Патент на изобретение №2159123

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ЖЕЛЧЕГОННОЙ И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬЮ

(57) Реферат:

Изобретение относится к фармации и касается способа получения средства из растительного сырья, обладающего желчегонной и противовоспалительной активностью. Корневища и корни девясила высокого, корневища и корни софоры желтоватой, корневища и корни кровохлебки лекарственной, корневища имбиря лекарственного, древесину бузины сибирской, плоды боярышника кроваво-красного и плоды яблони ягодной экстрагируют 25-30% этиловым спиртом в соотношении сырье-экстрагент, равном 1:(18-20), при 60-65°С и постоянном перемешивании. Процесс повторяют трижды. Время экстракции при 1-ом контакте фаз – 120 мин, при 2-ом и 3-ем контактах фаз – 60 мин. Извлечения фильтруют, объединяют, упаривают и очищают сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают, высушивают в вакуумной сушилке и измельчают. Выход готового продукта составляет 22,20,6% от массы растительного сырья. Изобретение позволяет повысить активность средства. 12 табл.

Изобретение относится к области фармации и касается способа получения средства из растительного сырья, обладающего желчегонной и противовоспалительной активностью.

Заболевания печени – вирусные, хронические и токсические гепатиты и связанные с ними заболевания желчного пузыря и желчевыводящих путей, являются одними из наиболее опасных и широко распространенных. Во всем мире они занимают значительное место и являются основными среди причин нетрудоспособности и смертности. В последнее десятилетие, по данным ВОЗ, отмечается тенденция к росту заболеваемости.

В настоящее время в фармакотерапии и профилактике заболеваний органов гепатобилиарной системы используются различные группы лекарственных средств (как правило, синтетические), применяемые преимущественно в качестве симптоматических и, кроме того, обладающие зачастую значительной гепатотоксичностью в процессе их химической трансформации в организме. Все это обусловливает проведение поиска новых лекарственных средств для лечения заболеваний печени среди природных видов сырья, в частности сырья растительного происхождения, как практически не имеющего побочных эффектов.

Известен способ получения отвара из сбора “7 драгоценных”, применяемого в тибетской медицине как противовоспалительное и очищающее средство. Для приготовления отвара сбор заливают водой в соотношении 1:10, настаивают на кипящей водяной бане при частом перемешивании в течение 30 мин, охлаждают при комнатной температуре 10 мин, процеживают (отжимая растительное сырье) и прибавляют воду до требуемого объема извлечения [2].

Недостатком данного способа является менее выраженная желчегонная и противовоспалительная активность получаемого средства по сравнению со средством, получаемым по заявляемому способу.

Задачей изобретения является повышение желчегонной и противовоспалительной активности средства за счет более высокого содержания действующих веществ (суммы фенольных соединений).

Для достижения указанной цели растительный материал (сырье) – корневища и корни девясила высокого (2 части), корневища и корни софоры желтоватой (2 части), корневища и корни кровохлебки лекарственной (2 части), корневища имбиря лекарственного (1 часть), древесину бузины сибирской (4 части), плоды боярышника кроваво-красного (2 части) и плоды яблони ягодной (2 части) – экстрагируют 25-30% этиловым спиртом в соотношении сырье-экстрагент, равном 1: (18-20) (с учетом коэффициента набухания), при температуре 60-65^oC и постоянном перемешивании. Процесс повторяют трижды. Время экстракции при 1-ом контакте фаз – 120 мин, при 2-ом и 3-ем контактах фаз – 60 мин. Извлечения фильтруют через серошинельное сукно, объединяют, упаривают до 1/3 первоначального объема и очищают сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема, высушивают в вакуумной сушилке и измельчают. Выход готового продукта составляет 22,20,6% от массы растительного сырья.

Предложенный способ позволяет получить конечный продукт, представляющий собой мелкодисперсный порошок коричневого цвета с приятным запахом и горьким вкусом, с содержанием влаги не более 5%.

Способ иллюстрируется нижеследующими примерами.

