Патент на изобретение №2159438

(54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ У РЕКОНВАЛЕСЦЕНТОВ С ОСТРЫМИ РЕСПИРАТОРНЫМИ ВИРУСНЫМИ ИНФЕКЦИЯМИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине. Однократно проводят реакцию непрямым методом флюоресцирующих антител со слезной жидкостью, взятой не ранее 5-7 дня с начала заболевания. При отсутствии в слезной жидкости специфических антител к вирусу геморрагической лихорадки с почечным синдромом диагностируют острую респираторную вирусную инфекцию. При наличии антител в слезной жидкости диагностируют геморрагическую лихорадку с почечным синдромом. Способ точен, не травматичен, позволяет исключить постпункционные осложнения.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням.

Прототипом является способ дифференциальной диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) с острыми респираторными вирусными инфекциями (ОРВИ) и воспалительными заболеваниями почек с помощью хемилюминесцентного метода исследования крови и мочи. (Диагностика и лечение ГЛПС иммунобиологическими препаратами. Ж. Здравоохранение Башкортостана N1, 1993, с. 33-35. Д.Х.Хунафина, Ф.Х.Камилов, Р.М.Фазлыева и др.)
Однако этот способ дифференциальной диагностики ГЛПС с ОРВИ эффективен в случае, когда пациент впервые инфицирован вирусом ГЛПС и дифференциальный диагноз приходится проводить с заболеваниями, объединяемыми в группу ОРВИ и воспалительных заболеваний почек. Эти заболевания имеют ряд сходных клинических признаков: острое начало, головная боль, повышение температуры тела, миалгии, боли в пояснице, жажда, снижение диуреза и т.д. Наибольшие трудности в диагностике представляют легкие формы ГЛПС, что связано с нечеткой клинической картиной у этих больных, особенно в первые дни заболевания.

Как известно, единственным подтверждением диагноза ГЛПС является наличие специфических антител к вирусу ГЛПС в сыворотке крови обследуемых больных, выявляемых непрямым методом флюоресцирующих антител (НМФА). Антитела появляются в крови на 3-7 сутки заболевания и достигают максимума на 17-21 день. Необходимо исследовать парные сыворотки крови, взятые при поступлении в стационар и через 7-9 дней после первой пробы. Диагностически достоверным следует считать титр антител 1:80 и выше и нарастание титра антител в 2-4 раза и более. (Применение культурального антигена для серодиагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом с помощью флюоресцирующих антител. Методические рекомендации. Е.А.Ткаченко и др. М., 1984.)
Известно, что специфические антитела сохраняются в крови у реконвалесцентов в течение 10 лет и более, оставаясь на достаточно высоком уровне 1: 1024 и авторы называют их “анамнестическими” антителами к вирусу ГЛПС. (Серологические исследования у реконвалесцентов при ГЛПС. Ж. Клиническая медицина. N2. 1983. С. – 60-62. И.М. Загидуллин, Е.А.Ткаченко, Е.В.Лещинская.)
Пациентам-реконвалесцентам с клиническими проявлениями, сходными с ГЛПС и ОРВИ, по классической схеме проводят серологическую реакцию (НМФА) для выявления специфических к вирусу ГЛПС антител в сыворотке крови. Обнаружив “анамнестические” специфические к вирусу ГЛПС антитела в первой и второй пробах сыворотки крови у реконвалесцентов можно ошибочно (повторно) установить диагноз ГЛПС. (Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом. Б.С.Сиротин. 1979. Хабаровск).

Цель изобретения – повышение точности дифференциальной диагностики пациентов, перенесших ГЛПС.

Для уточнения диагноза предложено использовать для реакции НМФА в данном случае не только сыворотку крови обследуемых пациентов-реконвалесцентов, а и слезную жидкость, взятую не ранее 5-7 суток с начала заболевания, чтобы в последующем исключить применение сыворотки крови в реакции НМФА для дифференциальной диагностике ГЛПС с ОРВИ. Характер свечения при исследовании слезной жидкости аналогичен таковому при индикации антител в сыворотке крови при ГЛПС в реакции НМФА.

Способ осуществляется следующим образом: серологическую реакцию проводим с диагностикумом ГЛПС для НМФА, который представляет собой равномерно нанесенные на предметное стекло по 0,005 мл высушенных, инактивированных и фиксированных ацетоном суспензий клеток VERO-E6, содержащие антигены первого (Хантаан), второго (Пуумала) и третьего (Сеул) серотипов ГЛПС. Культуральный, поливалентный антиген вируса ГЛПС обладает способностью специфически связываться с антителами к этому вирусу в сыворотке крови больных людей. После хранения диагностикума при низкой температуре антигенные препараты просушивают, промывают в течение 2 мин дистиллированной водой, высушивают при комнатной температуре и наносят на них слезную жидкость, взятую у реконвалесцентов не ранее 5-7 дня с начала заболевания. Препараты помещают во влажную камеру и инкубируют при 37^oC в течение 30 мин или при 6^oC в течение 18 ч. После окончания инкубации препараты трехкратно по 3 мин выдерживают в физрастворе, промывая дистиллированной водой, и высушивают при комнатной температуре в течение 15 мин, затем на препараты наносят люминесцирующую сыворотку против глобулинов человека. Препараты инкубируют во влажной камере при 37^oC в течение 30 мин, трехкратно по три минуты выдерживают в физрастворе, промывают дистиллированной водой и высушивают при комнатной температуре. Препараты исследуют при помощи люминесцентного микроскопа. Положительным результатом для диагностики ОРВИ является отсутствие антител к антигену вируса ГЛПС в слезной жидкости.

