Патент на изобретение №2159283
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ СТРЕПТОКОККОВ
(57) Реферат: Изобретение предназначено для накопления биомассы стрептококков. Среда содержит компоненты в следующем соотношении, г на 1 л дистиллированной воды: лимонная кислота 4,9-5,0, фосфорнокислый калий двухзамещенный 4,9-5,0, хлористый натрий 1,9-2,0 сернокислый магний 4,9-5,0, сернокислое железо 0,04-0,05, аспарагин 0,9-1,0, гликокол 0,9-1,0 и глицерин 30,0-31,0 мл. Среда обеспечивает хороший и бурный рост стрептококков с первого дня инкубирования и позволяет при 4-5-кратном пассировании и плотности посева 90-100 млн. микробных клеток (м.к.) в 1 мл среды стабилизировать и обеспечить максимальное накопление биомассы до 10-12 млрд. м.к. в 1 мл культуральной жидкости. Изобретение относится к микробиологии, в частности к разработке питательной среды для выращивания стрептококков. Известно использование бульона Хоттингера и питательной среды для выращивания энтерококков, содержащей панкреатический гидролизат серопротеина или альбумина, полученных из отходов глобулинового производства (Бошьян Е.Г с соавт. А.С. N 1412283 и N 1418284, 1986 г.). Недостатком является сложность технологического процесса приготовления питательной среды, трудности в ее стандартизации. За прототип взята среда N 2 Курской биофабрики, используемая в биологической промышленности для выращивания микобактерий туберкулеза и состоящая из следующих компонентов в граммах на 1 литр дистиллированной воды: лимонная кислота – 10,0; фосфорнокислый калий двухзамещенный – 5,0; лимоннокислый аммоний – 5,0; хлористый натрий – 0,5; сернокислый магний – 0,5; сернокислое железо – 0,05; сернокислый цинк – 0,1; хлористый кобальт – 0,002; глицерин – 50; аспарагин – 1,0; гликокол – 1,0. Среда представляет собой солевые питательные растворы, отличающиеся высокими питательными свойствами для микроорганизмов. Попытки использовать для выращивания стрептококков данную синтетическую среду не имели положительного результата. Пересеянная с мясо-пептонного бульона (МПБ) на жидкую синтетическую среду культура стрептококков не обеспечивала надлежащий рост микроорганизмов. В отдельных пробирках, флаконах, колбах рост биомассы стрептококков составлял не более 1 – 2 млрд. микробных тел в 1 мл, что неэффективно. Цель предлагаемого изобретения – разработка среды для выращивания стрептококков с большим содержанием микробных тел в 1 мл культуральной жидкости, пригодной для промышленного культивирования стрептококков при производстве стрептококковых антигенов и вакцинных препаратов. Разработанная среда содержит компоненты в следующем соотношении на 1 литр дистиллированной воды: лимонная кислота – 4,9 – 5,0; фосфорнокислый калий двухзамещенный – 4,9 – 5,0; хлористый натрий – 1,9 – 2,0; сернокислый магний – 4,9 – 5,0; сернокислое железо – 0,04 – 0,05; аспарагин – 0,9 – 1,0; гликокол – 0,9 – 1,0 и глицерин 30,0 – 31,0 мл. Результаты исследований показали, что при увеличении содержания в питательной среде хлористого натрия с 0,5 до 1,5; 2,0; 2,5 г обеспечивалось последовательное накопление биомассы стрептококков соответственно 2 – 2,5; 3 – 3,5; 3,5 – 4,0; 3,5 – 4,0 млрд. микробных тел в 1 мл культуральной жидкости. Дальнейшее, начиная с 2 – 2,5 г/л, увеличение содержания в питательной среде хлористого натрия не сопровождалось увеличением биомассы стрептококков. Лучшие результаты по накоплению биомассы стрептококков, до 8 – 9 млрд. микробных тел в 1 мл культуральной жидкости были получены на вариантах сред при уменьшении количества лимонной кислоты с 10 г до 5 г. Дальнейшее уменьшение количества лимонной кислоты в питательной среде до 4,8 – 4,5 г/л не сопровождалось увеличением биомассы стрептококков. Увеличение содержания в питательной среде сернокислого магния с 0,5 г до 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 5,5 г/л обеспечивало последовательное накопление биомассы стрептококков 4 – 4,5; 5 – 6; 6 – 7; 7,5 – 8; 8,5 – 9; 8,5 – 9 млрд. микробных тел в 1 мл культуральной жидкости. Дальнейшее, начиная с 5 – 5,5 г/л, увеличение содержания в питательной среде сернокислого магния не сопровождалось увеличением биомассы стрептококков. Снижение в питательной среде глицерина с 50 до 30 мл не влияло ни на увеличение, ни на снижение интенсивности роста и накопления биомассы стрептококков. В то же время дальнейшее уменьшение содержания в питательной среде глицерина, начиная с 30 до 25 мл, сопровождалось снижением накопления биомассы стрептококков. Таким образом установлено, что оптимальное количество содержания глицерина в питательной среде определено в пределах 30 – 31 мл. Следует отметить, что в ходе поисковых опытов нами не отмечено влияние на рост стрептококков хлористого кобальта, лимоннокислого аммония и сернокислого цинка, в связи с чем они были исключены из компонентов нового варианта среды. Таким образом, использование данного варианта жидкой солевой синтетической питательной среды обеспечивало хороший и бурный рост стрептококков с первого дня инкубирования и позволяло при 4-5-кратном пассировании на ней микробов, при плотности посева до 90 – 100 млрд. микробных тел на 1 мл среды, стабилизировать и обеспечить максимальное накопление биомассы до 10 – 12 млрд. микробных тел в 1 мл культуральной жидкости. По данным Панина А. Н. (Автореф. дис. д.в.н., Стрептококкозы свиней, 1992, 27 с. ), для приготовления вакцинного препарата накопление биомассы стрептококков не должно быть менее 4 млрд./см3. Следовательно, данный вариант солевой синтетической питательной среды вполне пригоден для использования в биологической промышленности при производстве стрептококковых антигенов. Среду готовят путем последовательного растворения или предварительно смешанных компонентов в дистиллированной воде с последующей нейтрализацией аммиаком до pH 7,0 – 7,1 перед автоклавированием. Формула изобретения
Лимонная кислота – 4,9 – 5,0 Фосфорнокислый калий двузамещенный – 4,9 – 5,0 Хлористый натрий – 1,9 – 2,0 Сернокислый магний – 4,9 – 5,0 Сернокислое железо – 0,04 – 0,05 Аспарагин – 0,9 – 1,0 Гликокол – 0,9 – 1,0 Глицерин – 30,0 – 31,0 мл MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 21.02.2000
Номер и год публикации бюллетеня: 5-2003
Извещение опубликовано: 20.02.2003
|
||||||||||||||||||||||||||
