Патент на изобретение №2303995

(54) СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ИММУНОРЕГУЛЯТОРНЫМ СВОЙСТВОМ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

(57) Реферат:

Изобретение относится к биофармакологии и медицине и касается разработки средства, обладающего иммунорегуляторным свойством, в частности свойством индуцировать супрессорную активность мононуклеарных клеток и секрецию ими цитокинов, указанное средство содержит трофобластический -1-гликопротеин (ТБГ) и иммуноглобулин (Ig) класса G или А или М. Согласно второму изобретению для лечения аутоиммунных заболеваний применяют средство, содержащее ТБГ и Ig, класса G или А или М, которое вводят парэнтерально. Изобретение обеспечивает ускоренный клинический эффект на стадии обострения аутоиммунного заболевания. 2 н. и 7 з.п.ф-лы, 30 табл.

Изобретения относятся к области медицины, в частности к новым биологически активным веществам (БАВ), обладающим иммунорегуляторным свойством, их применению и могут быть использованы в практической медицине для лечения аутоиммунных заболеваний, а также в экспериментальной биохимии и ветеринарии.

Однако известное средство не предназначено для использования на стадии обострения аутоиммунного заболевания, а предназначено лишь для использования в стадии ремиссии. Кроме того, для достижения клинического эффекта необходимо постоянное введение огромных доз иммуноглобулинов на протяжении нескольких лет.

По технической сущности наиболее близким к заявляемым изобретениям является трофобластический -1-гликопротеин (ТБГ), обладающий иммунорегуляторным свойством и предназначенный для лечения различных аутоиммунных заболеваний (см. патент РФ №2056852, кл. А61К 35/50, 1994).

Однако известное средство при использовании его в стадии обострения аутоиммунного заболевания может проявлять свое действие лишь через 4-5 дней после его введения в организм больного.

Техническим результатом является разработка средства, обладающего иммунорегуляторным свойством и ускоренным клиническим эффектом на стадии обострения преимущественно при лечении аутоиммунных заболеваний.

Достигается это тем, что средство, обладающее иммунорегуляторным свойством, содержащее трофобластический -1-гликопротеин (ТБГ), согласно изобретению дополнительно содержит иммуноглобулин (Ig), кроме того, в качестве иммуноглобулина используют иммуноглобулин класса G (Ig-G).

Согласно второму изобретению для лечения аутоиммунных заболеваний применяют средство, содержащее ТБГ и Ig, причем в качестве иммуноглобулина используют иммуноглобулин класса G (Ig-G), а ТБГ и Ig-G взяты в равных долях или в долях, соотношение которых составляет 1:19, соответственно, кроме того, при лечении аутоиммунных заболеваний средство, содержащее ТБГ и Ig, вводят парэнтерально.

Сущность изобретения заключается в том, что заявляемое средство, содержащее ТБГ и Ig, обладает способностью подавлять пролиферативную активность мононуклеарных клеток, индуцировать их супрессорную активность и секрецию ими цитокинов ТФР-1, ИЛ-10, ИЛ-6. Кроме того, использование заявляемого средства позволяет достичь более высокого клинического эффекта, который наступает в 1-е сутки после его введения.

ТБГ можно получать из отходов производства (фракция А) гамма-глобулина (а.с. №1341736, кл. А61К 35/16, 1985).

Иммуноглобулин Ig может быть получен общеизвестным способом (см., например, В.В.Анастасиев, «Иммуноглобулин для внутривенного введения», Нижний Новгород, изд. НГМА, 2000 г.).

Получение заявляемого средства может быть осуществлено путем смешивания в стеклянной посуде при температуре +1÷10°С исходных составляющих ТБГ и Ig в соотношениях 1:99; 1:19; 1:9; 1:1,5; 1:1.

Лечебный эффект заявляемого средства заключается в том, что оно обладает способностью индуцировать супрессорную активность мононуклеарных клеток больных с аутоиммунными заболеваниями и секрецию мононуклеарными клетками цитокинов ТФР-1, ИЛ-10.

Это позволяет утверждать, что заявляемое средство обладает иммунорегуляторным свойством.

Следует отметить, что осуществляли приготовление средства из вышеуказанных составляющих – ТБГ и Ig-G в различных вышеуказанных долях. Однако значительных различий в результатах испытаний при получении средства из разных соотношений долей не было замечено.

Однако, учитывая экономический подход, можно рекомендовать соотношение ТБГ и Ig-G, равное 1:19.

Это соотношение является оптимальным и с точки зрения эффективности действия средства, и с точки зрения удобства в его приготовлении, хотя при исследовании положительный результат неоднократно был получен и при соотношении, равном 1:99.

Следует отметить, что в качестве Ig использовали его разные классы (типы): Ig-G, Ig-A и Ig-M и получали примерно одинаковые результаты. Однако на практике предпочтение можно отдать классу Ig-G, так как его производство проще.

Биологическая активность заявляемого средства, состоящего из ТБГ и Ig, определялась следующим образом.

Пример 1.

Исследовали действие средства, состоящего из ТБГ и Ig-G, на пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, выделенных по методу Boyum, 1969 г.

Диапазон используемых доз составлял 1 мкг/мл – 960 мкг/мл.

Результаты исследований отражены в таблице 1.

Как видно из таблицы 1, средство, состоящее из ТБГ и Ig-G, подавляет пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванную фитогемагглютинином, в 2 раза сильнее, чем чистый ТБГ.

Пример 2.

Исследовали влияние заявляемого средства, состоящего из ТБГ и Ig-G, на способность индуцировать супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови.

На первом этапе получают суспензию МНК методом седиментации клеток в одноступенчатом градиенте фиколл-уротрасте (метод Boyum).

Периферическую кровь берут у донора путем венопункции в одно и то же время и помещают в пробирки с раствором гепарина из расчета 1 мл крови – 20-30 ед. гепарина. Далее кровь разводят раствором Хенкса без Са⁺⁺ и Mg⁺⁺ в соотношении 1:2 и наслаивают на градиент фиколл-уротраст (плотность 1,078).

Затем проводят центрифугирование в режиме 400 g в течение 30 мин. Взвесь МНК из интерфазы переносят в центрифужную пробирку, добавляют раствор Хенкса без Са⁺⁺ и Mg⁺⁺ и производят 3 последовательных центрифугирования по 10 мин для отмывания клеток от раствора фиколл-уротраст. После 3-го центрифугирования осадок МНК ресуспензируют в 1 мл среды 199 и подсчитывают количество мононуклеарных клеток с помощью камеры Горяева.

На втором этапе МНК делят на две равные части, первую из которых культивируют без активатора супрессоров, вторую – с активатором супрессоров, в качестве которого используют исследуемое средство.

