Патент на изобретение №2308035
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ПЕРИНАТАЛЬНЫХ ГИПОКСИЧЕСКИХ ПОРАЖЕНИЙ ЦНС У ДОНОШЕННЫХ НОВОРОЖДЕННЫХ ОТ МАТЕРЕЙ С ГЕСТОЗОМ
(57) Реферат:
Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии. Сущность изобретения состоит в том, что в пуповинной крови при рождении ребенка определяют соотношение показателей относительного содержания CD3+HLA-DR+ к CD3+ лимфоцитам и при его значении, равном 8,1% или более, диагностируют перинатальное гипоксическое поражение ЦНС с точностью 89,28%. Использование способа позволяет на ранних сроках диагностировать перинатальные гипоксические поражения ЦНС у доношенных новорожденных от женщин с гестозом. 1 табл.
(56) (продолжение): CLASS=”b560m”epidemiological study (1). Rev Neurol. 1996 Jul; 24(131):812-9. PMID: 8681192, (реферат), [он-лайн] [24.11.2006], найдено из БД PubMed.
Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии, и может быть использовано для ранней диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у доношенных новорожденных от женщин с гестозом. Актуальность разработки способа определяется ростом частоты перинатальных гипоксических поражений ЦНС, высокой летальностью и инвалидизацией при них [1]. Диагностика перинатальных поражений ЦНС у новорожденных детей нередко бывает затруднена вследствие не всегда четкой и ясной картины неврологических симптомов [2]. Одной из основных причин развития перинатальных поражений ЦНС у новорожденных является гестоз у матери. Частота встречаемости данной патологии у детей, рожденных от женщин с гестозом, по литературным данным, достигает 49,9%, что в 4,8 раза выше, чем при неосложненной беременности [3]. Клинические проявления патологии ЦНС у новорожденных не всегда отражают истинную тяжесть состояния, степень поражения ЦНС и дальнейший прогноз развития ребенка [4]. Поэтому разработка способа ранней диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС новорожденных является актуальной. Способ позволит диагностировать перинатальные гипоксические поражения ЦНС в первые сутки жизни, назначить адекватную терапию церебральных нарушений и предотвратить инвалидизирующие последствия. Недостатки способа: 1) при проведении данного способа выявляют преимущественно грубые повреждения мозговой ткани: внутрижелудочковые кровоизлияния, перивентрикулярную лейкомаляцию и остаются недоступными гипоксически-ишемические повреждения, возникающие на клеточном уровне [4]; 2) существует риск некорректной интерпретации данных нейросонографии [4]; 3) заключение по нейросонографии корректно осуществлять не ранее 3-го дня жизни ребенка [Пальчик А.Б., Шабалов Н.П. Гипоксически-ишемическая энцефалопатия новорожденных. СПб: Питер, 2001. – 224 с.]; 4) для осуществления метода требуется специальное оборудование. Недостатки способа: 1) уровень белка S-100 достоверно повышается только при тяжелых формах перинатальных поражений ЦНС, что не позволяет использовать его для диагностики перинатальных поражений ЦНС легкой и средней степени тяжести; 2) для осуществления метода требуется пятикратный забор крови, что наносит болевую травму новорожденному и может отрицательно сказаться на течении основного заболевания; 3) высокая экономическая стоимость способа (необходимость закупки дорогостоящих специальных наборов реактивов для определения уровня белка S-100 методом непрямого иммуноферментного анализа). Наиболее близким по техническому решению является способ ранней диагностики нарушений гемоликвородинамики гипоксического генеза у новорожденных путем исследования уровня продукции моноцитами пуповинной крови интерлейкина 1 Недостатки способа: 1) ИЛ-1 2) для проведения данного метода требуется больше времени (3 часа), чем для заявляемого способа; 3) не указывается точность данного метода диагностики. Данный способ избран нами в качестве ближайшего аналога (прототипа). Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе. Техническим решением заявляемого способа является ранняя диагностика перинатальных гипоксических поражений ЦНС у доношенных новорожденных от женщин с гестозом путем определения в пуповинной крови при рождении соотношения показателей относительного содержания CD3+HLA-DR+ к CD3+ лимфоцитам, при значении показателя, равном 8,1% или более, диагностируют перинатальное гипоксическое поражение ЦНС с точностью 89,28%. Новизна способа Впервые предлагается раннее (при рождении ребенка) диагностирование перинатальных гипоксических поражений ЦНС у доношенных новорожденных от женщин с гестозом по определению соотношения показателей относительного содержания CD3+HLA-DR+ к CD3+ лимфоцитам. Мы предполагаем, что данный параметр имеет непосредственную патогенетическую связь с развитием перинатальных гипоксических поражений ЦНС, т.к. отражает изменение активации Т-лимфоцитов, которое может быть связано с развитием аутоиммунных процессов в ответ на изменение проницаемости гематоэнцефалического барьера, формирующейся в результате хронической внутриутробной гипоксии, сопровождающейся выходом в периферическую циркуляцию аутомозговых антигенов. Повышение относительного содержания CD3+ и CD3+HLA-DR+ лимфоцитов в периферической крови отмечается при различных инфекционных заболеваниях, сопровождающихся активацией иммунного ответа с преобладанием Т×1 реакций [5]. Снижение уровня относительного содержания CD3+ лимфоцитов отмечается при Т-клеточном иммунодефиците [5], снижение относительного содержания CD3+HLA-DR+ клеток может наблюдаться при атопическом дерматите [6] и при ожирении у детей [7]. Отличительные признаки способа Установлен диагностический параметр относительного содержания CD3+HLA-DR+ к CD3+ лимфоцитам, при значении которого, равном 8,1% или более, диагностируют поражение ЦНС у доношенных новорожденных от женщин с гестозом. Способ осуществляется следующим образом 1. При рождении ребенка производят забор в пробирку 0,5 мл пуповинной крови. 2. Выделение лимфоцитов из пуповинной крови осуществляется стандартным методом – центрифугированием при 1500 об/мин в градиенте плотности фиколл-верографин в течение 30 минут [8]. 3. В 1 пробирку, содержащую 100 мкл лимфоцитов в концентрации 1×106 кл/мл, добавляют 20 мкл моноклональных анти-CD3 AT, меченных FITC или РЕ, в другую пробирку добавляют 20 мкл моноклональных анти-CD3 AT, меченных FITC или РЕ и 20 мкл моноклональных анти-HLA-DR AT меченных FITC или РЕ (в зависимости от первой метки). Клетки инкубируют с моноклональными антителами в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, после чего отмывают 1 раз 1 мл физиологического раствора центрифугированием при 1500 об/мин в течение 2 минут. Клетки в пробирках ресуспендируют в 500 мкл физиологического раствора [9]. 4. Учет реакции проводят на проточном цитометре, определяя в лимфоцитарном гейте процентное (относительное) содержание CD3+ и CD3+HLA-DR+ клеток. 5. Рассчитывается соотношение показателей относительного содержания CD3+HLA-DR+ к CD3+ клеткам. При значениях показателя, равных 8,1% или больших, диагностируют перинатальное поражение ЦНС с точностью 89,28%. 6. Способ осуществляется в течение 1 часа 10 минут. Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами. Пример 1. Ребенок Г. родился от I беременности, протекавшей на фоне ожирения II, анемии I степени, осложнившейся гестозом средней степени тяжести. Своевременные I роды в 40 недель. Оценка по шкале Апгар 5-6 баллов. Масса тела при рождении 3600 г, рост 56 см. Общее состояние средней степени тяжести с момента рождения. Двигательная активность снижена, крик громкий. Отмечается мышечная гипотония, тремор конечностей, акроцианоз. Большой родничок 2×2 см. При рождении по заявляемому способу в пуповинной крови определялось содержание CD3+, равное 44,3%, и CD3+HLA-DR+ клеток, равное 16,6%, и определено соотношение CD3+HLA-DR+ к CD3+, которое составило 37,5%, что выше заявляемого (8,1%) уровня. Заключение: диагностируется перинатальное поражение ЦНС. На третьи сутки жизни проведена