Патент на изобретение №2158758
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ НАКОПЛЕНИЯ ЛИСТЕРИЙ
(57) Реферат: Изобретение предназначено для клинической микробиологии, в частности для бактериологической диагностики листериоза. В качестве основного источника азота среда содержит питательный бульон для культивирования микроорганизмов и витаминный препарат “ЭКД”. “ЭКД” характеризуется высоким содержанием аминокислот и комплексом витаминов. Среда содержит глюкозу, обеспечивающую энергетическое питание. Она содержит также комплекс минеральных солей – динатрий фосфат и натрий хлористый. Минеральные соли придают среде изотонические свойства. Налидиксовая кислота и полимиксин В используются как ингибитор сопутствующей микрофлоры. Среда ингибирует полностью рост сопутствующей микрофлоры и обладает высокой чувствительностью и эффективностью накопления листерий. Среда сконструирована из отечественных гостированных ингредиентов, проста в приготовлении и имеет более низкую себестоимость. 1 табл. Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, наиболее эффективно может быть использовано для бактериологической диагностики листериоза. Значительное увеличение роли листериоза в инфекционной патологии человека, трудности, связанные с проведением эпидемиологического анализа этих инфекций, широкое инфицирование листериями пищевых продуктов обусловливают необходимость совершенствования микробиологической диагностики, что требует наличия эффективных питательных сред [1]. В настоящее время для этих целей используют бульон Левинталя (по Раловичу), питательную среду, содержащую ацетат талия и налидиксовую кислоту (TN) [2,3]. Недостатком этих сред является введение в состав сред ех tempore дефибринированной овечьей крови, трипафлавина. Кроме того, эти среды дорогостоящие и недоступны практическим лабораториям, занимающимся диагностикой листериоза. Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявляемому изобретению по совокупности признаков является триптозно-фосфатный бульон с полимиксином В (Бойсен-Мюллер), содержащий в качестве азотистого питания триптозу, а также декстрозу, хлорид натрия, динатрий фосфат, а в качестве ингибитора сопутствующей микрофлоры ex tempore вносят полимиксин В [2]. К причинам, препятствующим достижению указанного технического результата при использовании известной среды, принятой за прототип, является то, что триптозно-фосфатный бульон с полимиксином В является недостаточно селективной средой и, кроме того, данная питательная среда импортного производства, дорогостоящая. Задача предлагаемого изобретения – повышение селективных свойств среды за счет использования отечественного сырья. Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что в качестве основного источника азотистого питания в предлагаемой среде используется питательный бульон для культивирования микроорганизмов, в качестве стимулятора роста витаминный препарат “ЭКД”, характеризующийся высоким содержанием аминокислот и комплекса витаминов, а также глюкоза, входящая в состав среды, обеспечивающая энергетическое питание, комплекс минеральных солей – динатрий фосфат и натрий хлористый, придающие среде изотонические свойства, налидиксовая кислота и полимиксин В как ингибитор сопутствующей микрофлоры, при следующем соотношении компонентов, г/л: Питательный бульон для культивирования микроорганизмов – 15,0 Витаминный препарат “ЭКД” – 2,0 Д(+) глюкоза – 1,0 Динатрий фосфат – 2,5 Натрий хлористый – 3,0 Налидиксовая кислота – 0,04 ex tempore полимиксин В – 0,003 Вода дистиллированная – Остальное Содержание в предлагаемой среде налидиксовой кислоты и полимиксина В полностью ингибирует рост сопутствующей микрофлоры, кроме того, среда обладает высокой чувствительностью, отмечается рост колоний при посеве из разведения 10-7. Также среда обладает высокими накопительными свойствами. Эффективность накопления в 10 и более раз. Время генерации, т.