МНК культивируют в пенициллиновых флаконах, закрытых резиновыми пробками №14,5 при температуре 37°С. Среда культивирования RPM-1640 с добавлением 20% сыворотки IV АВ группы крови и глютамина.

В каждом флаконе культивируют 5×10⁶ клеток в 2,0 мл полной среды. К культуре для индукции супрессоров добавляют средство, состоящее из ТБГ и Ig-G в дозах 1-960 мкг/мл.

Культивирование клеток осуществляют 48 ч. После этого МНК отмывают от среды культивирования и осуществляют блокировку пролиферации путем обработки митомицином С – 40 мкг/мл в течение 30 мин при 37°С. Затем отмывают средой 199 с 5% сыворотки IV АВ (охлажденной) трижды. Осадок клеток ресуспензируют, подсчитывают количество ядросодержащих клеток, определяют процент жизнеспособности клеток с помощью 0,1%-ного трипанового синего раствора и разводят до необходимой концентрации. При этом все операции делают раздельно с контрольными клетками и со стимулированной композицией, а для отмывания клеток используют силиконированную посуду.

На следующем этапе в каждую часть контрольных и стимулированных средством МНК добавляют свежевыделенные МНК, стимулированные фитогемагглютинином (ФГА), которые служат отвечающими тест-клетками в равных соотношениях (0,5×10⁶ клеток/мл) для получения тест-культур. Культивирование их проводят в течение 72 ч. После этого с помощью Н³-тимидина оценивают пролиферацию тест-культур и о величине супрессии судят по степени снижения пролиферации в них. Индекс супрессии (ИС) определяют по формуле:

Результаты исследований влияния средства, состоящего из ТБГ и Ig-G, на способность индуцировать супрессорную активность МНС отражены в таблице 2.

Диапазон доз 1-960 мкг/мл.

Как видно из таблицы 2, средство, состоящее из ТБГ и Ig-G, индуцирует супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови, в 2 раза сильнее, чем чистый ТБГ.

Пример 3.

Исследовали влияние средства, состоящего из ТБГ и Ig-G, на способность индуцировать продукцию цитокинов-трансформирующего фактора роста бета 1 (ТФР-1) и интерлейкина-10 (ИЛ-10) мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови.

На первом этапе получали суспензию МНК методом седиментации клеток в одноступенчатом градиенте фиколл

– утротраста (метод Boyum).

МНК делили на 2 равные части, первую из которых культивировали без заявляемого средства, вторую со средством.

МНК культивируют в пенициллиновых флаконах, закрытых резиновыми пробками №14,5 при температуре 37°С. Среда культивирования RPVI-1640 с добавлением 20% сыворотки IV АВ группы крови и глютамина.

В каждом флаконе культивировали 5×10⁶ МНК в 1 мл полной среды. К культуре МНК для индукции выработки цитокинов ТФР-1 и ИЛ-10 добавляли заявляемое средство.

Культивирование клеток осуществляли 24 часа. После этого культуральную среду отделяли от клеток путем центрифугирования (1000g 10 минут и из нее забирали 500 мкл, необходимой для выполнения анализа).

При определении количества ТФР-1 в культуральной среде первоначально производили экстракцию образцов. Этот этап анализа позволяет освободить ТФР-1 из комплексов, сделав его доступным для анализа.

Для этого в полипропиленовую пробирку вносили 0,25 мл (250 мкл) культуральной среды и 0,05 (50 мкл) экстрагирующего раствора. Перемешивали содержимое на вортексе. Инкубировали 30 минут при 4°С. Добавляли в пробирку 250 мкл рабочего буферного раствора для разведения стандартов. На этом этапе происходит разбавление культуральной среды в 2,2 раза.

Далее брали требуемое для проведения анализа число 8 луночных стрипов из разборного микропланшета, покрытого антителами к ТФР-1.

Для повышения достоверности результатов анализа исследуемые и контрольные образцы ставили в дубликатах, используя для каждого образца две лунки. Вносили по 200 мкл каждого стандарта и экстрагированного образца или клотрона в соответствующие лунки. Добавляли по 500 мкл биотинилированных антител к ТФР-1 во все лунки, перемешивали путем постукивания по планшету. Закрывали планшету пленкой и инкубировали 30 минут при комнатной температуре. Полностью удаляли содержимое лунок. Промывали все лунки 4 раза рабочим буферным раствором, добавляя его каждый раз по 400 мл во все лунки. При этом каждый раз полностью заполняли и удаляли из лунок стрипов раствор. После завершения промывки, от остатков влаги освобождали, постукивая перевернутыми стрипами по фильтровальной бумаге. Добавляли 100 мкл рабочего раствора конъюгата стрептавидинпероксидазы в каждую лунку, за исключением хромогенного бланка. Закрывали планшету пленкой и инкубировали 30 минут при комнатной температуре. Полностью удаляли содержимое лунок. Промывали лунки 4 раза рабочим буферным раствором. Далее вносили во все лунки по 100 мкл хромогенного раствора тетраметилбензидина (ТМБ). Инкубировали 20-30 минут при комнатной температуре в темноте до появления голубой окраски в лунках с калибровочной пробой с максимальным содержанием ТФР-1.

Вносили в каждую лунку по 100 мкл стоп раствора (раствор 1Н серной кислоты) для остановки ферментативной реакции. Перемешивали реагенты путем осторожного постукивания по держателю стрипов. Цвет раствора изменялся с голубого на желтый.

Регистрацию результатов проводили фотометрически на фотометре для иммуноферментного анализа при длине волны 450 нм сразу после остановки ферментативной реакции.

Для определения концентрации ТФР-1 в исследуемых образцах строили калибровочную кривую в координатах: ось абсцисс – концентрация ТФР-1 в калибровочных пробах (рг/мл); ось ординат – соответствующее значение оптической плотности.

По калибровочной кривой, исходя из полученного значения оптической плотности определяли концентрацию ТФР-1 в исследуемых образцах. Если образцы были предварительно разбавлены, полученные значения концентраций умножали на коэффициент разведения (10, 100, 1000 и т.п.).

Для определения количества ИЛ-10 в культуральной среде брали требуемое для проведения анализа число 8 луночных стрипов из разборного микропланшета, покрытого антителами к ИЛ-10.

Для повышения достоверности результатов анализа исследуемые и контрольные образцы ставили в дубликатах, используя для каждого образца две лунки.

Вносили 50 мкл каждого стандарта, испытуемого образца или контрольного образца в соответствующие лунки. Добавляли по 50 мкл инкубационного буфера для лунок, содержащих стандарты, и 50 мкл разбавляющего рабочего раствора в лунки, содержащие культуральную среду.

Закрывали планшет пленкой и инкубировали 2 часа при комнатной температуре.

Полностью удаляли содержимое лунок.

