Патент на изобретение №2302822

(54) СПОСОБ РАННЕЙ ПРИЖИЗНЕННОЙ ДИАГНОСТИКИ АЛЯРИОЗА (МЕЗОЦЕРКАРИОЗА) У СОБАК И КОШЕК

(57) Реферат:

Изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает отбор крови у животного в пробирку с 5%-ным раствором цитрата натрия и центрифугирование крови с дистиллированной водой, после чего исследуют осадок на наличие мезоцеркариев. Способ позволяет выявить аляриоз на ранней стадии инвазии.

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к паразитарной диагностике гельминтозов, а именно аляриозов (мезоцеркариозов) у собак и кошек.

Аляриоз – довольно широко распространенная инвазия как на территории нашей страны, так и в странах ближнего и дальнего зарубежья. Развитие трематоды Alaria alata происходит с участием трех хозяев: 1) дефинитивного – представителей семейства Canidae (собака, волк, лисица, енотовидная собака, песец); 2) промежуточного – пресноводных моллюсков семейства Planorbidae; 3) дополнительного – бесхвостых амфибий и их головастиков. Кроме того, в биологии развития алярий значительную роль играют резервуарные хозяева, круг которых очень широк: это – бесхвостые амфибии, рептилии, птицы, грызуны, хищные и парнокопытные. Резервуарным хозяином может быть и человек (2, 7). Дефинитивные хозяева могут заражаться как при поедании дополнительных хозяев, так и резервуарных. Кроме того, дефинитивные хозяева могут являться и резервуарными хозяевами одновременно, так как у них могут находить как марит (взрослых трематод в тонком кишечнике), так и мезоцеркариев (личинок трематод в различных органах и тканях). Патогенная роль алярий для дефинитивных хозяев складывается из поражения кишечника половозрелой формой паразита и поражения различных органов и тканей, вызванных мигрирующими по организму мезоцеркариями. Аляриоз (мезоцеркариоз) резервуарных хозяев вызывается паразитированием мезоцеркариев А. alata, локализующихся в различных тканях и органах: стенке кишечника, мускулатуре конечностей, жировой ткани, сердечной мышце, тканях паренхиматозных органов (4, 5, 6). По нашим данным, смертность при этом заболевании у собак составляет 6,7%, у кошек – 25%.

Известен способ диагностики аляриоза по выявлению яиц трематоды в фекалиях у дефинитивного хозяина (собака, лисица, волк) методом последовательных смывов или методом флотации (1).

Метод последовательных смывов. Для исследования отбирают 3-5 г фекалий. Их смешивают в фарфоровой ступке при помощи пестика с 10-кратным количеством воды и фильтруют через металлическое сито (ячейки диаметром не более 0,19 мм). Пробу отстаивают в течение 10 минут. После отстаивания верхний слой жидкости сливают до появления сплошной грязной полосы, а к осадку добавляют свежую порцию воды и снова отстаивают 8-10 минут. Процедуру повторяют до тех пор, пока верхний слой жидкости не станет светлым. Жидкость сливают, а осадок (около 5 мл) исследуют порциями под микроскопом при малом увеличении (10×10). Способ требует длительного времени, и при низкой интенсивности инвазии возможна потеря яиц с водой. Эффективность выявления яиц 60-70%.

Метод флотации. Метод основан на принципе разницы удельной массы яиц трематоды и используемых солевых растворов. Поскольку известно, что удельная масса яиц A. alata равна 1,28 (3), для флотации используют насыщенные растворы солей выше 1,28 – нитрата натрия. Насыщенный раствор нитрата натрия готовят путем кипячения соли до тех пор, пока она не перестанет растворяться (1000 г соли на 1 литр воды). Раствор процеживают через марлю и используют после охлаждения до комнатной температуры. Затем берут 5-8 г фекалий, помещают в фарфоровую ступку и заливают небольшим количеством насыщенного раствора соли. После тщательного растирания фекалий в смесь добавляют 20-30 мл раствора соли и процеживают через металлическое сито в сухой и чистый стаканчик. Взвесь отстаивают 25-30 минут, затем с поверхности жидкости при помощи металлической петли с диаметром кольца 8-10 мм снимают пленку, переносят ее на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом при малом увеличении (10×10). Эффективность выявления яиц этим способом 70-80%.

