Патент на изобретение №2305838
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВОЗНИКНОВЕНИЯ ПОВТОРНЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА, ЧАСТО И ДЛИТЕЛЬНО БОЛЕЮЩИХ ОРЗ
(57) Реферат:
Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии. Сущность способа: у детей исследуют микрофлору толстого кишечника и слизистой оболочки ротоглотки стандартным микробиологическим методом с выделением аэробных и анаэробных микроорганизмов. Определяют титры антигенов адено- и реовирусов в мазках из ротоглотки и адено-, рео- и ротавирусов в фекальном материале через 3 и более недель после перенесенного острого бронхолегочного заболевания. При обнаружении антигенов адено-, рео- или ротавирусов в фекальном материале и антигенов адено- или реовирусов в мазке со слизистой оболочки ротоглотки в титрах
(56) (продолжение): CLASS=”b560m”Инфекционные болезни. – М: Медицина, 1982, с.181-185, с.190. RU 2219944 C1, 27.12.2003. SHAMSIEV F.M. Microbial intestinal disturbances in children with frequent acute complicated pneumonia. Lik. Sprava. 2001, Mar-Apr., (2), p.84-86, реф. Найдено из БД PubMed PMID: 11519440. [Найдено 30.06.2006]. [он-лайн]. RU 2141663 С1, 20.11.1999.
Изобретение относится к области здравоохранения и найдет применение в педиатрии при прогнозировании возникновения повторных респираторных заболеваний у детей раннего возраста, часто и длительно болеющих ОРЗ. Сопряженная оценка состояния микрофлоры толстого кишечника и верхних дыхательных путей у детей раннего возраста с учетом не только бактериального, но и вирусного компонентов микробиоценозов позволила уточнить представления о патогенезе предрасположенности к повторным инфекционным заболеваниям дыхательной системы, конкретизировать терапию и определить прогностическую роль дисбиотических изменений в микроэкологических системах толстого кишечника и верхних дыхательных путей в формировании контингента часто и длительно болеющих респираторными заболеваниями детей раннего возраста. Проведенными исследованиями по научно-медицинской и патентной литературе выявлены различные способы прогнозирования течения острых бронхолегочных заболеваний и высокой частоты их повторного возникновения у детей с учетом состояния микрофлоры детского организма. Так в работе Огошковой И.А. «Нарушение иммунитета, микробиоценоза кишечника, их коррекция бифидумбактерином и карболеном у детей первых трех месяцев жизни с тяжелыми формами острой пневмонии» (Автореф. дис. к.м.н. – Челябинск, 1996. – 23 с.) доказана прямая взаимосвязь между степенью дисбиотических изменений в микроэкологической системе толстого кишечника, с одной стороны, и тяжестью клинического течения воспалительного процесса в легких и выраженностью нарушений иммунной системы, с другой. В работе Сиротиной М.Д. «Формирование микробиоценоза основных биотопов в норме и при патологии у детей дошкольного возраста» (Автореф. дис. к.м.н. – Архангельск, 1998. – 18 с.) исследовано состояние микробиоценозов толстого кишечника и верхних дыхательных путей у эпизодически и часто болеющих респираторными заболеваниями детей 4-7 лет и показан более выраженный характер сочетанного дисбиоза изучаемых биотопов в группе часто болеющих детей, что, по мнению автора, позволяет отнести указанную категорию детей к группе риска по развитию оппортунистической инфекции любой локализации. В работе Голищевой О.В. «Микробиологическая характеристика острых бронхолегочных заболеваний у детей раннего возраста в современных условиях» (Автореф. дис. к.м.н. – Ленинград, 1989. – 21 с.) предложена методика прогнозирования осложненного течения острого бронхолегочного процесса и выделения детей в группу «риска» по затяжному (рецидивирующему) течению острой пневмонии или бронхита на основе наиболее информативных признаков (анамнестических – ранее перенесенные заболевания (частота); микробиологических – наличие вирусо-бактериальных ассоциаций в качестве этиологического фактора данного респираторного заболевания; иммунологических – наличие повышенного уровня ЦИК и антииммуноглобулинов в период реконвалесценции; и лабораторных), представленных в виде прогностической таблицы и прогностического индекса. Недостатком предложенного способа является возможность прогнозирования течения только одного эпизода бронхолегочного заболевания, в этиологии которого доказано участие вирусо-бактериальных ассоциаций, с использованием инвазивных методик (серологическое исследование парных сывороток с определением титра антител к вирусам – возбудителям респираторных инфекций) и бактериологического исследования мокроты, получение которой затруднено у детей раннего возраста. При этом о возможности возникновения повторных эпизодов бронхолегочных заболеваний можно судить только косвенно, низкая точность прогноза. В работе Сагитовой Г.