Промывали все лунки 4 раза рабочим буферным раствором, добавляя его каждый раз по 400 мкл во все лунки. При этом каждый раз полностью заполняли и удаляли из лунок стрипов раствор. Добавляли по 100 мкл биотинилированных антител к ИЛ-10 во все лунки, перемешивали путем постукивания по планшету.

Закрывали планшет пленкой и инкубировали 2 часа при комнатной температуре. Полностью удаляли содержимое лунок, промывали все лунки 4 раза рабочим буферным раствором. Добавляли 100 мкл рабочего раствора конъюгата стрептавидин-пероксидаза в каждую лунку за исключением хромогенного бланка.

Закрывали планшет пленкой и инкубировали 30 минут при комнатной температуре. Полностью удаляли содержимое лунок. Промывали лунки 4 раза рабочим буферным раствором.

Далее вносили во все лунки по 100 мкл хромогенного раствора тетраметилбензидина (ТМБ).

Инкубировали 20-30 минут при комнатной температуре в темноте до появления голубой окраски в лунках с калибровочной пробой с максимальным содержанием ИЛ-10.

Вносили в каждую лунку по 100 мкл стоп раствора (раствор 1Н серной кислоты) для остановки ферментативной реакции. Перемешивали реагенты путем осторожного постукивания по держателю стрипов. Цвет раствора изменялся с голубого на желтый.

Регистрацию результатов также проводили фотометрически на фотометре для иммуноферментного анализа при длине волны 450 нм сразу после остановки ферментативной реакции.

Для определения концентрации ИЛ-10 в исследуемых образцах строили калибровочную кривую в координатах: ось абсцисс – концентрация ИЛ-10 в калибровочных пробах (рг/мл); ось ординат – соответствующее значение оптической плотности.

По калибровочной кривой, исходя из полученного значения оптической плотности, определяли концентрацию ИЛ-10 в исследуемых образцах. Если образцы были предварительно разбавлены, полученные значения концентраций должны быть умножены на коэффициент разведения (10, 100, 1000 и т.п.).

В результате проведенных исследований было установлено, что средство, содержащее ТБГ и Ig-G, обладает способностью индуцировать продукцию одновременно 2-х цитокинов – ТФР-1 и ИЛ-10, мононуклеарными клетками периферической крови.

При этом уровень цитокинов ИЛ-10 и ТФР-1, вырабатываемых мононуклеарными клетками периферической крови под действием заявляемого средства, в 2-3 раза выше, чем под действием чистого ТБГ. Более того, введенное больному заявляемое средство приводит к снятию обострения аутоиммунных заболеваний, действие клинически определяется на первый же день лечения, в то время как при введении больному чистого ТБГ, действие выявляется только на 4-5 дни лечения.

Пример 4.

Исследовали действие средства, состоящего из ТБГ и Ig-G, в соотношении ТБГ и Ig-G (1:99), на пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, выделенных по методу Boyum, 1969 г.

Диапазон используемых доз составлял 1 мкг/мл – 960 мкг/мл.

Результаты исследований отражены в таблице 3.

Как видно из таблицы 3, средство, состоящее из ТБГ и Ig-G в соотношении 1:99, подавляет пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванную фитогемагглютинином, в такой степени, как и заявляемое средство, содержащее ТБГ и Ig-G в соотношении 1:19.

Пример 5.

Исследовали действие средства, состоящего из ТБГ и Ig-G, в соотношении ТБГ и Ig-G (1:1,5), на пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, выделенных по методу Boyum, 1969 г.

Диапазон используемых доз составлял 1 мкг/мл – 960 мкг/мл.

Результаты исследований отражены в таблице 4.

Как видно из таблицы 4, средство, состоящее из ТБГ и Ig-G в соотношении 1:1,5, подавляет пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванную фитогемагглютинином, в такой степени, как и заявляемое средство, содержащее ТБГ и Ig-G в соотношениях 1:19 и 1:99.

Пример 6.

Исследовали действие средства, состоящего из ТБГ и Ig-G, в соотношении ТБГ и Ig-G (1:9), на пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, выделенных по методу Boyum, 1969 г.

Диапазон используемых доз составлял 1 мкг/мл – 960 мкг/мл.

Результаты исследований отражены в таблице 5.

Как видно из таблицы 5, средство, состоящее из ТБГ и Ig-G в соотношении 1:9, подавляет пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванную фитогемагглютинином, в такой степени, как и заявляемое средство, содержащее ТБГ и Ig-G в соотношениях 1:19, 1:99 и 1:1,5.

Пример 7.

Исследовали действие средства, состоящего из ТБГ и Ig-G, в соотношении ТБГ и Ig-G (1:1), на пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, выделенных по методу Boyum, 1969 г.

Диапазон используемых доз составлял 1 мкг/мл – 960 мкг/мл.

Результаты исследований отражены в таблице 6.

Как видно из таблицы 6, средство, состоящее из ТБГ и Ig-G в соотношении 1:9, подавляет пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванную фитогемагглютинином, в такой степени, как и заявляемое средство, содержащее ТБГ и Ig-G в соотношениях 1:19, 1:99, 1:9 и 1:1,5.

Пример 8.

Результаты исследований влияния средства, состоящего из ТБГ и Ig-G в соотношении 1:99, на способность индуцировать супрессорную активность МНС отражены в таблице 7.

Диапазон доз 1-960 мкг/мл.

Как видно из таблицы 7, средство, состоящее из ТБГ и Ig-G в соотношении 1:99, индуцирует супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови в такой же степени, как и средство, содержащее ТБГ и Ig-G в соотношении 1:19, и индуцировать продукцию цитокинов-трансформирующего фактора роста бета 1 ТФР-1 и интерлейкина-10 (ИЛ-10) мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови.

Пример 9.

Результаты исследований влияния средства, состоящего из ТБГ и Ig-G в соотношении 1:9, на способность индуцировать супрессорную активность МНС отражены в таблице 8.

Диапазон доз 1-960 мкг/мл.

Как видно из таблицы 8, средство, состоящее из ТБГ и Ig-G в соотношении 1:9, индуцирует супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови в такой же степени, как и средство, содержащее ТБГ и Ig-G в соотношениях 1:19, 1:99, и индуцировать продукцию цитокинов-трансформирующего фактора роста бета 1 ТФР-1 и интерлейкина-10 (ИЛ-10) мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови.

Пример 10.

Результаты исследований влияния средства, состоящего из ТБГ и Ig-G в соотношении 1:1,5, на способность индуцировать супрессорную активность МНС отражены в таблице 9.

Диапазон доз 1-960 мкг/мл.

Как видно из таблицы 9, средство, состоящее из ТБГ и Ig-G в соотношении 1:1,5, индуцирует супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови в такой же степени, как и средство, содержащее ТБГ и Ig-G в соотношениях 1:19, 1:99 и 1:9, и индуцировать продукцию цитокинов-трансформирующего фактора роста бета 1 ТФР-1 и интерлейкина-10 (ИЛ-10) мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови.