Пример 1.

Больной Н., история болезни N 1667, в начале января был госпитализирован с подозрением на ГЛПС. Клинические и лабораторные данные подтвердили прогноз. Диагноз ГЛПС, средней тяжести. После проведенного соответствующего лечения выписан через 25 дней с выздоровлением. Вторично остро заболел 26 февраля, обратился в поликлинику по месту жительства и участковый терапевт направил на госпитализацию в инфекционную больницу с подозрением на ГЛПС. Госпитализирован 27 февраля.

Осмотр окулиста 27 февраля: Vis 1,0:1,0, конъюнктива гиперемирована, влажные сосуды склеры инъецированы, общий конъюнктивальный индекс – 17, оптические среды глаз прозрачные, глазное дно без особых изменений.

Для уточнения диагноза больному на 2 день с начала заболевания взяли сыворотку крови для проведения реакции НМФА. Результат – в сыворотке крови обнаружены специфические к вирусу ГЛПС антитела (титр 1:1024). Во второй пробе сыворотки крови и слезной жидкости, взятой через 7 дней для повторной реакции НМФА, в сыворотке крови титр антител также 1:1024, а в слезной жидкости антител нет. В двух пробах сыворотки крови титр антител оставался неизменным (1:1024), то есть не нарастал, значит были обнаружены “анамнестические” антитела к вирусу ГЛПС. Отсутствие специфических к вирусу ГЛПС антител в двух пробах слезной жидкости на 2 и 7 дни заболевания позволили исключить ГЛПС. Диагноз: ОРВИ.

Пример 2.

Больной Г., история болезни N 1668, 26 февраля направлен из ЦРБ с подозрением на ГЛПС. Предварительный диагноз приемного отделения: ГЛПС, тяжелая форма.

Осмотр окулиста 27 февраля: Vis 0,6:0,6, слабый туман перед глазами, движения глазных яблок болезненны, конъюнктива гиперемирована, влажная, отечная, сосуды склеры инъецированы, общий конъюнктивальный индекс – 24, чувствительность роговицы снижена, оптические Среды глаз прозрачные, диск зрительного нерва с ровными краями, слабо гиперемирован, изменение соотношения диаметра артерий и вен, рефлекс макулы слабый.

Больному в первый день поступления в стационар взяли сыворотку крови для исследования на реакцию НМФА. В результате: в сыворотке крови специфических к вирусу ГЛПС антител не обнаружено. Через 7 дней пребывания в стационаре взяли сыворотку крови и слезную жидкость для реакции НМФА. Результат: в сыворотке крови и в слезной жидкости, также не обнаружены специфические антитела к вирусу ГЛПС.

Диагноз: ОРВИ.

Таким образом, наличие “анамнестических” специфических антител к вирусу ГЛПС в сыворотке крови у обследуемых пациентов-реконвалесцентов и отсутствие их в слезной жидкости позволяет исключить ГЛПС, и наоборот, факт присутствия специфических к вирусу ГЛПС антител в слезной жидкости позволит исключить ОРВИ и подтвердить ГЛПС.

Преимуществом предлагаемого способа дифференциальной диагностики ГЛПС с ОРВИ, с применением для реакции НМФА слезной жидкости, является диагностическая точность, а также достаточно брать слезную жидкость на 5-7 сутки с начала заболевания однократно. Устраняется необходимость исследования крови больных, соответственно предупреждает постпункционные осложнения, перенос вирусной и внутрибольничной инфекций, исключает утилизацию остатков инфицированной крови в специальных условиях. Не требуется использование разовых шприцов.

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом и острой респираторной вирусной инфекции у пациента, перенесшего геморрагическую лихорадку с почечным синдромом, включающий выявление специфических антител к геморрагической лихорадке с почечным синдромом в биологической жидкости, отличающийся тем, что однократно проводят исследование слезной жидкости, взятой не ранее 5 – 7 суток с начала заболевания, с диагностикумом геморрагической лихорадки с почечным синдромом непрямым методом иммунофлюоресценции, и при отсутствии в слезной жидкости специфических антител к вирусу геморрагической лихорадки с почечным синдромом диагностируют острую респираторную вирусную инфекцию, а при наличии антител в слезной жидкости – геморрагическую лихорадку с почечным синдромом.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 02.03.2001

Номер и год публикации бюллетеня: 35-2002

Извещение опубликовано: 20.12.2002