Р. «Клинико-диагностическое значение комплексной оценки показателей естественной защиты организма при бронхолегочных заболеваниях у детей» (Автореф. дис. к.м.н. – Астрахань, 1998. – 19 с.) предложен способ улучшения диагностики и прогнозирования бронхолегочных заболеваний путем исследования показателей естественной резистентности организма: количества нулевых и фагоцитирующих эпителиальных клеток и полиморфноядерных лейкоцитов в цитограммах слизистых оболочек верхних дыхательных путей, микробиоценоза и бактерицидной активности кожи по гемолитическому индексу, активности лизоцима слюны. Увеличение гемолитического индекса кожи выше средневозрастной нормы выявляет нарушение адаптации организма ребенка и позволяет прогнозировать высокий риск развития респираторной инфекции. Недостатком способа является низкая точность прогноза, учет состояния микрофлоры и бактерицидной активности только кожи, лишь косвенно отражающей снижение барьерных функций слизистых оболочек дыхательных путей. Из патентных источников известен «Способ прогнозирования частоты рецидивов инфекционных заболеваний дыхательных путей и стойкости эффекта оздоровления у дошкольников» (Патент РФ №2169923, G01 №33/53, 33/48, БИ №18, 2001 г.) путем определения наличия условно-патогенной микрофлоры в кале, лейкоцитарной формулы крови, уровня Ig A, M, G, оценки состояния бактерицидной функции нейтрофилов периферической крови с помощью НСТ-теста и фагоцитарной активности нейтрофилов. При выявлении 10 и более связей с силой корреляции менее 0.5 определяют напряжение иммунной системы, прогнозируют нестойкий клинический эффект оздоровления и предрасположенность к частым рецидивам заболеваний дыхательной системы. Этот способ наиболее близок к заявляемому и взят в качестве прототипа. Недостатком способа является недостаточная точность прогнозирования, так как не учитывается состояние микрофлоры верхних дыхательных путей, кроме того, не исследована вирусная составляющая микробиоценоза толстого кишечника, что не отражает всей сложности происходящих в микроэкологической системе детского организма изменений при формировании у ребенка склонности к частым повторным заболеваниям дыхательной системы и не позволяет осуществить комплексный подход к терапии. Целью настоящего изобретения является повышение точности прогнозирования возникновения повторных респираторных заболеваний у детей раннего возраста, часто и длительно болеющих ОРЗ, что позволяет увеличить эффективность их реабилитации после перенесенного острого бронхолегочного заболевания и снизить риск развития хронических и рецидивирующих форм заболеваний дыхательной системы. Поставленная цель достигается исследованием у детей микрофлоры толстого кишечника и слизистой оболочки ротоглотки, а также определением антигенов адено- и реовирусов в мазках из ротоглотки и адено-, рео- и ротавирусов в фекальном материале через 3 и более недель после перенесенного острого инфекционного заболевания дыхательной системы, и при обнаружении антигенов адено-, рео- или ротавирусов в фекальном материале и антигенов адено- или реовирусов в мазке со слизистой оболочки ротоглотки в титрах Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. Производят забор фекалий в количестве 1 г стерильной стеклянной палочкой в стерильную пробирку с 9 мл тиогликолевого буфера для сохранения анаэробов. Время транспортировки проб не превышает 1 часа с момента взятия материала. Качественный и количественный состав фекальной микрофлоры изучают в соответствии с методическими рекомендациями «Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника» (Москва, 1991 г.). Для этого содержимое пробирки тщательно перемешивают стерильной стеклянной палочкой и оставляют на 10-15 минут при комнатной температуре для осаждения грубых частиц. Далее готовят десятикратные разведения надосадочной жидкости от 10-1 до 10-10 в тиогликолевом буфере в объеме 4.5 мл, используя при приготовлении каждого разведения отдельную пипетку. Затем из разведений производят высевы на пластинчатые питательные среды: МРС-2 для лактобактерий, кровяной агар для бактероидов (КАБ), Эндо, кровяной агар, желточно-солевой агар, среду Сабуро (с распределением материала по поверхности среды стерильным стеклянным шпателем), в высокий столбик среды Блаурокка, Вильсона-Блера, а также на скошенный мясопептонный агар – посев по Шукевичу, объем посевной