Патент на изобретение №2303059
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И СОХРАНЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГНИЛЬЦОВЫХ БОЛЕЗНЕЙ ПЧЕЛ
(57) Реферат:
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для культивирования и длительного сохранения в музейных условиях возбудителей гнильцовых болезней пчел. Питательная среда в 1 л гидролизата казеина с содержанием аминного азота 140-150 мг% содержит агар-агар или агар Дифко. Изобретение позволяет увеличить выход биомассы, повысить спорообразование питательной среды, способствует длительному сохранению возбудителей гнильцовых болезней пчел. 2 табл.
Предлагаемое изобретение относится к биотехнологии и может быть применено в пчеловодстве для культивирования и длительного сохранения в музейных условиях возбудителей гнильцовых болезней пчел. Европейский гнилец – болезнь открытого расплода. Возбудители: Paenibacillus alvei, Brevibacillus laterosporus (доброкачественный гнилец); Enterococcus faecalis (кислый гнилец) культивируются на мясопептонных средах (МПА, МПБ). Парагнилец – инфекционное заболевание личинок позднего возраста и куколок. Возбудитель – Bacillus paraalvei, культивируется на мясопептонных средах (МПА, МПБ). Американский гнилец (злокачественный гнилец) – инфекционное заболевание пчелиных семей, приводящее к ослаблению и гибели печатного расплода (взрослые личинки и предкуколки), вызываемое спорообразующим микроорганизмом Paenibacillus larvae subsp. larvae, для культивирования которого требуются специальные среды, т.к. для его роста и споруляции необходимы дополнительные питательные вещества. Переход вегетативных клеток в спорулирующие необходим для сохранения музейных культур возбудителя американского гнильца. Для культивирования возбудителя американского гнильца в настоящее время применяют среды: Бейли, Томашеца, молочно-желточную среду Уиллиса-Гоббза. СРЕДА БЕЙЛИ: имеет в составе: 10% дрожжевого экстракта, 1% глюкозы, 1% крахмала, 0,1360 г КН2PO4, 1% агар (рН 6,6) [1]. СРЕДА ТОМАШЕЦА: мясопептонная среда с добавлением 10% нормальной лошадиной сыворотки (рН 6,8-7,0) [2]. СРЕДА УИЛДИСА-ГОББЗА – молочно-желточная эмульсия, 2% мясопептонный агар (рН 7,0-7,2) [3]. Известна также среда, имеющая в составе: казеин 1-3,65%; кукурузный настой 1,0-5%; крахмал 0-9,2%; сахарозу 0,6-3,5%; неочищенную патоку 0-9,2%; дрожжи 0,5-0,8%; Na2PO4 0,42-0,60%; КН2PO4 0,17-0,24%. (рН 6,5-7,5). Ближайший аналог [4]. Недостаток среды – трудоемкий технологический процесс приготовления (рецептура состава: 8 компонентов). Среда не обеспечивает ранний рост, спорообразование и длительную сохранность возбудителя американского гнильца пчел. В задачу исследований входило создание универсальной питательной среды, которая давала бы быстрый рост, максимальное накопление биомассы, раннее и интенсивное спорообразование, способствовала длительному сохранению возбудителей гнильцовых болезней пчел в музейных условиях, в частности для труднокультивируемого возбудителя американского гнильца. Предложенная нами среда содержит гидролизат казеина, полученный путем разбавления дистиллированной водой до содержания аминного азота 140-150 мг%, кипячения при перемешивании 5 минут; добавления 5% NaOH и доведения рН 7,8-8,0; добавления агара “Дифко” – 15 г/л или агар-агара (одесского) – 20 г/л; смесь кипятят при перемешивании 5 минут; доводят рН 7,2-7,4 20% HCl; среду фильтруют и стерилизуют при 121°С 20 минут. После стерилизации рН 7,0-7,2. Среда применена для культивирования и сохранения возбудителей гнильцовых болезней пчел, преимущественно для трудно культивируемого возбудителя американского гнильца Paenibacillus larvae subsp. larvae, показав преимущественные результаты в сравнении с рекомендуемым средами: (Бейли, Томашеца, молочно-желточной средой Уиллиса-Гоббза). Результаты исследований приведены в таблице 1.
Установлено, что предложенная среда в отличие от рекомендованных способствует раннему проявлению первичного роста (18-24 ч); максимальному накоплению биомассы (48 ч – 2 млрд/см3); быстрому спорообразованию (72 ч – 800-1000 спор/см3); многократные пересевы не изменяли биологических свойств возбудителя американского гнильца пчел, а жизнеспособность музейных культур увеличивалась до 3 месяцев. Установлено, что возбудители европейского гнильца (Paenibacillus alvei, Brevibacillus laterospores, Enterococcus faecalis) и парагнильца (Bacillus paraalvei) при культивировании на предложенной среде при многократных пересевах (10 пассажей) не изменяли биологических свойств, наблюдалось усиленное накопление биомассы (2-2,2 млрд/см3, быстрое спорообразование (48 ч – 800-1000 спор/см3), ранний первичный рост (18-24 ч), увеличивался цикл пересевов возбудителей (3 мес) при хранении в музейных условиях. Результаты исследования приведены в таблице 2.
Апробация предложенной среды проведена на 100 музейных штаммах возбудителей гнильцовых болезней пчел с положительными результатами. Преимущество среды – универсальность, упрощение и удешевление технологического процесса изготовления (рецептура содержит 2 компонента). Среда дает возможность длительного сохранения возбудителей гнильцовых болезней пчел в музейных условиях. Предложенная среда найдет применение в бактериологических лабораториях, для культивирования и сохранения возбудителей гнильцовых болезней пчел, в диагностических исследованиях и в производстве биопрепаратов. Источники информации 1. Книга: «Опасные болезни и вредители пчел.», под редакцией О.Ф.Гробова и других, М.: Нива России, с.5. 2, 3. Там же, с.6. 4. GB №1003977 от 08.09.1965 – ближайший аналог.
Формула изобретения
Питательная среда для культивирования и сохранения возбудителя гнильцовой болезни пчел – американского гнильца – Paenibacillus larvae subsp. larvae, европейского гнильца Paenibacillus alvei, Brevibacillus laterosporus, Enterococcus faecalis, содержащая в 1 л гидролизата казеина с содержанием аминного азота 140-150 мг% 15-2,0 г агар-агара или агара Дифко, рН среды 7,2±0,2.
MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 11.10.2007
Извещение опубликовано: 27.06.2009 БИ: 18/2009
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||