Пример 11.

Результаты исследований влияния средства, состоящего из ТБГ и Ig-G в соотношении 1:1, на способность индуцировать супрессорную активность МНС отражены в таблице 10.

Диапазон доз 1-960 мкг/мл.

Как видно из таблицы 10, средство, состоящее из ТБГ и Ig-G в соотношении 1:1, индуцирует супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови в такой же степени, как и средство, содержащее ТБГ и Ig-G в соотношениях 1:19, 1:99, 1:9 и 1:1,5, и индуцировать продукцию цитокинов-трансформирующего фактора роста бета 1 ТФР-1 и интерлейкина-10 (ИЛ-10) мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови.

Пример 12. ВЫПИСКА из истории болезни.

Больной О., 43 лет, находился на лечении в 5 терапевтическом отделении с диагнозом: Ревматоидный артрит-полиартрит, серопозитивный, с системными проявлениями (лихорадка, лимфаденопатия, анемия, амиотрофии, нейропатия, ревматоидные узелки), активность III ст., стадия III, недостаточность функции суставов III.

При поступлении предъявлял жалобы на выраженные боли в мелких и крупных суставах конечностей (проксимальных межфаланговых кистей рук, пястнофаланговых, лучезапястных, локтевых, плечевых, коленных, голеностопных, плюснефаланговых, грудиноключичных), их припухлость, ограничение подвижности, выраженную скованность в суставах, продолжающуюся в течение всего дня, ощущение покалывания в кончиках пальцев рук и ног, повышение температуры до 38,6°С.

В течение 7 лет отмечал артралгии, в течение 5 лет беспокоят умеренные боли в суставах с их припухлостью. Нерегулярно принимал нестероидные противовоспалительные препараты, для облегчения болей нередко употреблял алкоголь. Настоящее ухудшение состояния за 2 недели до госпитализации – после острой респираторной инфекции – повысилась температура до фебрильных цифр, развилась множественная припухлость суставов, появились вышеперечисленные жалобы. Амбулаторно получал антибиотики, нестероидные противововоспалительные препараты, в последние дни начал употреблять алкоголь. Госпитализирован.

При поступлении состояние тяжелое. Температура тела 38,6°С. Полностью обездвижен из-за болей в суставах и их припухлости. Стонет из-за болей. Кожные покровы бледные. Пастозность голеней. Пальпируются увеличенные (1,5×1,5 см, 1,5×2 см) лимфоузлы (подчелюстные, аксиллярные, паховые). В легких жесткое дыхание (курильщик). Тоны сердца умеренно приглушены, тахикардия до 92 в минуту, пульс ритмичный, удовлетворительного наполнения, АД 130/80 мм рт. ст. Живот мягкий, безболезненный. Печень + 2 см. Селезенка не пальпируется. Симптом поколачивания (Пастернацкого) отрицательный.

Выраженные амиотрофии конечностей. Выраженная припухлость, дефигурация суставов-проксимальных межфаланговых кистей рук, пястнофаланговых, лучезапястных, локтевых, коленных, голеностопных. Гипертермия кожи над суставами. Ограничение активных и пассивных движений в суставах. Ульнарная девиация кистей рук. Контрактуры лучезапястных и локтевых суставов. Ревматоидный узелок в области локтевого сустава слева.

Рентгенография кистей рук

– остеопороз, сужение межсуставных щелей, множественные эрозии, подвывихи.

Анализ крови: Гемоглобин – 86 г/л, Л – 11200, СОЭ – 67 мм/ч, СРБ – 4+, РФ – 1:320, HBs-(-), АСТ – 74, АЛТ – 56, общий белок крови – 66 г/л.

Супрессорная активность Т-лимфоцитов периферической крови при индукции заявляемого средства составила 16%.

ЭКГ-ритм синусовый, диффузые изменения миокарда. Рентгенография органов грудной клетки – очаговых и инфильтративных изменений нет.

Больному проводилось лечение – реопирин по 3 мл внутримышечно ежедневно, диклофенак по 50 мг 3 раза в день, инъекции анальгина с димедролом дважды в день.

Состояние больного без существенной динамики в течение 10 дней. Сохраняются анемия, лихорадка до 37,9-38,8°С, выраженные экссудативные изменения в суставах. Больной обездвижен.

Больному проведен курс ежедневных внутривенных инъекций заявляемого средства, содержащего ТБГ и Ig-G в долях 1:99.

Состояние со значительным улучшением. Заметно уменьшились боли во всех суставах, их припухлость, увеличился объем движений. Температура тела нормализовалась. Исчезла скованность в суставах. Больной начал ходить, смог обслуживать себя. Повысился уровень гемоглобина крови до 125 г/л, снизилась СОЭ до 27 мм/ч, СРБ стал 1+, общий белок крови повысился до 84 г/л.

При повторном анализе выявили повышение супрессорной активности Т-лимфоцитов периферической крови при индукции заявляемого средства – 64,2%. У больного в реакции Оухтерлони на 7, 14 и 28 дни антитела против заявляемого средства не выявлены.

Больной выписан домой в удовлетворительном состоянии.

Больному рекомендовано амбулаторно продолжить прием нестероидных противововспалительных препаратов (диклофенак), назначить базисные препараты (сульфасалазин).

Пример 13.

Больной М., 35 лет, находился на лечении с диагнозом: Ревматоидный артрит-полиартрит серопозитивный, с системными проявлениями (амиотрофия, анемия, нейропатия, лихорадка) активность II ст., стадия II, НФС II.

При поступлении предъявлял жалобы на боли в суставах – проксимальных межфаланговых, пястнофаланговых кистей рук, лучезапястных, плечевых, коленных, голеностопных, припухлость указанных суставов, ограничение подвижности в них. Жалобы на выраженную скованность в суставах по утрам, продолжающуюся до обеда, онемение кончиков пальцев, повышение температуры тела до субфебрильных цифр.

Считает себя больным в течение 5 лет. Начало заболевания с поражения голеностопных и коленных суставов, в последние 2 года присоединилась припухлость лучезапястных суставов и межфаланговых суставов кистей рук. С этого же времени стал отмечать скованность в суставах по утрам. Проводилось лечение нестероидными противовоспалительными препаратами с положительным эффектом. Настоящее ухудшение 3 недели назад – после острого респираторного заболевания – развилась выраженная припухлость суставов – проксимальных межфаланговых, пястнофаланговфых, лучезапястных, коленных, голеностопных, усилилась скованность по утрам (стала продолжаться до обеда), повысилась температура до 37,5°С. Проводимая терапия нестероидными противовоспалительными препаратами, антибиотиками (клацид) – без существенного эффекта, в связи с чем госпитализирован.