Пример 1
100 г корневищ и корней девясила высокого, 100 г корневищ и корней софоры желтоватой, 50 г корневищ имбиря лекарственного, 200 г древесины бузины сибирской и 100 г плодов боярышника кроваво-красного измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 1 мм (сито N 10 ГОСТ 214-83), 100 г корневищ и корней кровохлебки лекарственной и 200 г плодов яблони ягодной измельчают до размера частиц диаметром 2 мм (сито N 20 ГОСТ 214- 83). Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 13,5 л 25% этилового спирта в соотношении сырье-экстрагент, равном 1: 18 с учетом коэффициента набухания сырья. Экстрагируют при температуре 60^oC и постоянном перемешивании в течение 120 мин. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Проводят еще две экстракции в течение 60 и 60 мин, подавая каждый раз в экстрактор 25% спирт в количестве, равном объему слитого извлечения. 1-ый слив – 10,47 л, 2-ой слив – 10,50 л, 3-ий слив – 10,52 л. Объединенные извлечения упаривают до 1/3 первоначального объема и очищают сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема, высушивают в вакуумной сушилке при температуре 60^oC в течение 8 ч и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 163 г готового продукта, что составляет 21,7% от массы исходного сырья. Сухой экстракт представляет собой мелкодисперсный порошок коричневого цвета с приятным запахом и горьким вкусом; комкуется, содержание влаги 4,05%.

Исследовали острую токсичность полученного сухого экстракта “7 драгоценных” по общепринятому методу Кербера [10]. Опыты проведены на 35 беспородных белых мышах обоего пола с массой 20-25 г. Испытуемый экстракт вводили однократно внутрибрюшинно в дозах 1000-5000 мг/кг. Наблюдения за животными проводили в течение 14 суток. Проведенные исследования показали, что LD₅₀ испытуемого экстракта при внутрибрюшинном введении составляет 3470 мг/кг. При внутрижелудочном введении экстракта не отмечали гибели животных и не наблюдали признаков интоксикации в течение всего срока наблюдения, что позволяет классифицировать испытуемое средство как малотоксичное вещество по классификации Сидорова [9].

Оценку желчегонной активности сухого экстракта “7 драгоценных” проводили на 24 беспородных белых крысах обоего пола с массой 160-200 г по общепринятой методике [8]. Крыс наркотизировали внутрибрюшинным введением 1% раствора барбамила в объеме 0,8 мл/100 г массы животного. Желчь получали с помощью полиэтиленовой канюли, вставленной в общий желчевыводящий проток, через каждый час в течение 5 часов. Водный раствор сухого экстракта “7 драгоценных” вводили в двенадцатиперстную кишку шприцом в дозе 300 мг/кг. Крысам контрольной группы вводили дистиллированную воду в аналогичном объеме. В качестве препарата сравнения использовали отвар сбора “7 драгоценных”, приготовленного в соотношении 1:10 [2]. Препарат сравнения вводили в объеме 10 мл/кг. О степени желчегонной активности судили по скорости секреции и общему количеству выделенной желчи, содержанию в желчи желчных кислот [4], а также по количеству выделенных с желчью билирубина и холестерина. Общее количество холестерина определяли по методике С.М. Дроговоз [3], а билирубина – по методу Ван дер Берга в модификации Н.П. Скакуна [7]. Статистическая обработка полученных результатов проведена по Е.В. Монцевичюте-Эрингене [5].

Из приведенных в таблице 1 данных следует, что сухой экстракт “7 драгоценных” оказывает выраженное желчегонное действие. В частности, скорость секреции желчи по сравнению с аналогичным показателем контроля достоверно возрастала на 25-31% с повышением общего количества выделенной желчи на 29%. Холеретическая реакция сохранялась на высоком уровне в течение 4 часов опыта. Наряду с этим экстракт “7 драгоценных” стимулировал синтез и выделение желчных кислот, суммарная концентрация которых превышала данный показатель контроля на 29%. Кроме того, испытуемое средство способствовало секреции билирубина с желчью, концентрация которого повышалась по сравнению с контролем на 21%. При этом желчегонная активность предлагаемого средства была выше, чем у препарата сравнения.

Противовоспалительную активность полученного средства оценивали по влиянию на процессы альтерации и регенерации тканей. Эксперименты проведены на 18 беспородных белых крысах обоего пола с массой 150-160 г. Воспроизведение альтерации осуществляли по методу Менкина [6] путем подкожного введения 0,5 мл 9% раствора уксусной кислоты в предварительно выстриженную область спины; одновременно вводили внутрибрюшинно раствор декстрана в дозе 300 мг/кг. Первое введение экстракта “7 драгоценных” (в той же дозе, как и в предыдущей серии опытов) осуществляли за 1 час до введения уксусной кислоты, а затем ежедневно в течение 25 дней. В качестве препарата сравнения использовали отвар сбора “7 драгоценных”, приготовленного в соотношении 1:10 [2]. Препарат сравнения вводили в объеме 10 мл/кг. Крысам контрольной группы вводили дистиллированную воду в аналогичном объеме. На 8 и 29 сутки опыта оценивали площадь некротизированной ткани путем нанесения контура некроза на прозрачную пленку. Полученные результаты представлены в таблице 2.