е. удвоение массы культуры от 30 до 40 мин. Среда сконструирована из отечественных гостированных ингредиентов на основе питательного бульона для культивирования микроорганизмов и витаминного препарата “ЭКД”, имеющих промышленный выпуск на предприятии НПО “Питательные среды” (4,5,6,7,8). Среду получают следующим образом. Пример 1. В 1 л дистиллированной воды растворяют следующие ингредиенты среды, взятые в количестве (минимальное): питательный бульон для культивирования микроорганизмов – 14,0 г; витаминный препарат “ЭКД” – 1,5 г; Д (+)-глюкоза – 0,8 г; динатрий фосфат – 2,0 г; натрий хлористый – 2,5 г. Среду доводят до кипения и кипятят 2 мин. Перед стерилизацией вносят налидиксовую кислоту (0,35 г налидиксовой кислоты растворяют в 0,5 мл 1% p-pa Na ОН при добавлении 4,5 мл дистиллированной воды) в 1 л питательной среды. Среду стерилизуют автоклавированием при температуре 121oC в течение 15 мин. После автоклавирования вносят 0,0025 г полимиксина В. Разливают в стерильные пробирки. Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что растворяют следующие ингредиенты среды, взятые в следующих количествах (оптимальное): питательный бульон для культивирования микроорганизмов – 15,0 г; витаминный препарат “ЭКД” – 2,0 г; Д (+)- глюкоза – 1,0 г; динатрий фосфат – 2,5 г; натрий хлористый – 3,0 г. Среду доводят до кипения и кипятят 2 мин. Перед стерилизацией вносят налидиксовую кислоту (0,5 г налидиксовой кислоты растворяют в 0,5 мл 1% p-pa NaOH при добавлении 4,5 мл дистиллированной воды) и вносят в 1 л питательной среды. Среду стерилизуют автоклавированием при температуре 121oC в течение 15 мин. После автоклавирования вносят 0,003 г полимиксина В. Разливают в стерильные пробирки. Пример 3. Отличается от примера 1, 2 тем, что растворяют следующие ингредиенты среды, взятые в следующих количествах (максимальное): питательный бульон для культивирования микроорганизмов – 16,0 г; витаминный препарат “ЭКД” – 2,5 г; Д (+)-глюкоза – 1,2 г; динатрий фосфат – 3,0 г; натрий хлористый – 3,5 г. Среду доводят до кипения и кипятят 2 мин. Перед стерилизацией вносят налидиксовую кислоту (0,55 г налидиксовой кислоты в 0,5 мл 1% p-pa NaOH при добавлении 4,5 мл дистиллированной воды) в 1 л питательной среды. Среду стерилизуют, автоклавируют при температуре 121oC в течение 15 мин, после чего вносят 0,003 5 г полимиксина В. Разливают в стерильные пробирки. Каждый вариант среды получали отдельно. Посев микробной взвеси тест-штамма осуществляли в пробирку с питательным бульоном, перемешивали и инкубировали при температуре 37oC в течение 24  2 ч.
Результаты биологических показателей предлагаемой и известной сред приведены в таблице.
Из данных таблицы видно, что предлагаемая питательная среда имеет преимущество, так как на питательной среде полностью ингибируется рост сопутствующей микрофлоры по сравнению со средой-прототипом, ингибирующей рост сопутствующей микрофлоры частично. Кроме того, чувствительность и эффективность накопления предлагаемой среды выше по сравнению с прототипом.
Питательная среда разработана на основе отечественных ингредиентов, проста в приготовлении, намного дешевле среды- прототипа.
Таким образом, питательная среда обладает высокими селективными и накопительными свойствами. В процессе изготовления использовано отечественное сырье.
Библиографические данные1. Лабораторная диагностика листерий животных и людей, меры борьбы и профилактика (инструктированные документы) М., 1987 г. 2. Бакулов И. А. , Васильев Д.А. Листериоз как пищевая инфекция. Ульяновск, 1991 г. 3. Бакулов И.А., Васильев Д.А. Методические рекомендации по бактериологическому контролю пищевых продуктов на наличие листерий. Ульяновск, 1992 г. 4. ФС 42-3505 – 98. 5. ФС 42-386 ВС-91. 6. Химические реактивы и высокочистые химические вещества. Каталог. -М.: Химия, 1983 г. 7. ГФХ, стр.426. 8. ТУ 64-6-254-83. Формула изобретения
Питательный бульон для культивирования микроорганизмов – 14,0 – 16,0 Витаминный препарат “ЭКД” – 1,5 – 2,5 Д(+) – глюкоза – 0,8 – 1,2 Динатрий фосфат – 2,0 – 3,0 Натрий хлористый – 2,5 – 3,5 Налидиксовая кислота – 0,35 – 0,55 Полимиксин В – 0,0025 – 0,0035 Вода дистиллированная – Остальное РИСУНКИ
PD4A – Изменение наименования обладателя патента Российской Федерации на изобретение
(73) Новое наименование патентообладателя:
Извещение опубликовано: 20.08.2004 БИ: 23/2004
PD4A – Изменение наименования обладателя патента Российской Федерации на изобретение
(73) Новое наименование патентообладателя:
Извещение опубликовано: 27.10.2004 БИ: 30/2004
|
||||||||||||||||||||||||||
