Патент на изобретение №2303068

(54) СПОСОБ ВВЕДЕНИЯ РЕТРОВИРУСНЫХ ВЕКТОРОВ В КЛЕТКИ БЛАСТОДЕРМЫ ПРИ ПОЛУЧЕНИИ ТРАНСГЕННЫХ КУР

(57) Реферат:

Изобретение относится к генной инженерии, в частности к способам получения трансгенной птицы. Для получения трансгенных кур введение ретровирусных векторов в клетки бластодермы осуществляют через пробой в скорлупе неинкубированного яйца со стороны тупого конца. С помощью инсулинового шприца вводят генные конструкции на глубину 2-3 см вблизи зародышевого диска. Способ позволяет упростить процедуру введения генных конструкций в клетки-мишени при сохранении общей эффективности трансгенеза, что способствует снижению эмбриональной смертности.

Изобретение относится к генной инженерии, в частности к способам получения трансгенной птицы.

Задача изобретения заключалась в разработке усовершенствованного способа получения трансгенной птицы, позволяющего снизить эмбриональную смертность и упростить процедуру введения генных конструкций в клетки-мишени при сохранении общей эффективности трансгенеза.

Технический результат изобретения достигается тем, что предложен способ получения трансгенных кур, включающий введение ретровирусных векторов в желток яйца вблизи бластодиска, особенностью которого является то, что введение генных конструкций осуществляют до инкубации с помощью инсулинового шприца через пробой в скорлупе яйца со стороны тупого конца, что, с одной стороны, не требует наличия специальной манипуляционной техники, с другой стороны, – не оказывает сильного негативного влияния на развитие эмбриона ввиду введения генных конструкций через тупой конец яйца без необходимости вырезания окошка в скорлупе.

Пример. Контрольное использование усовершенствованного способа получения трансгенных кур было проведено на курах кросса ППЗ «Смена». В качестве источника генных конструкций применяли вирусный препарат, представляющий собой среду культивирования клеток-упаковщиц. Для получения инъекционного раствора в вирусный препарат добавляли полибрен в концентрации 8 мкг/мл. Введение генных конструкций осуществляли в асептических условиях под ламинаром. Яйца перед инъекцией кратковременно фламбировали, после чего в тупом конце яйца делали прокол диаметром 1-2 мм, через который с помощью инсулинового шприца вводили раствор генных конструкций в объеме 50-100 мкл. При этом иглу шприца опускали на 2-3 см. После проведения необходимых манипуляций сделанное окно заливали расплавленным парафином. Микроинъецированные яйца инкубировали в течение 21 дня в специальных инкубаторах с соблюдением стандартных режимов инкубации. Из 50 проинъецированных яиц был получен 1 трансгенный петух, несущий рекомбинантную ДНК в клетках крови, печени, сердца и кишечника. Общая эффективность трансгенеза составила 4%. При этом развитие эмбрионов отмечалось в 54% случаев.

Изобретение применимо в биотехнологии, в частности в биоинженерии животных.

Формула изобретения

Способ введения ретровирусных векторов в клетки бластодермы при получении трансгенных кур, отличающийся тем, что введение генных конструкций осуществляют через пробой в скорлупе неинкубированного яйца со стороны тупого конца с помощью инсулинового шприца на глубину 2-3 см вблизи зародышевого диска.