Патент на изобретение №2310858

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ИСХОДА ДАКРИОЦИСТОРИНОСТОМИИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии. Сущность изобретения заключается в определении до операции и через неделю после нее содержания интерлейкина 8 в слезной жидкости пациентов с дакриоциститом и при его содержании в пределах 120-600 пкг/мл исход дакриоцисториностомии прогнозируют как благоприятный, при IL-8 750 пкг/мл и выше – как неблагоприятный, с последующим развитием рецидива заболевания. Использование способа позволяет осуществить точный прогноз исхода дакриоцисториностомии и развития рецидива.

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано в медицинской практике для прогнозирования исхода дакриоцисториностомии и развития рецидива дакриоцистита.

Известный способ прогноза исхода дакриоцисториностомии и развития рецидива основан на изучении при этом заболевании иммунопатологических изменений, сопровождающихся разрастанием грануляций и последующим излишним рубцеванием, а также изменениями локального цитокинового статуса (В.Г.Белоглазов с соавт., Рефракционная хирургия и офтальмология, 2004, т.4, № 3, С.44-49). Данный способ взят за прототип.

Об исходах дакриоцисториностомии и развитии рецидива дакриоцистита судят по функциональной активности клеток секрета полости носа, выявляемой по уровню синтеза ими цитокинов, в частности провоспалительного интерлейкина 1 (IL-1) и трансформирующего фактора роста 1 (ТФР-1). Данные цитокины синтезируются на ранней стадии воспалительного ответа.

Недостатками данного способа являются его трудоемкость и длительность.

Техническим результатом изобретения является получение критериев прогноза исхода дакриоцисториностомии и развития рецидива по определению содержания интерлейкина 8 в слезной жидкости.

Указанный технический результат достигается за счет того, что в способе, заключающемся в определении содержания цитокина, в слезной жидкости определяют содержание интерлейкина 8 до и через неделю после операции, при его содержании в пределах 120-600 пкг/мл прогнозируют благоприятный исход дакриоцисториностомии, а при его содержании 750 пкг/мл и выше – неблагоприятный, с последующим развитием рецидива заболевания.

Подтверждением достоверности предлагаемого способа прогноза является совпадение показателей концентрации исследуемого цитокина в слезной жидкости с исходом дакриоцисториностомии в среднем в 90% случаев.

Способ осуществляют следующим образом.

Слезную жидкость забирают микропипеткой из конъюнктивального мешка в количестве 1 мл.

Определение уровня провоспалительного интерлейки на 8 в слезной жидкости больных проводят твердофазным иммуноферментным методом с применением пероксидазы хрена в качестве индикаторного фермента с использованием тест-систем «ИЛ-8-ИФА-БЕСТ» («Вектор-Бест, Новосибирск).

В микропланшет с иммобилизованными антителами вносят по 100 мкл раствора для разведения сывороток. В один ряд вносят по 100 мкл стандартов IL-8, в остальные – по 100 мкл исследуемых образцов слезной жидкости. Планшет инкубируют 2 часа при +37°С при непрерывном встряхивании, затем 5 раз промывают буфером. Проводят полную аспирацию оставшейся жидкости.

В каждую ячейку микропланшета вносят по 100 мкл конъюгата антител к IL-8 человека с биотином. Планшет инкубируют в течение 1 часа при +37°С при непрерывном встряхивании. Затем жидкость из ячеек удаляют и стрипы 5 раз промывают буфером. Планшет сушат путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой.

В каждую лунку стрипов вносят по 100 мкл конъюгата стрептавидина с пероксидазой хрена, разведенного буфером. Планшет инкубируют в течение 30 мин при +37°С при непрерывном встряхивании. Жидкость из ячеек удаляют и 5 раз промывают буфером. Полностью удаляют влагу из стрипов путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой.

Во все лунки планшета вносят по 100 мкл раствора субстрата с красителем. Микропланшет инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре в защищенном от прямых лучей месте. Реакцию останавливают добавлением 100 мкл стоп-реагента в каждую лунку. Общее время постановки исследования – 4,5 часа.

Учет результатов проводят с использованием автоматического фотометра «Multiscan» при длине волны 450 нм. Результаты выражают в пкг/мл. Нормальный уровень исследуемых цитокинов в слезной жидкости у практически здоровых лиц (контрольная группа), как правило, не превышает 125 пкг/мл.

У 30 больных дакриоциститом было изучено содержание противовоспалительного IL-8 в слезной жидкости в дооперационный период. Слезную жидкость забирали микропипеткой из конъюнктивального мешка в количестве 1 мл.

В микропланшет с иммобилизованными антителами вносили по 100 мкл раствора для разведения сывороток. В один ряд вносили по 100 мкл стандартов IL-8, в остальные – по 100 мкл исследуемых образцов слезной жидкости. Планшет инкубировали 2 часа при +37°С при непрерывном встряхивании, затем 5 раз промывали буфером. Проводили полную аспирацию оставшейся жидкости.