При поступлении обездвижен, ходит с трудом, с палочкой.

Дефигурация, припухлость проксимальных межфаланговых и пястнофаланговых суставов кистей рук, лучезапястных, коленных, голеностопных, ограничение активных и пассивных движений в суставах. Гипертермия коленных, лучезапястных и голеностопных суставов. Контрактуры лучезапястных суставов. Выраженные амиотрофии мышц бедер, плечевых. По органам без выраженной патологии.

В анализах крови: Нв – 110 г/л, Л. – 10700, СОЭ – 45 мм/ч, СРБ 3+, РФ 1:160, общий белок 70 г/л, АСТ – 40, АЛТ – 34. Анализ мочи: уд. вес 1025, Л – 1-2 в поле зрения.

Рентгенография суставов кистей рук: остеопороз, сужение межсуставных щелей, множественные эрозии.

Больному проводилось лечение – нестероидные противовоспалительные препараты (диклофенак в инъекциях, реопирин в инъекциях), магнитолазерная терапия, физиотерапия.

Состояние без выраженной положительной динамики. Сохранялись субфебрилитет, припухлость суставов, усилилась скованность в суставах. СОЭ повысилась до 48 мм/час, СРБ 3+.

Супрессорная активность Т-лимфоцитов периферической крови при индукции заявляемого средства, содержащего ТБГ и Ig-G, составила 20%.

Назначены инъекции заявляемого средства, содержащего ТБГ и Ig-G (1:19), ежедневно.

Состояние больного со значительным улучшением. Исчезла скованность в суставах, нормализовалась температура тела. Существенно уменьшились боли в суставах, их припухлость, увеличился объем движений в суставах. Больной свободно ходит по отделению. Активен. Возросла сила сжатия кистей рук с 5 мм рт. ст. до 90 мм рт. ст. (левая рука) и до 110 мм рт. ст. (правая рука). Полностью исчезли припухлость голеностопных и коленных суставов. Повысился уровень гемоглобина крови до 140 г/л. СОЭ снизилась до 22 мм/ч, СРБ стал 1+.

При повторном анализе выявили повышение супрессорной активности Т-лимфоцитов периферической крови при индукции заявляемого средства – 60,4%. У больного в реакции Оухтерлони на 7, 14 и 28 дни антитела против заявляемого средства не выявлены.

Больной в удовлетворительном состоянии выписан на амбулаторное лечение.

С целью изучения безопасности заявляемого средства, состоящего из ТБГ и Ig-G, до его клинического применения проводили изучение его острой токсичности. Изучение острой токсичности проводили в соответствии с Методическими рекомендациями Фармакологического комитета РФ «Требования к доклиническому изучению общетоксичного действия новых фармакологических веществ», Москва, 2001 г. Результаты исследования показали, что при внутрибрюшинном введении 1000-кратной дозы заявляемого средства не оказывалось острого токсичного действия и при этих дозах оказалось невозможным достигнуть его LD₅₀. Таким образом, предлагаемое средство, состоящее из ТБГ и Ig-G, не является токсичным.

Хотя приведенные выше изобретения были описаны довольно подробно, для среднего специалиста в данной области будет вполне понятно, в свете описания этих изобретений, что могут быть сделаны определенные изменения и модификации изобретений без отхода от идеи или сферы действия предлагаемых формул изобретений.

Промышленная применимость

Изложенные преимущества предлагаемого средства, содержащего ТБГ и Ig, обеспечивают возможность широкого применения, как в научных исследованиях, так и в практической медицине, ветеринарии, а также в экспериментальной биохимии.

Пример 14

Больной Б., 35 лет, с диагнозом: рассеянный склероз, церебро-спинальная форма, ремитирующее течение, стадия обострения процесса. Длительность заболевания – 5 лет. В неврологическом статусе: горизонтальный нистагм при взгляде вправо, сухожильные рефлексы живые, на ногах D>S. Брюшные рефлексы – верхние низкие, средние и нижние отсутствуют. Симптом Бабинского с двух сторон. Клонусы стоп, грубее справа. Парезов конечностей нет, мышечный тонус не изменен. Походка атактическая. В позе Ромберга неустойчив. Атаксия при выполнении пяточно-коленной пробы. Задержка мочеиспускания.

Спинно-мозговая жидкость:

белок – 0,7%

реакция Ланге 66644322

Осмотр окулиста:

побледнение височных половин дисков зрительных нервов.

Активность Т-супрессоров периферической крови при индукции ТБГ – 14%.

После введения ТБГ с иммуноглобулином на 2-й день у больного наступили признаки ремиссии. Нормализовалась походка, мочеиспускание. В позе Ромберга устойчив. Пяточно-коленную пробу выполняет четко. Повторная оценка имунного статуса выявила повышение функциональной активности Т-супрессоров периферической крови при индукции ТБГ – 40%. У больного в реакции Оухтерлони на 7,14 и 28 дни антитела против ТБГ не обнаружены.

Пример 15

Больной П., 28 лет, находился в стационаре с диагнозом: Аутоиммунная тромбоцитопеническая пурпура.

Госпитализирован с жалобами на появление сыпи, кровоизлияний на коже, головокружение, слабость, повышение температуры до 37,6°С.

Заболел 3 дня назад после ОР3 – повысилась температура до 37,6°С, появились боли при мочеиспускании, изменился цвет мочи (моча приобрела красный цвет), появились геморрагические высыпания на коже. Госпитализирован. У родственников больного подобные заболевания отсутствуют.

При поступлении: кожные покровы бледные. Мелкоточечные и петехиальные высыпания на коже груди, живота, спины, конечностей, склерах. Умеренное (до 1-1,5 см) увеличение подчелюстных лимфоузлов. Щитовидная железа не пальпируется, периферических отеков нет. Симптом щипка, жгута (+). В легких хрипов нет. Тоны сердца умеренно приглушены, тахикардия до 100 в одну минуту. Пульс ритмичный, удовлетворительного наполнения. АД 105/70 mm Hg. Живот мягкий, безболезненный. Печень, селезенка не увеличены. Симптом Пастернацкого (-). В анализе крови: Hb 98%, Э – 2,6, ретикулоцитов 12%, Л – 10,2, n – 2, сегм. – 68, лимф. – 21, м – 5, ЭОЗ – 4, СОЭ – 39 мм/ч. Тромбоциты 23 тыс. Общий ан. мочи: уд. вес 1021, белок – следы, Э – сплошь покрывают поле зрения. Л – 2-4 в поле зрения.

Биохимический анализ крови: трансаминаза ACT – 39, АЛТ – 28, билирубин 18, холестерин 4,26, глюкоза 5,2, мочевина 4,8, общий белок 80 г/л.