Из данных, приведенных в таблице 2, следует, что курсовое введение экстракта “7 драгоценных” в дозе 300 мг/кг оказывает противовоспалительное действие, снижая степень деструкции и стимулируя регенерацию тканей. В частности на 8 сутки опыта на фоне введения экстракта “7 драгоценных” площадь некротизированной ткани уменьшалась на 33% по сравнению с контролем, а крыс, получавших препарат сравнения – лишь на 15% (различие не достоверно). На 29 сутки опыта отмечено выраженное антиальтеративное действие экстракта “7 драгоценных”, который эффективно стимулировал регенераторные процессы, следствием чего являлось уменьшение площади некротизированных тканей на 57%, тогда как у крыс, получавших препарат сравнения, площадь некроза уменьшалась на 27%. Таким образом, экстракт “7 драгоценных” по противовоспалительному действию превосходит препарат сравнения.

Пример 2.

100 г корневищ и корней девясила высокого, 100 г корневищ и корней софоры желтоватой, 50 г корневищ имбиря лекарственного, 200 г древесины бузины сибирской и 100 г плодов боярышника кроваво-красного измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 1 мм (сито N 10 ГОСТ 214-83), 100 г корневищ и корней кровохлебки лекарственной и 200 г плодов яблони ягодной измельчают до размера частиц диаметром 2 мм (сито N 20 ГОСТ 214-83). Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 14,25 л 30% этилового спирта в соотношении сырье-экстрагент равном 1: 19 с учетом коэффициента набухания сырья. Экстрагируют при температуре 60^oC и постоянном перемешивании в течение 120 мин. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Проводят еще две экстракции в течение 60 и 60 мин, подавая каждый раз в экстрактор 30% спирт в количестве, равном объему слитого извлечения. 1-ый слив – 11,20 л, 2-ой слив – 11,15 л, 3-ий слив – 11,20 л. Объединенные извлечения упаривают до 1/3 первоначального объема и очищают сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема, высушивают в вакуумной сушилке при температуре 60^oC в течение 8 ч и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 168 г готового продукта, что составляет 22,4% от массы исходного сырья. Сухой экстракт представляет собой мелкодисперсный порошок коричневого цвета с приятным запахом и горьким вкусом; комкуется, содержание влаги 3,92%.

Оценку желчегонной активности сухого экстракта “7 драгоценных” проводили на 24 беспородных белых крысах обоего пола с массой 160-200 г по методике, описанной в примере 1.

Из приведенных в таблице 3 данных следует, что сухой экстракт “7 драгоценных” оказывает выраженное желчегонное действие. В частности скорость секреции желчи, по сравнению с аналогичным показателем контроля, достоверно возрастала на 28-33% с повышением общего количества выделенной желчи на 31%. Холеретическая реакция сохранялась на высоком уровне в течение 4 часов опыта. Наряду с этим экстракт “7 драгоценных” стимулировал синтез и выделение желчных кислот, суммарная концентрация которых превышала данный показатель контроля на 31%. Кроме того, испытуемое средство способствовало секреции билирубина с желчью. При этом желчегонная активность предлагаемого средства была выше, чем у препарата сравнения.

Противовоспалительную активность полученного средства оценивали по влиянию на процессы альтерации и регенерации тканей. Эксперименты поведены на 18 беспородных белых крысах обоего пола с массой 150-160 г по схеме, описанной в примере 1. Полученные результаты представлены в таблице 4.