В каждую ячейку микропланшета вносили по 100 мкл конъюгата антител к IL-8 человека с биотином. Планшет инкубировали в течение 1 часа при +37°С при непрерывном встряхивании. Затем жидкость из ячеек удаляли и стрипы 5 раз промывали буфером. Планшет сушили путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой.

В каждую лунку стрипов вносили по 100 мкл конъюгата стрептавидина с пероксидазой хрена, разведенного буфером. Планшет инкубировали в течение 30 мин при +37°С при непрерывном встряхивании. Жидкость из ячеек удаляли и 5 раз промывали буфером. Полностью удаляли влагу из стрипов путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой.

Во все лунки планшета вносили по 100 мкл раствора субстрата с красителем. Микропланшет инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре в защищенном от прямых лучей месте. Реакцию останавливали добавлением 100 мкл стоп-реагента в каждую лунку.

Учет результатов проводили с использованием автоматического фотометра «Multiscan» при длине волны 450 нм. Результаты выражали в пкг/мл.

У 26 (86,7%) из 30 больных содержание IL-8 в слезной жидкости в дооперационном периоде было выявлено в пределах 120-600 пкг/мл. При этом, у 24 (92,3%) из них послеоперационный период протекал благоприятно, и постепенное снижение уровня IL-8 в слезной жидкости после дакриоцисториностомии соответствовало клиническим проявлениям: уменьшению степени гиперемии и отека слизистой оболочки носа, увеличению фибринообразования. У 2 (7,7%) больных послеоперационное течение заболевания характеризовалось как неблагоприятное, т.к. в течение месяца сохранялась повышенной концентрация IL-8, наблюдалась выраженная воспалительная реакция, а через 3 месяца у них отмечали рецидив заболевания.

У 4 (13,3%) из 30 больных дакриоциститом концентрация IL-8 в слезной жидкости в дооперационном периоде составляла 750 пкг/мл и более. При этом неблагоприятное послеоперационное течение дакриоцистита (рубцевание вновь созданного соустья, т.е. рецидив заболевания, через 3 месяца) наблюдали у 3 (75%) из них, тогда как у 1 (25%) пациента рубцевания соустья отмечено не было.

Таким образом, предлагаемый способ прогноза развития рецидива дакриоцистита являлся правильным у 27 из 30 больных, что было достоверно в 90% случаев.

Пример 1. Больная М. находилась на стационарном лечении по поводу первичного дакриоцистита. Определение цитокинов в слезной жидкости проводилось по вышеописанной методике. При поступлении (в дооперационный период) содержание IL-8 в слезной жидкости было равно 825,6 пкг/мл, через неделю после хирургического вмешательства уровень данного цитокина был по-прежнему высоким (756,3 пкг/мл), на основании чего прогнозировали неблагоприятный исход дакриоцисториностомии и развитие рецидива заболевания. Действительно, в динамике исследования было отмечено выраженное рубцевание краев соустья, что привело к непроходимости слезоотведения. Таким образом, высокое содержание IL-8 в слезной жидкости до операции (825,6 пкг/мл) и через неделю после нее (756,3 пкг/мл) свидетельствует о неблагоприятном прогнозе исхода дакриоцисториностомии и развитии рецидива заболевания.

Пример 2. Больная А. Диагноз: первичный дакриоцистит. Определение цитокинов в слезной жидкости проводилось по вышеописанной методике. В дооперационный период содержание противовоспалительного IL-8 в слезной жидкости составило 415,8 пкг/мл. На основании установленного в пределах вышеуказанного интервала (120-600 пкг/мл) значения IL-8 в слезной жидкости больной прогнозировали благоприятный исход хирургического вмешательства и отсутствие последующего рецидива. Через неделю после дакриоцисториностомии уровень IL-8 в слезной жидкости существенно снизился, составив 185,2 пкг/мл. В отдаленный период исследования – через 3 месяца после хирургического вмешательства – не было выявлено нарушений функций образованного соустья, что подтверждалось эндоскопическим исследованием и положительной слезно-носовой пробой. Это свидетельствует о подтверждении ранее прогнозируемого благоприятного прогноза исхода дакриоцисториностомии.

Таким образом, предлагаемый способ прогноза исхода дакриоцисториностомии и развития рецидива заболевания позволяет оценить характер послеоперационного течения этого заболевания по изменению содержания IL-8 в слезной жидкости пациентов. Прогноз исхода дакриоцисториностомии является благоприятным при уровне IL-8 в слезной жидкости в дооперационный период и через неделю после операции в пределах 120-600 пкг/мл, а неблагоприятным – при концентрации IL-8 от 750 пкг/мл и выше.

Формула изобретения

Способ прогнозирования исхода дакриоцисториностомии путем определения содержания цитокина, отличающийся тем, что в слезной жидкости определяют содержание интерлейкина 8 до и через неделю после операции, при его содержании в пределах 120-600 пкг/мл прогнозируют благоприятный исход дакриоцисториностомии, а при его содержании 750 пкг/мл и выше – неблагоприятный, с последующим развитием рецидива заболевания.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 18.07.2008

Извещение опубликовано: 27.03.2010 БИ: 09/2010