Время свертываемости крови 5 мин (N), продолжительность кровотечения по Дюку – 30 мин (норма 5-10). Активированное время рекальцификации 60 с (N), фибриноген 4,2, протромбин 84%, ретракция кровяного сгустка 0,1′ (N – 0,3-0,5). HB_S – антиген (-), LE-клетки (-), ревмофактор (-), АНФ (-).

Стернальная пункция: в костном мозге признаки раздражения эритроидного ростка, количество мегакариоцитов увеличено.

Рентгеноскопия органов грудной клетки:

Легочные поля прозрачны. Cor – в N. R-графия костей таза, черепа – без патологических отклонений.

УЗИ печени, почек, селезенки – размеры и текстура органов не изменена. Чашечно-лоханочная система без особенностей. Конкрементов нет.

После введения ТБГ с иммуноглобулином на 2-й день у больного наступили признаки ремиссии. Состояние больного с улучшением – температура нормализовалась, артралгии исчезли, гепатуриии нет, геморрагии исчезли. Уровень гемоглобина повысился до 136 г/л, число тромбоцитов увеличилось до 200 тыс. Время кровотечения и ретракция кровяного сгустка нормализовались. Больной выписан домой в удовлетворительном состоянии.

Пример 16

Больная К., 43 лет, находилась на стационарном лечении с диагнозом: Аутоиммунный тиреоидит, хронический гастрит типа А (аутоиммунный), В₁₂-дефицитная анемия.

Поступила с жалобами на общую слабость, похудание, сердцебиение, онемение пальцев ног, неприятные ощущения в эпигастральной области после употребления пищи, нарушение сна, артралгии.

В анамнезе хронический гастрит, тиреоидит, ухудшение состояния в течение последнего месяца – появились вышеуказанные жалобы, потеряла в весе 4 кг.

При поступлении: Кожные покровы бледные с желтушным оттенком. Периферических отеков нет. Пальпируются подчелюстные лимфоузлы размером 1×1,2 см, мягкие, подвижные, умеренно чувствительные. Увеличение щитовидной железы 2-3 степени – железа при пальпации умеренно плотная, подвижная, не спаяна с окружающими тканями, поверхность ее гладкая.

В легких дыхание везикулярное, хрипов нет. Cor-тоны звучные, тахикардия до 100 в минуту, пульс ритмичный, удовлетворительного наполнения, АД 120/80. Живот мягкий, слегка чувствительный в эпигастрии при глубокой пальпации. Язык красный (малиновый), сосочки атрофированы.

Печень, селезенка не увеличены. Симптом Пастернацкого (-).

Определяется мелкий тремор пальцев вытянутых рук, слегка выражено пучеглазие. Положительны симптомы Мебиуса, Дельримпля.

Анализ крови: Hb – 86 г/л, цветной показатель 1,6. Лейкоциты 4,1, n – 1, сегм. 62, лимф. – 32, моноц. – 5. Тельца Жолли и Кэбота. Выражен мегалоцитоз. Определяются полисегментоядерные нейтрофилы, СОЭ – 48 мм/г. Тромбоциты – 120 тыс.

Анализ мочи – уд. вес 1017, белок – abs, А – 3-4 в п/зрения.

Биохимический анализ крови: трансаминазы ACT – 36, АЛТ – 41, холестерин 2,6, билирубин – 21,5, непр. 18, мочевина 5,7, глюкоза 4,3, общий белок 84,7, сывороточное железо 18 (норма).

Альбумины – 41%, Глоб.: ₁ – 3,6, ₂ – 15,1, – 12,1, – 28,2%, Ревмофактор (-), LE-клетки не определяются. Определяются антитела к тиреоглобулину в высоком титре. Уровень Т₃ и Т₄ умеренно повышены. HB_S-антиген (-).

Стериальная пункция: в костном мозге смешанное нормо- и мегалобластическое кроветворение; красный росток раздражен. Картина B₁₂-дефицитной анемии.

Биопсия щитовидной железы: диффузная инфильтрация ткани железы лимфоцитами и плазматическими клетками, поля фиброза – картина аутоиммунного тиреоидита.

Гастродуоденоскопия – картина атрофического гастрита. Гастробиопсия: атрофия желез, снижено количество париетальных клеток, инфильтрация слизистой оболочки плазматическими клетками и нейтрофильными лейкоцитами.

Учитывая вышеизложенные данные, больной поставлен диагноз:

Аутоиммунный тиреоидит, хронический гастрит типа А (аутоиммунный), обострение, B₁₂-дефицитная анемия.

После введения ТБГ с иммуноглобулином на 2-й день у больного наступили признаки ремиссии. Состояние больной с улучшением. Температура нормализовалась. Тахикардии нет. Уровень гемоглобина повысился до 128 г/л. Размеры щитовидной железы уменьшились до 1-2 ст. Больная прибавила в весе 1,5 кг. Титр антител к тиреоглобулину снизился в 4 раза. Число лейкоцитов возросло до 6.8, тромбоцитов до 220 тыс.

Больная выписана на амбулаторное лечение.

Пример 17.

Исследовали действие средства, состоящего из ТБГ и Ig-M, на пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, выделенных по методу Boyum, 1969 г.

Диапазон используемых доз составлял 1 мкг/мл – 960 мкг/мл.

Результаты исследований отражены в таблице 11.

Как видно из таблицы 11, средство, состоящее из ТБГ и Ig-M, подавляет пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванную фитогемагглютинином, в 2 раза сильнее, чем чистый ТБГ.

Пример 18.

Исследовали влияние заявляемого средства, состоящего из ТБГ и Ig-M, на способность индуцировать супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови (см. методику ранее).

Результаты исследований влияния средства, состоящего из ТБГ и Ig-M, на способность индуцировать супрессорную активность МНС отражены в таблице 12.

Диапазон доз 1-960 мкг/мл.

Как видно из таблицы 12, средство, состоящее из ТБГ и Ig-M, индуцирует супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови, в 2 раза сильнее, чем чистый ТБГ.

Пример 19.

Исследовали влияние средства, состоящего из ТБГ и Ig-M, на способность индуцировать продукцию цитокинов-трансформирующего фактора роста бета 1 (ТФР – 1) и интерлейкина-10 (ИЛ-10) мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови (см. методику ранее).

В результате проведенных исследований было установлено, что средство, содержащее ТБГ и Ig-M, обладает способностью индуцировать продукцию одновременно 2-х цитокинов – ТФР-1 и ИЛ-10, мононуклеарными клетками периферической крови.

При этом уровень цитокинов ИЛ-10 и ТФР-1, вырабатываемых мононуклеарными клетками периферической крови под действием заявляемого средства, в 2-3 раза выше, чем под действием чистого ТБГ. Более того, введенное больному заявляемое средство приводит к снятию обострения аутоиммунных заболеваний, действие клинически определяется на первый же день лечения, в то время как при введении больному чистого ТБГ, действие выявляется только на 4-5 дни лечения.