Из данных, приведенных в таблице 4, следует, что курсовое введение экстракта “7 драгоценных” в дозе 300 мг/кг оказывает противовоспалительное действие, снижая степень деструкции и стимулируя регенерацию тканей. В частности на 8 сутки опыта на фоне введения экстракта “7 драгоценных” площадь некротизированной ткани уменьшалась на 34% по сравнению с контролем, а крыс, получавших препарат сравнения – лишь на 15% (различие не достоверно). На 29 сутки опыта отмечено выраженное антиальтеративное действие экстракта “7 драгоценных”, который эффективно стимулировал регенераторные процессы, следствием чего являлось уменьшение площади некротизированных тканей на 38%, тогда как у крыс, получавших препарат сравнения, площадь некроза уменьшалась на 27%. Таким образом, экстракт “7 драгоценных” по противовоспалительному действию превосходит препарат сравнения.

Пример 3.

100 г корневищ и корней девясила высокого, 100 г корневищ и корней софоры желтоватой, 50 г корневищ имбиря лекарственного, 200 г древесины бузины сибирской и 100 г плодов боярышника кроваво-красного измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 1 мм (сито N 10 ГОСТ 214-83), 100 г корневищ и корней кровохлебки лекарственной и 200 г плодов яблони ягодной измельчают до размера частиц диаметром 2 мм (сито N 20 ГОСТ 214- 83). Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 15,0 л 30% этилового спирта в соотношении сырье-экстрагент, равном 1: 20 с учетом коэффициента набухания сырья. Экстрагируют при температуре 60^oC и постоянном перемешивании в течение 120 мин. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Проводят еще две экстракции в течение 60 и 60 мин, подавая каждый раз в экстрактор 30% спирт в количестве, равном объему слитого извлечения. 1-ый слив – 11,95 л, 2-ой слив – 12,01 л, 3-ий слив – 11,98 л. Объединенные извлечения упаривают до 1/3 первоначального объема и очищают сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема, высушивают в вакуумной сушилке при температуре 60^oC в течение 8 ч и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 170 г готового продукта, что составляет 22,7% от массы исходного сырья. Сухой экстракт представляет собой мелкодисперсный порошок коричневого цвета с приятным запахом и горьким вкусом; комкуется, содержание влаги – 4,47%.

Оценку желчегонной активности сухого экстракта “7 драгоценных” проводили на 24 беспородных белых крысах обоего пола с массой 160-200 г по методике, описанной в примере 1.

Из приведенных в таблице 5 данных следует, что сухой экстракт “7 драгоценных” оказывает выраженное желчегонное действие. В частности скорость секреции желчи, по сравнению с аналогичным показателем контроля, достоверно возрастала на 29-34% с повышением общего количества выделенной желчи на 31%. Холеретическая реакция сохранялась на высоком уровне в течение 4 часов опыта. Наряду с этим экстракт “7 драгоценных” стимулировал синтез и выделение желчных кислот, суммарная концентрация которых превышала данный показатель контроля на 37%. Кроме того, испытуемое средство способствовало секреции билирубина с желчью. При этом желчегонная активность предлагаемого средства была выше, чем у препарата сравнения.

Противовоспалительную активность полученного средства оценивали по влиянию на процессы альтерации и регенерации тканей. Эксперименты проведены на 18 беспородных белых крысах обоего пола с массой 150-160 г по схеме, описанной в примере 1. Полученные результаты представлены в таблице 6.

Из данных, приведенных в таблице 6, следует, что курсовое введение экстракта “7 драгоценных” в дозе 300 мг/кг оказывает противовоспалительное действие, снижая степень деструкции и стимулируя регенерацию тканей. В частности на 8 сутки опыта на фоне введения экстракта “7 драгоценных” площадь некротизированной ткани уменьшалась на 31% по сравнению с контролем, а у крыс, получавших препарат сравнения – лишь на 15% (различие не достоверно). На 29 сутки опыта отмечено выраженное антиальтеративное действие экстракта “7 драгоценных”, который эффективно стимулировал регенераторные процессы, следствием чего явилось уменьшение площади некротизированных тканей на 53%, тогда как у крыс, получавших препарат сравнения, площадь некроза уменьшалась на 27%. Таким образом, экстракт “7 драгоценных” по противовоспалительному действию превосходит препарат сравнения.

На основании качественного фитохимического анализа в полученном сухом экстракте установлено наличие:
1. Флавоноидов
1.1. 0,1 г экстракта растворяют в 50 мл 30% этилового спирта. К 5 мл полученного раствора прибавляют 3 мл 2% спиртового раствора алюминия хлорида; появляется желтое окрашивание (флавоноиды).

1.2. Двумерной восходящей хроматографией на бумаге марки FN-16 в системах растворителей:
А. 15% уксусная кислота;
Б. н-Бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2).