дозы 0,1 мл. После посева среду КАБ и МРС-2 помещают в микроанаэростат МИ-752, откачивают воздух вакуумным насосом и заполняют его газовой смесью: 80% азота, 10% углекислого газа, 10% водорода. Посевы аэробных бактерий термостатируют 1-2 суток, а анаэробных – 3-7 суток при температуре 37°С. Выделенные чистые культуры идентифицируют по морфологическим, тинкториальным, культуральным, а также биохимическим свойствам с помощью Lachema тест-систем, согласно определителю Берджи (1997 г.). Подсчет микроорганизмов в 1 г фекалий производят следующим образом. Учитывают количество выросших колоний, степень разведения исследуемого материала и величину посевной дозы. Количественную оценку осуществляют по формуле:
где n – количество выросших колоний. Показатели концентрации представляют в lg числа КОЕ микробов на 1 г фекалий. Степень микробиологических нарушений при дисбиозе кишечника устанавливают в соответствии с отраслевым стандартом «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» (Москва, 2004 г.). Микробиологическое исследование микрофлоры ротоглотки осуществляют следующим образом. Забирают мазок со слизистой оболочки ротоглотки стерильным ватным тампоном утром натощак. Затем тампон помещают в стерильную Port-a-cul пробирку, содержащую редуцированную в атмосфере углекислого газа агаризованную транспортную среду «Becton Dickinson», обеспечивающую оптимальные условия для сохранения жизнеспособности аэробных, факультативно- и облигатно-анаэробных микроорганизмов. Ватный тампон с исследуемым материалом тщательно отжимают о стенки пробирки вращательными движениями. Содержимое ресуспендируют пипеткой до получения гомогенной массы. Из исходного материала готовят 10-кратные разведения в тиогликолевом буфере от 10-1 до 10-7. Из разведений производят высевы пипеткой по 0,1 мл на соответствующие пластинчатые питательные среды (кровяной агар, МРС-2 для лактобактерий, среду КАБ для неклостридиальных анаэробов, желточно-солевой агар, среды Эндо и Сабуро), скошенный мясопептонный агар (по Шукевичу) и высокий столбик среды Блаурокка. Культивирование аэробных и анаэробных бактерий, подсчет и идентификацию выделенных микроорганизмов проводят аналогично изложенному при описании микробиологического метода исследования фекалий. Для определения адено-, рео- и ротавирусов в фекальном материале, а также адено- и реовирусов в мазках со слизистой оболочки ротоглотки используют РНГА с коммерческими тест-системами «Аденотест», «Реотест» и «Ротатест» отечественного производства, которые включают эритроцитарные иммуноглобулиновые диагностикумы и иммунную асцитную жидость к соответствующим вирусам (Колпаков С.А., 2001 г.). Для этого десятикратно разведенный в физиологическом растворе исследуемый материал (фекалии, отделяемое ротоглотки) центрифугируют 20 минут при 2000 оборотах в минуту. Надосадочную жидкость используют для постановки РНГА. РНГА проводят микрометодом в объеме 75 мкл в планшете для иммунологических реакций с U-образными лунками. В начале готовят 2 ряда 10-кратных разведений исследуемой надосадочной жидкости в физиологическом растворе от 10-1 до 10-14 в объеме 25 мкл. Затем во все лунки первого ряда вносят такой же объем 0.9% раствора хлорида натрия, а во второй ряд – иммунную асцитную жидкость в объеме 25 мкл для контроля специфичности реакции. Планшет встряхивают и оставляют для контакта на 20 минут при комнатной температуре. Потом во все лунки добавляют по 25 мкл соответствующего антительного эритроцитарного диагностикума. Планшет встряхивают и оставляют на 1-1,5 часа при комнатной температуре для оседания эритроцитов, после чего учитывают реакцию. Наличие антигенов вируса в надосадочной жидкости и его титр определяют по результатам реакции гемагглютинации в первом ряду. В дальнейшем проводят оценку полученных результатов и при обнаружении антигенов адено-, рео- или ротавирусов в фекальном материале и антигенов адено- или реовирусов в мазках со слизистой оболочки ротоглотки в титрах Клинические примеры. Пример №1. Ребенок, Роменская Наталья, 2 года 10 месяцев, наблюдается в группе часто болеющих детей. Из анамнеза известно, что девочка переносит острые респираторные заболевания 8-10 раз в год. Через 3 недели после перенесенной респираторной инфекции ребенку наряду с общеклиническими методами исследования проведено исследование состава микрофлоры толстого кишечника и слизистой оболочки ротоглотки стандартным микробиологическим методом с выделением аэробных и анаэробных микроорганизмов и определение титра вирусных антигенов в фекальном материале и в мазке со слизистой оболочки