Патент на изобретение №2305840

(54) СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ЖИРОВОГО ГЕПАТОЗА

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, гастроэнтерологии, физиологии, патанатомии, и может быть использовано для диагностики жирового гепатоза. Сущность изобретения: готовят биологический индикатор, состоящий из 0,1% водного раствора смеси аминокислот – аспарагиновой, глутаминовой, глицина, триптофана, валина, лейцина, пролина, аргинина, треонина, серина; 0,5% водного раствора дофамина; 0,25% водного раствора натриевой соли ДНК, 12% водного раствора сернокислой магнезии в соотношении 3:1:1:5. Индикатор наносят в объеме 0,01-0,02 мл в виде дорожки на 6-7 стеклянных пластин, пластины помещают на поверхность кожи правого подреберья в зону проекции печени, выдерживают на протяжении 2-3 минут, сушат при Т=+18-20°С и исследуют излучение печени в поляризованном свете с кварцевым компенсатором. Жировой гепатоз диагностируют при наличии в препарате деформированных полигональных камер и/или округлых, и/или овалоидных, и/или ромбовидных с отростками и без отростков, включений пестрой окраски. Использование способа дает возможность экспресс-диагностики нарушений печени, обусловленных жировым гепатозом, дифференциацию этих нарушений при полном исключении травматичности, а также, возможность оперативного контроля за эффективностью лечения. 12 ил.

(56) (продолжение):

CLASS=”b560m”из БД VINITI.RU. [Найдено 13.08.2006]. [он-лайн]. ЛОГИНОВ А.С. и др. Морфологическое исследование биоптатов печени. – Клиническая морфология печени. М., 1985, с.5-16.

Предлагаемое изобретение относится к медицине, гастроэнтерологии, патофизиологии, биологии, и может быть использовано для диагностики жирового гепатоза (ЖГ).

ЖГ – (жировая дистрофия печени; жировая инфильтрация; стеатоз печени) – хроническое заболевание, характеризующееся повышением накопления жира в гепатоцитах (А.И.Струков, В.В.Серов. Патологическая анатомия. М., 1979).

Главной морфо-функциональной единицей печени является печеночная долька, образованная гепатоцитами, (фиг.1).

Липоциты – жирозапасающие клетки печени – располагаются в перисинусоидальном пространстве, имеют многочисленные длинные отростки, проникающие глубоко между гепатоцитами, (фиг.2 – функциональная морфология печени. Показан липоцит с большим количеством липидных включений в перисинусоидальном пространстве, х8500).

Липоциты содержат митохондрии со светлым матриксом и небольшим количеством крист (Серов В., Лапин К. Морфологическая диагностика заболеваний печени. М., 1989. С.29-30).

При ЖГ в цитоплазме гепатоцита накапливаются вначале мелкие капли жира, сливающиеся в дальнейшем в более крупные или в одну жировую вакуоль, которая занимает всю цитоплазму и смещает ядро на периферию клетки. Жировые вакуоли нескольких клеток могут сливаться между собой и образовывать жировые кисты (А.С.Логинов, Л.И.Аруин. Клиническая морфология печени. М., 1985. С.34). На фиг.3 приведен препарат жировой дистрофии печени – резко выраженная жировая дистрофия перицентральных гепатоцитов. Окраска Суданом III-IV. х200; крупнокапельная жировая дистрофия, жировые кисты вокруг центральной вены. Окраска по методу Ван-Гизона. х504.

-окисления СЖК в митохондриях, избыточного синтеза или секреции липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП).

Важная роль в нарушении обмена СЖК принадлежит алкоголю. Дополнительный фактор риска ЖГ – избыток жиров в диете в сочетании с дефицитом белков. Факторы, участвующие в формировании ЖГ: лекарственные препараты (глюкокортикоиды, амиодарон, эстрогены, тетрациклин, нестероидные противовоспалительные препараты), расширенная резекция тонкой кишки, гастропластика по поводу ожирения, быстрое похудание, длительное парентеральное питание, синдром избыточного бактериального обсеменения тонкой кишки, –

Возможности идентификации ЖГ различны. К ним относят пункционную биопсию печени с изучением гистопрепаратов (В.Серов, К.Лапшин. Морфологическая диагностика заболеваний печени. М., 1989. С.29-30), инструментальные исследования печени – ультразвуковую диагностику (В.В.Митьков. Клиническое руководство по УЗД. М., 1996. С.35-38, С.52-58), томографию – (Р.И.Габуния, Е.К.Колесникова. Компьютерная томография в клинической дигностике. М., 1995. С.352).