При просмотре хроматограммы в УФ-свете до и после проявления 5% спиртовым раствором алюминия хлорида обнаружены:
кверцетин – R_f = 0,04 (А), 0,70 (Б);
гиперозид – R_f = 0,36 (A), 0,61 (Б);
идентификацию проводили со стандартными образцами.

2. Дубильных веществ
0,05 г экстракта растворяют в 5 мл воды дистиллированной. К 2 мл полученного раствора прибавляют 2-3 капли раствора железоаммониевых квасцов, появляется черно-зеленое окрашивание (дубильные вещества).

3. Фенолкарбоновых кислот
Двумерной восходящей хроматографией на бумаге марки FN-12 в системах растворителей:
А. н-Бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2);
Б. 15% уксусная кислота.

При просмотре хроматограммы в УФ-свете после обработки парами аммиака идентифицированы со стандартными образцами:
кофейная кислота – R_f = 0,29 (А), 0,55 (Б);
хлорогеновая кислота – R_f = 0,73 (А), 0,63 (Б);
коричная кислота – R_f = 0,64 (А), 0,32 (Б).

Количественное определение
Около 0,1 г (точная навеска) экстракта растворяют в мерной колбе вместимостью 100 мл в 30% этиловом спирте (раствор А). 3 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора 50% спиртом до метки. Измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 274 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 50% этиловый спирт. Параллельно измеряют оптическую плотность рабочего стандартного образца (РСО) коричной кислоты. 1 мл приготовленного раствора коричной кислоты помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора 50% этиловым спиртом до метки. Раствором сравнения является 50% этиловый спирт.

Содержание суммы фенольных соединений в пересчете на коричную кислоту и абсолютно сухой экстракт в процентах (X) рассчитывают по формуле:

где D – оптическая плотность испытуемого раствора;
D₀ – оптическая плотность раствора РСО коричной кислоты;
m – масса навески экстракта в граммах;
m₀ – масса навески РСО коричной кислоты в граммах;
W – потеря в массе при высушивании экстракта в процентах.

Примечание. Приготовление раствора РСО коричной кислоты: около 0,01 г (точная навеска) РСО коричной кислоты, предварительно высушенного при температуре 100- 105^oC в течение 3 ч, растворяют в 85 мл 96% спирта в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на водяной бане, охлаждают, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают.

Найдено: 2,450,09%.

Предложенный способ получения достаточно прост, не требует сложной схемы очистки, позволяет получать продукт постоянного состава. Технология может быть внедрена на предприятиях, выпускающих лекарственные препараты.

Для выявления оптимальных технологических режимов нами были изучены основные факторы, влияющие на процесс экстрагирования растительного сырья: природа экстрагента, его соотношение с сырьем, температурный режим, степень измельчения сырья, продолжительность и количество экстракций.

Количественная оценка проводилась по выходу экстрактивных веществ [1] и суммы фенольных соединений. Метрологические характеристики представлены в таблице 7.

В качестве экстрагентов были использованы вода и этиловый спирт различных концентраций (10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 96%).

Как видно из таблицы 8, 25-30% спирт является оптимальным экстрагентом, так как позволяет добиться максимального выхода суммы флавоноидов с учетом выхода экстрактивных веществ.

Выявление оптимальной степени измельчения сырья проводили отдельно для каждого вида сырья. Количественную оценку проводили по выходу экстрактивных веществ. На основании полученных данных (таблица 9) и с учетом того, что слишком мелкое измельчение растительного материала ведет к загрязнению извлечения труднофильтруемыми высокомолекулярными соединениями, измельчение каждого вида сырья следует проводить отдельно, до размера частиц: 1 мм для корневищ и корней девясила высокого, корневищ и корней софоры желтоватой, корневищ имбиря лекарственного, древесины бузины сибирской, плодов боярышника кроваво-красного и 2 мм для корневищ и корней кровохлебки лекарственной и плодов яблони ягодной.

В связи с тем, что в исходном растительном сырье содержатся термолабильные вещества (витамины, антоцианы, алкалоиды), изучение влияния температуры на процесс экстракции проводили в интервале температур от 20 до 60^oC, Данные представлены в таблице 10, оптимальная температура – 605^oC.

