Патент на изобретение №2312354
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЭСТРОГЕН- И ПРОГЕСТЕРОНЗАВИСИМОЙ ПАТОЛОГИИ ГЕНИТАЛИЙ
(57) Реферат:
Изобретение относится к медицине, в частности к диагностическим методам в гинекологии. Для осуществления способа определяют содержание рецепторов эстрадиола и прогестерона в мононуклеарной фракции клеток периферической крови. При величине более 210 и 2050 рецепторов на клетку соответственно диагностируют эстроген- и прогестеронзависимую патологию гениталий. Использование способа позволяет диагностировать эстроген- и прогестеронзависимую патологию гениталий без взятия биоптата измененной ткани. 1 табл.
(56) (продолжение): CLASS=”b560m”steroid receptors in human myometrium and fibroids: changes during the menstrual cycle and gonadotropin-releasing hormone treatment., J Clin Endocrinol Metab. 1998 Nov; 83(11):4092-6. КРАСНОПОЛЬСКИЙ В.И. и др. Беременность и прогестеронзависимая миома матки. Российский вестник акушера-гинеколога, 2003, т.3, №3, с.55-57.
Изобретение относится к медицине, в частности к гинекологии. Увеличение количества рецепторов эстрадиола и прогестерона в измененной ткани свидетельствует о гормональной зависимости патологического процесса. Наиболее социально значимыми гормонозависимыми патологиями гениталий в настоящее время можно считать гиперплазии эндометрия, эндометриоз, миому матки (Серов В.Н. и соавт. Гинекологическая эндокринология. Москва: МЕД-прессинформ, 2004, 520 с.). Современная диагностика гормонально-зависимых состояний гениталий включает в себя: ультразвуковое исследование (Манухин И.Б. и соавт. Клинические лекции по гинекологии. – М.: Мед. информационное агентство, 2001, 243 с.) регистрирует объемные образования, например, толщину эндометрия. По данным Манухина И.Б., нормальному эндометрию в фазе секреции соответствуют значения – 9,8±2,1 мм, гиперплазии эндометрия – 15,4±10,4 мм, аденокарциноме эндометрия – 20,12±2,04 мм. Этот метод определяет лишь объемные образования в ткани, но не позволяет судить об их гормональной зависимости. Для подтверждения предварительного диагноза, основанного на данных М-ЭХО (УЗИ), используют: – гистологическое исследование биоптата. Он позволяет поставить диагноз конкретной морфологической нозологии. Однако и этот метод не позволяет решить вопрос о гормональной зависимости патологического процесса. – Определение гонадотропинов и половых стероидов в периферической крови (Сметник В.П., Тумилович Л.Г. Неоперативная гинекология. – М.: Мед. информационное агентство, 2000, 591 с.) необходимо для оценки гормонального фона заболевания, изменение которого зачастую инициирует и сопутствует патологическому процессу. Изменение гормонального фона (например, абсолютная или относительная гиперэстрогенемия) у пациентки служит косвенным подтверждением гормональной зависимости патологического процесса, но не отражает состояние рецепторного статуса самой патологически измененной ткани. Наиболее близким к предлагаемому способу диагностики эстроген- и прогестеронозависимости патологии гениталий является определение уровня рецепторов эстрадиола и прогестерона в биоптате (Краснопольский В.И. и соавт. «Рецепция половых стероидов при гиперпластических процессах в эндометрии у женщин позднего репродуктивного возраста» / Ж. Росс. Вестник акушера-гинеколога. – М.: МедиаСфера, 2005, т.5, №2, стр.7-9). Недостатком метода является его инвазивность, а именно забор биоптата патологически измененной ткани. Задача изобретения – неинвазивный способ диагностики эстроген- и прогестеронозависимости патологического процесса гениталий. Поставленная задача решается способом диагностики эстроген- и прогестеронзависимой патологии гениталий, заключающимся в том, что определяют количество рецепторов эстрадиола и прогестерона в мононуклеарной фракции клеток периферической крови и при увеличении более 210 