Аналог. Морфологическое исследование биоптатов печени (Логинов А.С., Аруин Л.И. Клиническая морфология печени. М., 1985. С.5-16). Способы биопсии: чрескожные пункционные, трансвенозные, прицельные (во время лапороскопии) и краевые (во время операции). Биоптат получают пункционными иглами или специальными щипчиками, затем его обрабатывают:

– фиксируют в 10% забуференном по методу Лили формалине;

– заливают материал в парафин, с каждого блока готовят до 25-30 срезов, смонтировав их на 4-5 предметных стеклах;

– срезы окрашивают гематоксилин и эозином, а также пикрофуксином по методу Ван-Гизона.

Последний этап заключается в микроскопии препарата.

Недостатки способа.

– травмирование пациента (инвазивность исследования);

– потребность в большом количестве технических средств;

– использование игл, лапороскопа, УЗИ-аппаратов;

– применение серии химических препаратов для приготовления материала;

– длительность исполнения, не позволяющая обеспечить оперативный контроль за лечением.

За ближайший аналог принято ультразвуковое исследование печени с помощью датчика с частотой 3,5-5 МГц (В.В.Митьков. Клиническое руководство по ультразвуковой диагностике. М., 1996, т.1, С.35-38, 52-58).

Сущность способа основана на исследовании эхоструктуры печени с использованием ультразвукового сканера.

Исследование осуществляют следующим образом:

1. Пациента укладывают на спину.

2. Датчик устанавливают параллельно правой реберной дуге и постепенно изменяют угол наклона датчика.

3. Состояние печени оценивают по определению её контура, формы, размеров, эхогенности, структуры, сосудистого рисунка.

Недостатки способа:

– применение ультразвукового сканера, который влияет на физиологическое состояние исследуемого и повышает стоимость исследования;

– взаимовлияние на изображение печени окружающих органов, что снижает достоверность результатов исследования;

– возникновение артефактов во время сканирования;

– стимуляция роста некоторых новообразований в печени (киста, гемангиома, т.д.).

Задачи предлагаемого изобретения:

1. Обеспечение дифференцирования диагностики жирового гепатоза в зависимости от степени выраженности патологического процесса.

2. Повышение информативности диагностики путем визуализации результатов диагностики.

3. Оперативный контроль за эффективностью лечения.

4. Исключение инвазивности и облучения при диагностике жирового гепатоза.

Техническим результатом предложения является экспресс-регистрация энергетического излучения печени в виде определенных изображений биологического жидкого кристалла, что позволяет оперативно в динамике регистрировать нарушения в печени, обусловленные жировым гепатозом, дифференцировать эти нарушения, полностью исключить травматичность и снизить себестоимость диагностики.

Существенной новизной предложения является регистрация излучения печени при помощи биологического индикатора (БИ), для чего в отличие от известного метода (УЗИ печени) предварительно готовят биологический индикатор (смесь 0,1% водного раствора аминокислот – аспарагиновая, глутаминовая, глицин, триптофан, валин, лейцин, пролин, аргинин, треонин, серии; 0,5% водного раствора нейромедиатора дофамина; 0,25% раствора натриевой соли ДНК; 12% водного раствора сернокислой магнезии в соотношении 3:1:1:5, который наносят на 6-7 стеклянных пластин, помещают их на поверхность кожи правого подреберья в зоне проекции печени, выдерживают на протяжении 2-3 минут, сушат при Т=+18-20°С, исследуют в поляризованном свете с кварцевым компенсатором и при наличии в препарате деформированных полигональных камер и/или округлых, и/или овалоидных, и/или ромбовидных, с отростками и без отростков, включений пестрой окраски диагностируют жировой гепатоз.

