Патент на изобретение №2309752
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ ДЕСКВАМИРОВАННЫХ ЭНДОТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ
(57) Реферат:
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике в кардиологии, ревматологии, профилактической медицине. Способ приготовления препаратов десквамированных эндотелиальных клеток (ДЭК) периферической крови включает отбор венозной крови, ее центрифугирование, отделение бестромбоцитарной плазмы с последующим выделением: ДЭК, при этом наносят бестромбоцитарную плазму на покровное стекло, инкубируют при 37°С 60 минут, фиксируют в метаноле в течение 5 минут или в 1%-ном глутаровом альдегиде на среде 199 в течение 1 суток, окрашивают краской азур-II-эозин в соотношении 1:1 с дистиллированной водой и монтируют на предметные стекла. Изобретение позволяет усовершенствовать качество морфологической диагностики и идентификации циркулирующих десквамированных эндотелиоцитов, изучать внутриклеточные структуры ДЭК; препараты могут храниться длительное время, транспортироваться, структура клеток не искажается. 2 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике в кардиологии, ревматологии, профилактической медицине. Технический результат предлагаемого способа заключается в повышении точности морфологической диагностики за счет приготовления препарата ДЭК путем эвапорации жидкой части бестромбоцитарной плазмы с последующей его фиксацией, окраской при соотношении краски азур-II-эозин: дистиллированная вода=1:1 и монтированием на предметные стекла. Предлагается способ приготовления препаратов ДЭК, дополняющая имеющуюся методику: 1. Венозная кровь в объеме 2 мл забирается в гепаринизированную пробирку. 2. Тромбоцитарная плазма отделяется центрифугированием (1000 оборотов в минуту в течение 10 минут). 3. Тромбоциты отделяются путем добавления раствора АДФ к супернатанту в соотношении 1:4, перемешивания смеси в течение 10 минут и центрифугирования (1000 оборотов в минуту в течение 15 минут). 4. Бестромбоцитарную плазму в объеме 0,01 мл наносят тонким слоем на покровные стекла, помещенные в планшет для культур клеток, и инкубируют в термостате при t=37°C в течение 60 минут до испарения жидкой части плазмы. 5. Полученные препараты фиксируют в чистом метаноле в течение 5 минут или в 1% глутаровом альдегиде на среде 199 в течение 1 суток. 6. Препараты высушивают и окрашивают готовым раствором азур-II-эозина в течение 5 минут (в отличие от традиционного, рекомендуется разведение готовой краски дистиллированной водой в соотношении 1:1). 7. Окрашенные препараты ДЭК монтируют на предметные стекла. 8. Препараты доступны для просмотра под микроскопом. Пример осуществления изобретения Для успешного достижения конечной цели – приготовления препаратов ДЭК периферической крови необходимо поэтапно выполнить все вышеуказанные операции, в ходе которых после получения бестромбоцитарной плазмы проводится эвапорации ее жидкой части, препарат фиксируют в чистом метаноле, окрашивают при соотношении краски азур-II-эозин: дистиллированная вода=1:1 и монтируют на предметные стекла. Это позволяет качественно визуализировать препараты ДЭК (фиг.1) по сравнению с имеющейся методикой их идентификации (фиг.2). Таким образом, предлагаемая методика повышает точность диагностики и расширяет возможности распознавания сосудистого поражения на различных стадиях развития патологического процесса у кардиологических, ревматологических больных и пациентов общетерапевтического профиля с повышенным риском кардиоваскулярной патологии.
Формула изобретения
Способ приготовления препаратов десквамированных эндотелиальных клеток (ДЭК) периферической крови, включающий отбор венозной крови, ее ценитрифугирование, отделение бестромбоцитарной плазмы с последующим выделением ДЭК, отличающийся тем, что дополнительно наносят бестромбоцитарную плазму на покровное стекло, инкубируют при 37°С 60 мин, фиксируют в метаноле в течение 5 мин или в 1%-ном глутаровом альдегиде на среде 199 в течение 1 сут, окрашивают краской азур-II-эозин в соотношении 1:1 с дистиллированной водой и монтируют на предметные стекла.
РИСУНКИ
MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 27.01.2008
Извещение опубликовано: 20.09.2009 БИ: 26/2009
|
||||||||||||||||||||||||||