Пример 20.

Исследовали действие средства, состоящего из ТБГ и Ig-M, в соотношении ТБГ и Ig-M (1:99), на пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, выделенных по методу Boyum, 1969 г.

Диапазон используемых доз составлял 1 мкг/мл – 960 мкг/мл.

Результаты исследований отражены в таблице 13.

Как видно из таблицы 13, средство, состоящее из ТБГ и Ig-M в соотношении 1:99, подавляет пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванную фитогемагглютинином, в такой степени, как и заявляемое средство, содержащее ТБГ и Ig-M в соотношении 1:19.

Пример 21.

Исследовали действие средства, состоящего из ТБГ и Ig-M, в соотношении ТБГ и Ig-M (1:1,5), на пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, выделенных по методу Boyum, 1969 г.

Диапазон используемых доз составлял 1 мкг/мл – 960 мкг/мл.

Результаты исследований отражены в таблице 14.

Как видно из таблицы 14, средство, состоящее из ТБГ и Ig-M в соотношении 1:1,5, подавляет пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванную фитогемагглютинином, в такой степени, как и заявляемое средство, содержащее ТБГ и Ig-M в соотношениях 1:19 и 1:99.

Пример 22.

Исследовали действие средства, состоящего из ТБГ и Ig-M, в соотношении ТБГ и Ig-M (1:9), на пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, выделенных по методу Boyum, 1969 г.

Диапазон используемых доз составлял 1 мкг/мл – 960 мкг/мл.

Результаты исследований отражены в таблице 15.

Как видно из таблицы 15, средство, состоящее из ТБГ и Ig-M в соотношении 1:9, подавляет пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванную фитогемагглютинином, в такой степени, как и заявляемое средство, содержащее ТБГ и Ig-M в соотношениях 1:19, 1:99 и 1:1,5.

Пример 23.

Исследовали действие средства, состоящего из ТБГ и Ig-M, в соотношении ТБГ и Ig-M (1:1), на пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, выделенных по методу Boyum, 1969 г.

Диапазон используемых доз составлял 1 мкг/мл – 960 мкг/мл.

Результаты исследований отражены в таблице 16.

Как видно из таблицы 16, средство, состоящее из ТБГ и Ig-M в соотношении 1:9, подавляет пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванную фитогемагглютинином, в такой степени, как и заявляемое средство, содержащее ТБГ и Ig-M в соотношениях 1:19, 1:99, 1:9 и 1:1,5.

Пример 24.

Результаты исследований влияния средства, состоящего из ТБГ и Ig-M в соотношении 1:99, на способность индуцировать супрессорную активность МНС отражены в таблице 17.

Диапазон доз 1-960 мкг/мл.

Как видно из таблицы 17, средство, состоящее из ТБГ и Ig-M в соотношении 1:99, индуцирует супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови в такой же степени, как и средство, содержащее ТБГ и Ig-M в соотношении 1:19, и индуцирует продукцию цитокинов-трансформирующего фактора роста бета 1 (ТФР-1) и интерлейкина-10 (ИЛ-10) мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови.

Пример 25.

Результаты исследований влияния средства, состоящего из ТБГ и Ig-M в соотношении 1:9, на способность индуцировать супрессорную активность МНС отражены в таблице 18.

Диапазон доз 1-960 мкг/мл.

Как видно из таблицы 18, средство, состоящее из ТБГ и Ig-M в соотношении 1:9, индуцирует супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови в такой же степени, как и средство, содержащее ТБГ и Ig-M в соотношениях 1:19, 1:99, и индуцирует продукцию цитокинов-трансформирующего фактора роста бета 1 (ТФР-1) и интерлейкина-10 (ИЛ-10) мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови.

Пример 26.

Результаты исследований влияния средства, состоящего из ТБГ и Ig-M в соотношении 1:1,5, на способность индуцировать супрессорную активность МНС отражены в таблице 19.

Диапазон доз 1-960 мкг/мл.

Как видно из таблицы 19, средство, состоящее из ТБГ и Ig-M в соотношении 1:1,5, индуцирует супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови в такой же степени, как и средство, содержащее ТБГ и Ig-M в соотношениях 1:19, 1:99 и 1:9, и индуцирует продукцию цитокинов-трансформирующего фактора роста бета 1 (ТФР-1) и интерлейкина-10 (ИЛ-10) мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови.

Пример 27.

Результаты исследований влияния средства, состоящего из ТБГ и Ig-M в соотношении 1:1, на способность индуцировать супрессорную активность МНС отражены в таблице 20.

Диапазон доз 1-960 мкг/мл.

Как видно из таблицы 20, средство, состоящее из ТБГ и Ig-M в соотношении 1:1, индуцирует супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови в такой же степени, как и средство, содержащее ТБГ и Ig-M в соотношениях 1:19, 1:99, 1:9 и 1:1,5, и индуцирует продукцию цитокинов-трансформирующего фактора роста бета 1 (ТФР-1) и интерлейкина-10 (ИЛ-10) мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови.

Пример 28.

Исследовали действие средства, состоящего из ТБГ и Ig-A, на пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, выделенных по методу Boyum, 1969 г.

Диапазон используемых доз составлял 1 мкг/мл – 960 мкг/мл.

Результаты исследований отражены в таблице 21.

Как видно из таблицы 21, средство, состоящее из ТБГ и Ig-A, подавляет пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванную фитогемагглютинином, в 2 раза сильнее, чем чистый ТБГ.

Пример 29.

Исследовали влияние заявляемого средства, состоящего из ТБГ и Ig-A, на способность индуцировать супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови (см. методику ранее).

Результаты исследований влияния средства, состоящего из ТБГ и Ig-A, на способность индуцировать супрессорную активность МНС отражены в таблице 22.

Диапазон доз 1-960 мкг/мл.

Как видно из таблицы 22, средство, состоящее из ТБГ и Ig-A, индуцирует супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови в 2 раза сильнее, чем чистый ТБГ.

Пример 30.

Исследовали влияние средства, состоящего из ТБГ и Ig-A, на способность индуцировать продукцию цитокинов-трансформирующего фактора роста бета 1 (ТФР – 1) и интерлейкина-10 (ИЛ-10) мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови.

В результате проведенных исследований было установлено, что средство, содержащее ТБГ и Ig-A, обладает способностью индуцировать продукцию одновременно 2-х цитокинов – ТФР-1 и ИЛ-10, мононуклеарными клетками периферической крови.