Способ осуществляют следующим образом.

1. Готовят биологический индикатор (БИ) – энергоинформационную биологическую тест-систему (модель) для регистрации излучения печени. Готовят смесь, состоящую из 0,1% водного раствора 10 аминокислот (аспарагиновая, глутаминовая, глицин, триптофан, валин, лейцин, пролин, аргинин, треонин, серин; 0,5% водного раствора нейромедиатора дофамина; 0,25% раствора натриевой соли ДНК; 12% водного раствора сернокислой магнезии в соотношении соответственно 3:1:1:5.

2. Тарированной пипеткой БИ объемом 0,01-0,02 мл наносят на предметное стекло в виде дорожки.

3. Предметные стекла (стеклянные пластины) с нанесенными на них БИ помещают на поверхность кожи правого подреберья, выдерживают на протяжении 2-3 минут, сушат при Т=+18-20°С на протяжении 2-3 минут.

4. Препараты исследуют в поляризованном свете с кварцевым компенсатором и при наличии в препаратах деформированных полигональных камер и/или округлых, и/или овалоидных, и/или ромбовидных, с отростками и без отростков, включений пестрой окраски диагностируют жировой гепатоз.

Приводим данные о БИ (энергоинформационной модели излучения биообъекта) – варианте биологического жидкого кристалла, реагирующего на излучение появлением специфической структуры.

Информационные излучения от различных объектов (живых, биокосных, косных) – один из общих принципов энергоинформационного взаимодействия в природе.

Под информационным воздействием понимается специфическая реакция систем на слабый вещественно-энергетический стимул, воспринимаемый как сигнал в форме кода (Н.Ф.Раймес. Системный подход к решению проблемы взаимодействия среды с биологическим объектом. В кн.: Электромагнитные поля в биосфере, т.1., C.294-300, М., 1984).

Структура – мгновенный снимок внутренних взаимодействии в системе (А.А.Малиновский. Теория структуры и её место в системном подходе. В кн.: Системные исследования. Ежегодник. М., 1970, с.10-31).

Мы применили БИ для регистрации биологического излучения печени на основании данных о том, что от человека (его органов) во все стороны излучаются модулированные биоэлектромагнитные излучения. Возникают сложные информационно-закодированные многочастотные паттерны колебаний, волновое излучение, формирующее индивидуальные информационно-энергетические коды (В.Л.Введенский, В.И.Ожогин. Сверхчувствительная магнитометрия и биомагнетизм. М., 1986; Ш.М.Коган, Физическая природа биополя человека. В кн.: Аномальные явления, факты, исследования, гипотезы. М., 1991., вып.1. С.24-37).

На фиг.4 приведена исходная структура БИ, виден ячеистый тип сборки препарата.

На фиг. 5 приведены структуры БИ, полученные при помещении стеклянных пластин с нанесенным на них БИ на зону печени здорового человека. Пластины выдержали 3 минуты, высушили в термостате при Т=+18°С на протяжении 3 минут и исследовали в поляризованном свете с кварцевым компенсатором (КК). Присутствуют ориентированные полигональные камеры, внешний облик которых напоминает гепатоциты (фиг.1).

Предлагаемый способ сопоставлен с известными способами определения жирового гепатоза. Всего проведено 318 исследований. Выявлено, что статистическая значимость составила р<0,05.

Пример 1, фиг.6. Б-ой К. Диагноз: Жировой гепатоз. Сахарный диабет, II тип. История болезни №398. На фиг.6 приведена структура БИ, полученная при помещении стеклянных пластин (СП) на кожу правого подреберья в зоне проекции печени.

Присутствуют деформированные полигональные камеры с округлыми и ромбовидными включениями без отростков пестрой окраски.

Технология. На 6 стеклянных пластин (СП) нанесли по 0,02 мл БИ и разместили их в правом подреберье в зоне проекции печени, выдержали 2 минуты, затем высушили в термостате 3 минуты при Т=+20°С и исследовали в поляризованном свете с КК.