нейросонография. На основании полученных данных и с учетом клинической картины был поставлен диагноз: хроническая внутриутробная гипоксия плода, перинатальное поражение ЦНС, церебральная ишемия II степени гипоксически-ишемического генеза, гипертензивный синдром, синдром нейрорефлекторной возбудимости. Таким образом, способ ранней диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у новорожденных от женщин с гестозом по предложенному методу подтвердился. Пример 2. Ребенок Б. родился от VII беременности, осложнившейся угрозой прерывания в 12 недель, ОРВИ в 36 недель, гестозом легкой степени тяжести. Своевременные II роды в 38 недель. Оценка по шкале Апгар 8-9 баллов. Масса тела при рождении 2800 г, рост 48 см. Большой родничок 2,5×2,5 см. Состояние ребенка при рождении оценено как удовлетворительное. При рождении по заявляемому способу в пуповинной крови определялось содержание CD3+, равное 44,6%, и CD3+HLA-DR+ клеток, равное 3,0%, и определено соотношение CD3+HLA-DR+ к CD3+, которое составило 6,7%, что ниже заявляемого (8,1%) уровня. Заключение: перинатальное поражение ЦНС не диагностируется. На протяжении неонатального периода при осмотре неонатолога и невролога ребенок здоров. Таким образом, способ ранней диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у новорожденных от женщин с гестозом по предложенному методу подтвердился. Пример 3. Ребенок Л. родился от III беременности, осложнившейся ОРВИ в 6-7 недель, угрозой прерывания в 25 и 36 недель, гестозом легкой степени тяжести. Своевременные III роды в 38-39 недель. Оценка по шкале Апгар 7-8 баллов. Масса тела при рождении 3000 г, рост 50 см. Большой родничок 1×1 см. В первые сутки жизни состояние ребенка удовлетворительное. При рождении по заявляемому способу в пуповинной крови определялось содержание CD3+, равное 64,2%, и CD3+HLA-DR+ клеток, равное 5,2%, и определено соотношение CD3+HLA-DR+ к CD3+, которое составило 8,1%, что соответствует заявляемому (8,1%) уровню как критерию ранней диагностики перинатальной патологии ЦНС. На 2 сутки жизни состояние ребенка ухудшилось до средней тяжести, появилась гипервозбудимость, тремор подбородка и рук, акроцианоз. На основании клинической картины и данных нейросонографии поставлен диагноз: хроническая внутриутробная гипоксия плода, перинатальное поражение ЦНС, церебральная ишемия I степени гипоксически-ишемического генеза, гипертензивный синдром, синдром нейрорефлекторной возбудимости. Таким образом, способ ранней диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у новорожденных от женщин с гестозом по предложенному методу подтвердился. Преимущества способа 1. Возможность ранней (при рождении) диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у доношенных новорожденных от женщин с гестозом позволит назначить адекватную терапию церебральных нарушений и предотвратить инвалидизирующие последствия. 2. Заявляемый способ не требует больших временных затрат и осуществляется 1 час 10 мин. 3. Исследование может быть проведено в любое время суток. 4. Предлагаемый способ имеет высокую точность – 89,28%. 5. Исследуется малый объем крови (0,5 мл). 6. Предлагаемый способ нетравматичен. Указанным способом обследовано 28 новорожденных детей, рожденных от женщин с гестозом. Результаты исследования представлены в таблице 1.
Литература 6. Справочник по иммунотерапии для практического врача. – СПб.: Диалог, 2002. – 478 с. Формула изобретения
Способ ранней диагностики перинатальных гипоксических поражений ЦНС у доношенных новорожденных от женщин с гестозом путем иммунологического исследования пуповинной крови, отличающийся тем, что в крови определяют соотношение показателей относительного содержания CD3+HLA-DR+ к CD3+ лимфоцитам и при его значении, равном 8,1% или более, диагностируют перинатальные гипоксические поражения ЦНС при рождении.
MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 17.01.2008
Извещение опубликовано: 20.09.2009 БИ: 26/2009
|
||||||||||||||||||||||||||
(ИЛ-1
(ФНО-