Недостатком этих методов является то, что с их помощью диагностируется кишечная половозрелая стадия паразита через 32-45 дней после заражения только у дефинитивных хозяев, и не диагностируется мезоцеркарный (личиночный) аляриоз у резервуарных хозяев, который наносит значительно больший вред хозяину, так как поражает все органы и ткани. Кроме того, половозрелая трематода может рассеивать яйца во внешней среде и представлять угрозу для дальнейшего заражения животных и продолжения цикла развития паразита.

Целью изобретения является ранняя (на 3-21 дни после заражения) прижизненная диагностика аляриоза (мезоцеркариоза) у собак и кошек (и других животных) методом концентрации проб крови с дистиллированной водой и исследованием их на наличие мезоцеркариев.

Описание способа. Пробы крови объемом 2-3 мл брали из вены животного в пробирку с антикоагулянтом. В качестве антикоагулянта использовали 5%-ный раствор цитрата натрия в соотношении 1:20. Кровь исследовали методом центрифугирования с дистиллированной водой в день взятия пробы или на следующий день. Перед исследованием кровь тщательно перемешивали. В центрифужную пробирку объемом 10 мл переносили 1 мл цитратной крови и 6-7 мл дистиллированной воды. Отстаивали 5 минут (для гемолиза эритроцитов) и центрифугировали в течение 5-7 минут при скорости 2000 об/мин. Верхний слой жидкости сливали, оставляя осадок в объеме 0,5 мл. Переносили осадок на предметное стекло (порциями), накрывали покровным стеклом и просматривали под малым увеличением микроскопа (10×10). Мы обнаруживали в осадке мезоцеркариев трематод с интенсивностью от 1 до 7 (чаще всего 1) личинок в 1 мл крови. По морфологическим и анатомическим признакам личинки трематоды идентифицированы нами как мезоцеркарии A. alata.

Эффективность предлагаемого способа иллюстрируется следующими примерами:

Пример 1. Диагностическую эффективность способа оценивали на 60 пробах крови собак, спонтанно зараженных А. alata, и 250 пробах клинически здоровых собак. Мезоцеркарии выявили у всех 60 собак, зараженных А. alata с интенсивностью инвазии от 1 до 3 личинок в 1 мл крови, у здоровых собак личинки мезоцеркариев не обнаружили.

Пример 2. Диагностическую эффективность способа оценивали на 16 пробах крови кошек, спонтанно зараженных А. alata, и 70 пробах клинически здоровых кошек. Мезоцеркарии выявили у всех 16 кошек, зараженных А. alata с интенсивностью инвазии от 1 до 7 личинок в 1 мл крови, у здоровых кошек личинки мезоцеркариев не обнаружили.

Таким образом, эффективность выявления мезоцеркариев как у собак, так и у кошек составила 100%. Метод выявляет возбудителя на ранней стадии инвазии, что позволяет вовремя предотвратить падеж животных или переход заболевания в хроническую форму, лечение которой неэффективно. Кроме того, выявление инвазии на ранней преимагинальной стадии дает возможность купировать процесс и не допустить рассеивание инвазии во внешней среде.

Источники информации

2. Паразитарные зоонозы: Доклад Комитета экспертов ВОЗ с участием ФАО. Сер. Техн. Докл. 637. – М.: Медицина, 1980.

4. Савинов В.А. Развитие Alaria alata (Goeze, 1782) в организме дефинитивного хозяина. Дисс… канд. биол. наук. – Калинин, 1952. – 145 с.

6. Судариков В.Е. Трематоды животных и человека. – М.: АН СССР, 1960. – Т.18. – С.453-533.

Формула изобретения

Способ ранней прижизненной диагностики аляриоза (мезоцеркариоза) у собак и кошек, заключающийся в том, что производят отбор крови у животного в пробирку с антикоагулянтом, в качестве которого используют 5%-ный раствор цитрата натрия, затем центрифугируют с дистиллированной водой, после чего исследуют осадок на наличие мезоцеркариев.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 20.07.2007

Извещение опубликовано: 10.03.2009 БИ: 07/2009