и 2050 рецепторов на клетку соответственно диагностируют эстроген- или прогестеронзависимую патологию. Заявляемое изобретение не очевидно для специалистов, работающих в области эндокринологической гинекологии. Методика определения рецепторов прогестерона и эстрадиола в мононуклеарных клетках крови основана на известном методе определения указанных рецепторов в фракции плазматических мембран миоутероцитов [Бассалык. Рецепторы стероидных гормонов в опухолях человека. М., Медицина, 1987, стр.198-202]. Временные и концентрационные параметры насыщения связывания метки подобраны экспериментально. Для количественного определения рецепторов прогестерона и эстрадиола в мононуклеарных клетках готовят стерильный пластиковый планшет (96 круглодонных лунок): во все рабочие лунки вносят по 10 мкл спиртового раствора 3H-прогестерона или 3H-эстрадиола («Amersham» GB) из расчета получения в инкубационной среде конечных концентраций 20 и 5 нМ соответственно. С целью ингибирования специфического связывания стероидов используют двухсоткратный избыток немеченого прогестерона и диэтилстильбэстрола соотвественно («Merck», Германия), которые в спиртовом растворе вносят в лунки по стандартной схеме. 200-кратный избыток дексаметазона («Merck», Германия) добавляют в рабочие лунки с целью подавления перекрестного связывания глюкокортикоидов с рецепторами прогестерона. После внесения в лунки спиртовых растворов указанных стероидов спирт выпаривают в токе азота. За 30 минут до инкубации в лунки вносят по 50 мкл среды Хенкса. Во все подготовленные лунки планшета вносят по 50 мкл суспензии мононуклеарных клеток (500 млн клеток/100 мкл) и инкубируют 60 минут – для рецепторов прогестерона, 30 минут – для определения рецепторов эстрадиола при комнатной температуре. Для отделения несвязанной метки ресуспендированные клетки фильтруют через стеклянные фильтры (Whatman Glass Micro Fiber Filter GF/B – 25 mm dia.), которые отмывают 100-кратным избытком ледяного Хенкса и помещают в сцинтилляционные флаконы. После выпаривания фильтры заливают 5 мл сцинтилляционной жидкости и через 60 минут радиометрируют. Все исследования проводят в триплетах. Подсчет специфического связывания производят по формуле: [(T-NSB)·k/n]·N, где Т – общее связывание, NSB – неспецифическое связывание, n -количество клеток в лунке, k – коэффициент пересчета cpm в фемтомоли 3H-стероида, N – число Авагадро. Нижеследующие примеры иллюстрируют способ по изобретению. Пример 1. Больная Б., 42 лет направлена в НКО МОНИИАГ 11.03.04 г. с диагнозом: рецидивирующая гиперплазия и полип эндометрия для определения дальнейшей тактики лечения. Гиперполименорея. В анамнезе 2 раздельных диагностических выскабливания (РДВ) в 05.03 г. и в 10.03 г. Данные гистологического заключения: железистая гиперплазия эндометрия и железисто-фиброзный полип эндометрия. Диагноз рецидивирующей гиперплазии эндометрия был подтвержден на основании клинических данных и результатов УЗИ на 7 день цикла: М-эхо 12 мм и в дне матки полип диаметром 10 мм. 13.04.04 г. произведена гистероскопия и РДВ. Эндометрий поздней стадии секреции с элементами базальной и микрожелезистой гиперплазии. Фрагменты фиброзно-железистого полипа эндометрия. Параметры рецепции женских половых стероидов в мононуклеарной фракции клеток периферической крови и биоптате эндометрия были проведены параллельно, при этом кровь забирали из локтевой вены у пациентки непосредственно перед выскабливанием. При определении количества рецепторов эстрадиола и прогестерона в мононуклеарных клетках периферической крови получили следующие величины: для эстрадиола – 875 рец/клетке и для прогестерона – 2541 рец/клетке, что позволило нам диагностировать эстроген- и прогестеронзависимость патологического процесса. В биоптате эндометрия, полученном в ходе диагностического выскабливания, уровень цитозольных рецепторов эстрадиола