При изучении влияния соотношения сырье-экстрагент на процесс экстракции установлено (таблица 11), что с увеличением количества экстрагента возрастает выход экстрактивных веществ и суммы фенольных соединений, но рост этот для соотношений 1:15 и выше незначителен, поэтому для предотвращения дополнительного расхода экстрагента выбрано соотношение, равное 1:(15-17), или, с учетом коэффициента набухания, 1:(18-20).

Для определения продолжительности и необходимого количества экстракций установлено время достижения равновесных концентраций экстрактивных веществ и суммы фенольных соединений в системе сырье-экстрагент в ходе трехкратной экстракции. Для этого проводили экстракцию измельченного сырья 30% этиловым спиртом в соотношении 1:18 на водяной бане при температуре 60^oC и постоянном перемешивании в колбе с обратным холодильником. Извлечения, полученные через определенные промежутки времени (15, 30, 45, 60, 75, 90, 105, 120, 135, 150 мин) в процессе трех экстракций, анализировали на содержание экстрактивных веществ и суммы фенольных соединений. Установлено, что равновесные концентрации устанавливаются при 1-ом контакте фаз через 120 мин, при 2-ом и 3-ем контактах фаз через 60 мин (таблица 12). Трехкратная экстракция обеспечивает достаточно полное истощение сырья – извлекается до 86% действующих веществ.

Предлагаемый способ, по сравнению с известным, позволяет получить препарат постоянного состава с более высокой желчегонной и противовоспалительной активностью за счет более высокого содержания действующих веществ (фенольных соединений).

Рассчитать экономическую эффективность предлагаемого способа в настоящее время не представляется возможным, однако вышеуказанные преимущества в сочетании с простой схемой получения способствуют рациональному использованию лекарственного растительного сырья и аргументируют перспективность внедрения данного способа в фармацевтическую промышленность.

Источники информации
1. Государственная Фармакопея СССР. Вып. 1. Общие методы анализа /МЗ СССР. – 11-е изд., доп. – М.: Медицина, 1987.-336 с.

2. Государственная Фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье /МЗ СССР. -11-е изд., доп. – М.: Медицина, 1989. – 400 с. – прототип
3. Дроговоз С. М. Нарушение интенсивности желчеотделения и химического состава желчи при дистрофии печени, вызванной четыреххлористым углеродом. /Вопросы медицинской химии. – 1971. – Вып. 4. – С. 397-400.

4. Карбач Я. И. Количественное определение желчных кислот в желчи и крови с применением хроматографического метода. /Биохимия. – 1961.-Т. 21, N2. -С. 305-309.

5. Монцевичюте-Эрингене Е.В. Упрощенные математико-статистические методы в медицинской исследовательской работе /Патологическая физиология и экспериментальная терапия. – 1964. -N4.-С. 71- 78.

6. Ойвин И. А., Шетель С.Л. Методика изучения местных нарушений капиллярной проницаемости /Материалы по патогенезу воспаления и патологии белков крови. – Душанбе, 1961. – Т. 49, N 5.-С. 167-173.

7. Скакун Н.П. Нейрогуморальный механизм желчегонного действия инсулина /Проблемы эндокринологии. – 1956. -N 6.-С. 75-78.

8. Скакун Н.П., Олейник А.Н. Сравнительное действие атропина и метацина на внешнесекреторную функцию печени /Фармакология и токсикология. – 1967. – Т. 30, N 3.-С. 334.

9. Сидоров К.К. О классификации токсичности ядов при парентеральных способах введения /Токсикология новых промышленных химических веществ. – М., 1973. – С. 47-51.

10. Требования к доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ. – М.: Медицина, 1984.

Формула изобретения

Способ получения средства, обладающего желчегонной и противовоспалительной активностью, состоящего из корневищ и корней девясила высокого, корневищ и корней софоры желтоватой, корневищ и корней кровохлебки лекарственной, корневищ имбиря лекарственного, древесины бузины сибирской, плодов боярышника кроваво-красного, плодов яблони ягодной, путем экстрагирования растительного материала, отличающийся тем, что растительный материал экстрагируют 25 – 30% этиловым спиртом в соотношении растительный материал – экстрагент, равном 1 : (18 – 20), первый раз – 120 мин, а второй и третий – по 60 мин при 60 – 65^oC.

РИСУНКИ

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 29.12.2001

Номер и год публикации бюллетеня: 12-2003

Извещение опубликовано: 27.04.2003