При этом уровень цитокинов ИЛ-10 и ТФР-1, вырабатываемых мононуклеарными клетками периферической крови под действием заявляемого средства, в 2-3 раза выше, чем под действием чистого ТБГ. Более того, введенное больному заявляемое средство приводит к снятию обострения аутоиммунных заболеваний, действие клинически определяется на первый же день лечения, в то время как при введении больному чистого ТБГ, действие выявляется только на 4-5 дни лечения.

Пример 31.

Исследовали действие средства, состоящего из ТБГ и Ig-A, в соотношении ТБГ и Ig-A (1:99), на пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, выделенных по методу Boyum, 1969 г.

Диапазон используемых доз составлял 1 мкг/мл – 960 мкг/мл.

Результаты исследований отражены в таблице 23.

Как видно из таблицы 23, средство, состоящее из ТБГ и Ig-A в соотношении 1:99, подавляет пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванную фитогемагглютинином, в такой степени, как и заявляемое средство, содержащее ТБГ и Ig-A в соотношении 1:19.

Пример 32.

Исследовали действие средства, состоящего из ТБГ и Ig-A, в соотношении ТБГ и Ig-A (1:1,5), на пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, выделенных по методу Boyum, 1969 г.

Диапазон используемых доз составлял 1 мкг/мл – 960 мкг/мл.

Результаты исследований отражены в таблице 24.

Как видно из таблицы 24, средство, состоящее из ТБГ и Ig-A в соотношении 1:1,5, подавляет пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванную фитогемагглютинином, в такой степени, как и заявляемое средство, содержащее ТБГ и Ig-A в соотношениях 1:19 и 1:99.

Пример 33.

Исследовали действие средства, состоящего из ТБГ и Ig-A, в соотношении ТБГ и Ig-A (1:9), на пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, выделенных по методу Boyum, 1969 г.

Диапазон используемых доз составлял 1 мкг/мл – 960 мкг/мл.

Результаты исследований отражены в таблице 25.

Как видно из таблицы 25, средство, состоящее из ТБГ и Ig-A в соотношении 1:9, подавляет пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванную фитогемагглютинином, в такой степени, как и заявляемое средство, содержащее ТБГ и Ig-A в соотношениях 1:19, 1:99 и 1:1,5.

Пример 34.

Исследовали действие средства, состоящего из ТБГ и Ig-A, в соотношении ТБГ и Ig-A (1:1), на пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, выделенных по методу Boyum, 1969 г.

Диапазон используемых доз составлял 1 мкг/мл – 960 мкг/мл.

Результаты исследований отражены в таблице 26.

Как видно из таблицы 25, средство, состоящее из ТБГ и Ig-A в соотношении 1:9, подавляет пролиферативную активность мононуклеарных клеток периферической крови, вызванную фитогемагглютинином, в такой степени, как и заявляемое средство, содержащее ТБГ и Ig-A в соотношениях 1:19, 1:99, 1:9 и 1:1,5.

Пример 35.

Результаты исследований влияния средства, состоящего из ТБГ и Ig-A в соотношении 1:99, на способность индуцировать супрессорную активность МНС отражены в таблице 27.

Диапазон доз 1-960 мкг/мл.

Как видно из таблицы 27, средство, состоящее из ТБГ и Ig-A в соотношении 1:99, индуцирует супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови в такой же степени, как и средство, содержащее ТБГ и Ig-A в соотношении 1:19, и индуцирует продукцию цитокинов-трансформирующего фактора роста бета 1 (ТФР-1) и интерлейкина-10 (ИЛ-10) мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови.

Пример 36.

Результаты исследований влияния средства, состоящего из ТБГ и Ig-A в соотношении 1:9, на способность индуцировать супрессорную активность МНС отражены в таблице 28.

Диапазон доз 1-960 мкг/мл.

Как видно из таблицы 28, средство, состоящее из ТБГ и Ig-A в соотношении 1:9, индуцирует супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови в такой же степени, как и средство, содержащее ТБГ и Ig-A в соотношениях 1:19, 1:99, и индуцирует продукцию цитокинов-трансформирующего фактора роста бета 1 (ТФР-1) и интерлейкина-10 (ИЛ-10) мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови.

Пример 37.

Результаты исследований влияния средства, состоящего из ТБГ и Ig-G в соотношении 1:1,5, на способность индуцировать супрессорную активность МНС отражены в таблице 29.

Диапазон доз 1-960 мкг/мл.

Как видно из таблицы 29, средство, состоящее из ТБГ и Ig-A в соотношении 1:1,5, индуцирует супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови в такой же степени, как и средство, содержащее ТБГ и Ig-A в соотношениях 1:19, 1:99 и 1:9, и индуцирует продукцию цитокинов-трансформирующего фактора роста бета 1 (ТФР-1) и интерлейкина-10 (ИЛ-10) мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови.

Пример 38.

Результаты исследований влияния средства, состоящего из ТБГ и Ig-A в соотношении 1:1, на способность индуцировать супрессорную активность МНС отражены в таблице 30.

Диапазон доз 1-960 мкг/мл.

Как видно из таблицы 30, средство, состоящее из ТБГ и Ig-A в соотношении 1:1, индуцирует супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови в такой же степени, как и средство, содержащее ТБГ и Ig-A в соотношениях 1:19, 1:99, 1:9 и 1:1,5, и индуцирует продукцию цитокинов-трансформирующего фактора роста бета 1 (ТФР-1) и интерлейкина-10 (ИЛ-10) мононуклеарными клетками (МНК) периферической крови.

Формула изобретения

1. Средство, обладающее свойством индуцировать супрессорную активность мононуклеарных клеток и секрецию ими цитокинов, содержащее трофобластический -1-гликопротеин (ТБГ), отличающееся тем, что оно дополнительно содержит иммуноглобулин (Ig).

2. Средство по п.1, отличающееся тем, что в качестве иммуноглобулина используют иммуноглобулин класса G (Ig-G) или класса А (Ig-А) или класса М (IG-M).

3. Средство по п.1, отличающееся тем, что ТБГ и Ig-G взяты в равных долях.

4. Средство по п.1, отличающееся тем, что ТБГ и Ig-G взяты в долях, соотношение которых составляет 1:19 соответственно.

5. Применение средства, обладающего свойством индуцировать супрессорную активность мононуклеарных клеток и секрецию ими цитокинов, содержащего ТБГ и иммуноглобулин (Ig), для лечения аутоиммунных заболеваний.

6. Применение средства по п.5, отличающееся тем, что в качестве иммуноглобулина используют иммуноглобулин класса G (Ig-G), или класса А (Ig-А), или класса М (IG-M).

7. Применение средства по п.6, отличающееся тем, что ТБГ и Ig-G взяты в равных долях.

8. Применение средства по п.6, отличающееся тем, что ТБГ и Ig-G взяты в долях, соотношение которых составляет 1:19 соответственно.

9. Применение средства по п.5, отличающееся тем, что его вводят парэнтерально.