ротоглотки. Выявлено: в фекальном материале – антигены аденовирусов – 108, реовирусов – 108; в мазке со слизистой оболочки ротоглотки – антигены аденовирусов – 108, реовирусов – 108; при микробиологическом исследовании фекалий – дисбиоз кишечника III степени: бифидобактерии – 106, лактобактерии – 103, лактозоположительные эшерихии – 108, эшерихии лактозоотрицательные с гемолитической активностью – 108, энтерококки – 107, лецитиназоотрицательные стафилококки – 107, дрожжеподобные грибы рода Candida – 105, клебсиеллы – 108; при микробиологическом исследовании отделяемого слизистой оболочки ротоглотки – пиогенный стрептококк – 105, фекальный энтерококк – 103, коринебактерии – 106, пептострептококки – 106, эубактерии – 104, дрожжеподобные грибы рода Candida – 103, что свидетельствует о неблагоприятном прогнозе – сохранении высокой частоты острых респираторных заболеваний; и обуславливает назначение комплексной патогенетической терапии. Дальнейшее клиническое наблюдение и проведенная на основании результатов исследования комплексная патогенетическая терапия позволили предотвратить возникновение повторных респираторных заболеваний. Пример №2. Ребенок, Бубнов Дмитрий, 2 года 3 месяца, наблюдается в группе часто болеющих. Из анамнеза известно, что мальчик болеет острыми респираторными заболеваниями ежемесячно, при этом 4 раза отмечался обструктивный бронхит, угрожаем по развитию бронхиальной астмы. Ребенку проведено обследование по предлагаемой методике. Обнаружено: в фекальном материале – антигены реовирусов – 1012, ротавирусов – 108, в мазке со слизистой оболочки ротоглотки – антигены аденовирусов – 1012, при микробиологическом исследовании фекалий – дисбиоз кишечника III степени: бифидобактерии – 106, лактобактерии – 109, энтеропатогенные эшерихии – 109, энтерококки – 106, клостридии – 106, дрожжеподобные грибы рода Candida – 106, клебсиеллы – 108; при микробиологическом исследовании отделяемого слизистой оболочки ротоглотки – эпидермальный стафилококк – 105, золотистый стафилококк – 105, пиогенный стрептококк – 105, кишечная палочка – 103, фузобактерии – 105, пептострептококки – 104, дрожжеподобные грибы рода Candida – 104, что свидетельствует о выраженных нарушениях в составе микрофлоры обоих биотопов и неблагоприятном прогнозе – сохранении предрасположенности к высокой частоте респираторных заболеваний и осложненному их течению, что диктует необходимость проведения комплексной патогенетической терапии. Дальнейшее клиническое наблюдение и проведенная на основании результатов исследования комплексная патогенетическая терапия позволили предотвратить возникновение повторных респираторных заболеваний. Предлагаемым способом обследовано 124 ребенка. Предлагаемый способ прогнозирования возникновения повторных острых бронхолегочных заболеваний у детей раннего возраста, часто и длительно болеющих ОРЗ, позволяет повысить точность прогноза путем сопряженной оценки состояния микрофлоры толстого кишечника и верхних дыхательных путей с учетом и бактериального, и вирусного компонентов микробиоценозов, что позволит своевременно выявить группы риска, нуждающиеся в комплексной патогенетической терапии по коррекции микроэкологических нарушений, направленной на предупреждение частого возникновения острых бронхолегочных заболеваний.
Формула изобретения
Способ прогнозирования возникновения повторных респираторных заболеваний у детей раннего возраста, часто и длительно болеющих ОРЗ, предусматривающий лабораторное обследование после перенесенного острого бронхолегочного заболевания, отличающийся тем, что у больных через 3 и более недель исследуют микрофлору толстого кишечника и ротоглотки с выделением аэробных и анаэробных микроорганизмов и определяют титры вирусных антигенов в фекальном материале и в мазке со слизистой оболочки ротоглотки и при обнаружении антигенов адено-, рео или ротавирусов в фекальном материале и антигенов адено- или реовирусов в мазке со слизистой оболочки ротоглотки в титрах
MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 13.04.2008
Извещение опубликовано: 20.04.2010 БИ: 11/2010
|
||||||||||||||||||||||||||
108 в сочетании с дисбиозом кишечника III степени и дисбиотическими изменениями в составе микрофлоры ротоглотки прогнозируют предрасположенность ребенка к высокой частоте респираторных заболеваний. Использование способа позволяет своевременно выявить детей группы риска, нуждающихся в комплексной патогенетической терапии по коррекции микроэкологических нарушений, направленной на предупреждение частого возникновения острых бронхолегочных заболеваний.