Присутствуют деформированные полигональные камеры с округлыми и ромбовидными включениями пестрой окраски. Одновременно произвели пункционную биопсию печени с исследованием биоптата и УЗИ печени.

Биоптат: выраженная зональная жировая дистрофия, преобладают среднекапельные жировые включения, преимущественно центролобулярно, диаметр капель до 10-12 мкм.

УЗИ: Печень Пд – 152 мм (N<140 мм). Лд – 74 мм (N<65 мм).

Форма – обычная.

Контуры – ровные.

Эхогенность – обычная.

Структура – однородная, мелкозернистая.

Желчные протоки – не расширены.

Воротная вена – 10,5 мм

Сосудистый рисунок – обычный.

В 6, 7 сегментах печени по висцеральной поверхности определяются зоны повышенной эхогенности – 1,5×2 см, 2,3×3,5 см, однородной мелкозернистой структуры, с неровными контурами.

Заключение: УЗ – признаки очаговых изменений печени. Жировой гепатоз.

Диагноз ЖГ подтвердился.

Пример 2, фиг.7. Б-ой Н. Диагноз: жировой гепатоз алкогольной этиологии. История болезни №18. На фиг.7 приведена структура БИ, присутствуют деформированные полигональные камеры, включения -овалоидные, округлые, ромбовидные, с отростками и без пестрой окраски.

Технология: на СП нанесли по 0,01 мл БИ в виде дорожки и разместили в правом подреберье, в зоне проекции печени, выдержали 3 минуты, затем высушили в термостате при Т=+19°С на протяжении 2 минут, исследовали в поляризованном свете с КК. Найдены деформированные полигональные камеры, включения – овалоидные, округлые, ромбовидные, с отростками и без отростков, пестрой окраски.

Одномоментно проведена биопсия и УЗИ печени.

Биоптат: выраженный стеатоз, гепатоциты заполнены жиром, который расположен в центральных и промежуточных отделах долек (3-я – 2-я зоны ацинуса). Отдельные гепатоциты содержат крупные жировые вакуоли.

УЗИ:

Печень Пд 164 мм (N<140 мм). Лд 92 мм (N<65 мм).

Форма обычная.

Контуры – неровные.

Эхогенность – повышена.

Структура – мелкозернистая.

Желчные протоки – не расширены.

Воротная вена – 12 мм.

Сосудистый рисунок обеднен.

Заключение: УЗ – признаки диффузных изменений печени (жировой гепатоз).

Диагноз ЖГ подтвердился.

Пример 3, фиг.8. Б-ная М. Диагноз: Жировой гепатоз медикаментозного генеза (воздействие тетрациклина). История болезни № 279.

На фиг.8 приведена структура БИ – видны деформированные полигональные камеры с округлыми, ромбовидными включениями пестрой окраски, с отростками и без отростков.

Технология: На СП нанесли по 0,02 мл БИ в виде дорожки, поместили в правое подреберье, в зону проекции печени, выдержали 3 минуты, высушили в термостате при Т=+20°С на протяжении 2 минут, исследовали в поляризованном свете с КК. Найдены деформированные полигональные камеры с округлыми, ромбовидными включениями пестрой окраски, с отростками и без.

Одномоментно сделали биопсию и УЗИ печени.

Биоптат: Найдены гепатоциты с признаками жировой дистрофии, жировые вакуоли расположены более чем в 1/3 печеночных клеток (вторая степень жировой дистрофии).

УЗИ:

Печень ПД 146 мм (N<140 мм). ЛД – 57 мм ( N<65 мм)

Форма – обычная

Контуры – ровные

Эхогенность – обычная.

Структура – однородная, мелкозернистая

Желчные протоки – не расширены.

Воротная вена – 10 мм

Сосудистый рисунок – обычный.

На границе 7, 8 сегментов печени по диафрагмальной поверхности определяется зона повышенной эхогенности – 1,7×2,3 см, с неровными контурами, мелкозернистой структуры.

Заключение: УЗ – признаки очаговых изменений печени. Жировой гепатоз.

Диагноз ЖГ подтвердился.

