25.10.2002 г. с диагнозом: правосторонний диспластический коксартроз с кистевидной перестройкой суставных концов III ст. с умеренным болевым синдромом. При обследовании больной 04.10.2002 г. в сыворотке крови были выявлены высокие значения иммунорегуляторных молекул: sHLA-I – 2224 у.е. и IFN- – 785,8 пг/мл, что соответствовало быстро прогрессирующему течению заболевания. В анамнезе у больной отмечались частые (2-3 раза в год) обострения заболевания. Полученная информация была использована для уточнения дальнейшей тактики лечения. После проведения курса медикаментозной, физио- и кинезотерапии больной было рекомендовано эндопротезирование правого тазобедренного сустава, от которого она отказалась. При контрольном осмотре пациентки через год отмечалось быстрое прогрессирование рентгенологических изменений в тазобедренном суставе.

Пример 2. Больная Вялова Т.В., 37 лет, (И.Б. №203887) находилась на стационарном консервативном лечении в Нижегородском НИИ травматологии и ортопедии с 17.02.2003 по 14.03.2003 г. с диагнозом двухсторонний диспластический коксартроз справа с кистевидной перестройкой II-III ст., слева – I ст., с умеренным болевым синдромом справа. При обследовании больной в сыворотке крови были выявлены относительно низкие значения иммунорегуляторных молекул: sHLA-I в сыворотке крови – 493 у.е., IFN- 17,2 пг/мл, что не соответствовало быстро прогрессирующему течению заболевания. Обострения заболевания у пациентки отмечались один-два раза в год. С учетом характера течения заболевания больной были рекомендованы повторные курсы консервативного лечения один раз в год.

Предложенный способ позволяет с достаточной достоверностью объективно оценить течение патологического процесса у больных с дегенеративно-дистрофическими заболеваниями тазобедренного сустава. Способ информативен. выполним в условиях специализированного стационара и может быть использован в клинической практике.

Формула изобретения

Способ оценки характера течения патологического процесса у больных с дегенеративно-дистрофическими заболеваниями тазобедренного сустава, включающий забор крови и получение сыворотки, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют содержание растворимых форм молекул главного комплекса гистосовместимости I класса (sHLA-I) и интерферона-гамма (IFN-) и при одновременном повышении их уровней свыше 1300 у.е./мл и 40 пг/мл соответственно судят о быстро прогрессирующем течении заболевания.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 30.06.2008

Извещение опубликовано: 20.06.2010 БИ: 17/2010