и прогестерона составил 24,1 и 25,9 фмоль/мг белка цитозоля соответственно. Таким образом, результаты исследования рецепторного профиля и биоптата эндометрия подтвердили полученные нами, в ходе исследования МНК, данные о гормональной зависимости гиперплазии эндометрия у данной пациентки. На основании приведенных данных была назначена и проведена противорецидивная гормональная терапия дюфастоном 20 мг/сутки с 5 по 25 день цикла 6 месяцев с положительным эффектом. В течение проводимой терапии и через 12 месяцев после ее окончания рецидива не было. Пример 2. Пациентка К., 48 лет, обратилась в отделение гинекологической эндокринологии с жалобами на гиперполименорею и неоднократные дисфункциональные маточные кровотечения в течение 3-х лет. В анамнезе по поводу меноррагий по месту жительства произведено 2 РДВ. Гистологическое заключение: железистая гиперплазия с явлениями хронического эндометрита. По месту жительства получала гормональную терапию норколут и примолютнор в дозе 10 мг с 5 по 25 день цикла – без эффекта. За год до нашего исследования получала дюфастон 20 мг в сутки с 16 по 25 день цикла – без эффекта после отмены лечения повторные меноррагии, в связи с чем была направлена в МОНИИАГ. При УЗИ: толщина эндометрия (М-эхо) была 13 мм. В левом яичнике определена ретенционная киста диаметром 3,9 см. Заключение: гиперплазия эндометрия, аденомиоз, миома матки небольших размеров. Пациентке произведено раздельное диагностическое выскабливание под контролем гистероскопии. Гистологическое заключение: простая железистая гиперплазия эндометрия с признаками хронического воспаления. Проведены исследования: рецепторного профиля мононуклеарной фракции периферической крови и биоптатов эндометрия методами, описанными в примере 1. Результаты: рецепторы эстрадиола и прогестерона – 160 и 0 рец/клетке в МНК соотвественно; 7,6 и 0 фмоль/мг белка цитозоля биоптата эндометрия соответственно. Следовательно, патологический процесс в эндометрии не является гормонзависимым. Больной предложен и проведен альтернативный метод лечения – пангистерэктомия. Нами показано, что параметры рецепторного профиля эстрадиола-17
Учитывая тесную положительную корреляцию между уровнем рецепторов половых стероидов в МНК и цитозоле биоптата эндометрия пациенток с гиперплазиями, считаем правомерным использование параметров рецепции эстрадиола и прогестерона в мононуклеарной фракции клеток периферической крови для оценки гормональной зависимости патологического процесса в эндометрии. Сравнительный анализ уровня рецепторов половых стероидов в МНК и цитозоле эндометрия при гиперплазии показал, что пороговыми значениями гормональной зависимости можно считать количество рецепторов эстрадиола и прогестерона в МНК 210 и 2050 рец/кл (что соответствует При проведении диагностики эстроген- и прогестеронзависимой патологии у 59 больных была подтверждена его возможность использования для целей диагностики и его высокая точность.
Формула изобретения
Способ диагностики эстроген- и прогестеронзависимой патологии гениталий путем исследования содержания рецепторов эстрадиола и прогестерона в биологическом материале, отличающийся тем, что определяют содержание рецепторов в мононуклеарной фракции клеток периферической крови и при величине более 210 и 2050 рецепторов на клетку соответственно диагностируют эстроген- и прогестеронзависимую патологию гениталий.
MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 13.07.2008
Извещение опубликовано: 10.07.2010 БИ: 19/2010
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
и прогестерона в мононуклеарной фракции клеток (МНК) периферической крови соответствуют (тесно и положительно коррелируют r=0,77 и 0,9 соответственно) с аналогичными параметрами эндометрия пациенток с гиперплазиями (табл.1).
10 фмоль рецепторов эстрадиола и прогестерона в цитозоле эндометрия соответственно).