Пример 4, фиг.9. Б-ой Ж. Диагноз: жировой гепатоз алкогольного генеза. История болезни №345. На фиг.9 присутствуют полигональные деформированные камеры с округлыми включениями пестрой окраски, с отростками.

Технология: на СП нанесли по 0,01 мл БИ в виде дорожки, поместили в правое подреберье, в зону проекции печени, выдержали 2 минуты, высушили в термостате при Т=+18°С на протяжении 2 минут, изучили в поляризованном свете с КК. Найдены деформированные полигональные камеры с округлыми включениями пестрой окраски, с отростками. Одномоментно сделали биопсию печени и УЗИ.

Биоптат: Выражен алкогольный стеатоз, гепатоциты заполнены жиром, сливаются, образуют кисты. Липиды найдены в макрофагах портальных трактов.

УЗИ:

Печень Пд – 148 мм (N<140 мм). Лд – 61 мм (N<65 мм).

Форма – обычная.

Контуры – ровные.

Эхогенность – обычная.

Структура – мелкозернистая

Желчные протоки не расширены.

Воротная вена – 9 мм.

Сосудистый рисунок – обычный.

В 6, 7 сегментах печени по висцеральной поверхности определяется зона повышенной эхогенности 4,5×6 см, с неровным контуром однородной, мелкозернистой структуры.

Заключение: УЗ-признаки очаговых изменений печени. Жировой гепатоз.

Диагноз ЖГ подтвердился.

Больному Ж. был назначен курс лечения урсодезоксихолевой кислотой (УДХК) в дозе 350 мг/сут на протяжении 5 месяцев. УДХК – гидрофильная желчная кислота, обладающая антихолестатическим, цитопротективным и иммуномодулирующими свойствами.

После курса лечения провели контрольную экспресс-диагностику структурных изменений в печени при помощи разработанного нами БИ. На фиг.9а приведена структура БИ, полученная при регистрации излучения печени пациента Ж.: присутствуют камеры полигональной формы (вариант нормы).

Одновременно провели УЗИ печени.

Печень: форма – обычная.

Эхогенность – не повышена.

Желчный проток не расширен.

Воротная вена – 14 мм.

Левая доля – 65 мм.

Правая доля 140 мм.

Контуры ровные, структура однородная, сосудистый рисунок обычный.

Заключение: патологии не выявлено.

Данные биопсии печени патологии не обнаружили.

Пример 5, фиг.10. Б-ой А. Диагноз: жировой гепатоз. Ожирение III степени. История болезни № 16. На фиг.10 присутствуют деформированные полигональные камеры с округлыми, ромбовидными и овалоидными включениями пестрой окраски, с отростками и без.

Технология: на СП несли по 0,02 мл БИ в виде дорожки, поместили в правое подреберье, в зону проекции печени, выдержали 3 минуты, высушили в термостате при Т=+19°С на протяжении 3 минут, изучили в поляризованном свете с КК. Найдены деформированные полигональные камеры с округлыми, ромбовидными включениями пестрой окраски, с отростками и без отростков.

Одномоментно провели биопсию и УЗИ печени.

Биоптат: крупнокапельная жировая дистрофия II степени. Диаметр жировых капель до 21 мкм, найдены жировые кисты.

УЗИ: печень Пд – 187 мм (N<140 мм). Лд – 92 мм (N<65 мм).

Форма – обычная.

Контуры – неровные.

Эхогенность – повышена.

Структура – мелкозернистая.

Желчные протоки – не расширены.

Воротная вена – 10 мм.

Сосудистый рисунок – обеднен.

Заключение: Уз – признаки диффузных изменений печени (жировой гепатоз).

Диагноз ЖГ подтвердился.

Пример 6 фиг.11. Б-ная И. Диагноз: Жировой гепатоз, обусловленный приемом некорригируемых доз преднизолона. История болезни № 181. На фиг.11 присутствуют деформированные полигональные камеры, с округлыми, овалоидными включениями пестрой окраски, с отростками и без отростков.

Технология: на СП нанесли по 0,01 мл БИ в виде дорожки, поместили в правое подреберье, в зону проекции печени, выдержали 2 минуты, высушили в термостате при Т=+20°С на протяжении 2 минут, изучили в поляризованном свете с КК.

Найдены деформированные полигональные камеры с округлыми и овалоидными включениями пестрой окраски, с отростками и без. Одномоментно произвели биопсию и УЗИ печени.

Биоптат: Обнаружен макровезикулярный стеатоз. Клеточную цитоплазму заполняет одна большая капля, сдвигающая клеточное ядро в сторону.

УЗИ: печень Пд – 146 мм (N<140 мм). Лд – 76 мм (М<65 мм).

Форма – обычная.

Контуры – ровные.

Эхогенность – обычная.

Структура – однородная, мелкозернистая.

Желчные протоки – не расширены.

Воротная вена – 10,5 мм.

Сосудистый рисунок – усилен.

В 4, 7, 8 сегментах печени определяется зона повышенной эхогенности, неправильной формы, общим размером 5,5×7 см, с неровными контурами, однородной структуры.

Заключение: Уз – признаки локальных изменений печени. Жировой гепатоз.

Диагноз жирового гепатоза подтвердился.

Пример 7, фиг.12. Б-ой Д. Диагноз: Жировой гепатоз. Тяжелый гипотиреоз. История болезни № 38.

На фиг.12 видны деформированные полигональные камеры с ромбовидными включениями пестрой окраски без отростков.

Технология: на СП нанесли по 0,02 мл БИ в виде дорожки, поместили в правое подреберье, в зону проекции печени, выдержали 3 минуты, высушили в термостате при Т=+18°С на протяжении 3 минут, изучили в поляризованном свете с КК. Найдены деформированные полигональные камеры с ромбовидными включениями пестрой окраски без отростков.

Одномоментно сделали биопсию печени и УЗИ.

Биоптат: Более 1/3 гепатоцитов содержат крупные жировые вакуоли, диаметр отдельных до 25 мкм. Жировой стеатоз II степени.

УЗИ

Печень Пд – 148 мм (N<140 мм). Лд – 65 мм (N<65 мм).

Форма – обычная.

Контуры – ровные.

Эхогенность – обычная.

Структура – однородная, мелкозернистая.

Желчные протоки – не расширены.

Воротная вена – 11 мм.

Сосудистый рисунок – обычный.

В 5, 6, 7 сегментах печени определяется зона неправильной формы, повышенной эхогенности, общим размером 6×4,5 см, с неровными контурами мелкозернистой структуры.

Заключение: Уз – признаки локальных изменений в печени. Жировой гепатоз.

Диагноз ЖГ подтвердился.

Преимущества предложенного способа.

Применение высокочувствительного биологического индикатора – маркера нарушенной структуры печени при жировом гепатозе – позволяет обеспечить высокую информативность и эффективность, нативность и физиологичность, неинвазивность способа.

По сравнению с базовыми способами диагностики жирового гепатоза время исследования сокращается на 30-40%, а материальные затраты – на 65%.

Медико-биологический и социальный эффект способа заключается в его доступности и возможности проведения, скрининговых исследований.

Формула изобретения

Способ экспресс-диагностики жирового гепатоза, отличающийся тем, что предварительно готовят биологический индикатор, состоящий из 0,1% водного раствора смеси аминокислот – аспарагиновой, глутаминовой, глицина, триптофана, валина, лейцина, пролина, аргинина, треонина, серина; 0,5% водного раствора дофамина; 0,25% водного раствора натриевой соли ДНК, 12% водного раствора сернокислой магнезии в соотношении 3:1:1:5, который наносят в объеме 0,01-0,02 мл в виде дорожки на 6-7 стеклянных пластин, помещают их на поверхность кожи правого подреберья в зону проекции печени, выдерживают на протяжении 2-3 мин, сушат при Т=+18-20°С, в поляризованном свете с кварцевым компенсатором исследуют излучение печени, и при наличии в препарате деформированных полигональных камер, и/или округлых, и/или овалоидных, и/или ромбовидных, с отростками и без отростков, включений пестрой окраски, диагностируют жировой гепатоз.

РИСУНКИ

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 24.11.2007

Извещение опубликовано: 10.07.2009 БИ: 19/2009