Патент на изобретение №2302637

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЯЖЕСТИ ТЕЧЕНИЯ ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ ПНЕВМОНИИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для ускоренной диагностики степени тяжести внебольничной пневмонии (ВП). Сущность изобретения включает определение показателей реактивной способности иммунокомпетентных клеток с определением системного уровня цитокинов (ИЛ-2, 8, ФНО-). Преимущество изобретения заключается в ускорении способа. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для ускоренной диагностики тяжести течения внебольничной пневмонии (ВП).

Пневмония (П) по-прежнему остается одним из наиболее широко распространенных инфекционных заболеваний человека с серьезным прогнозом [1]. В настоящее время П рассматривается как состояние с определенными системными манифестациями, что переводит локальное воспалительное поражение легочной ткани в разряд инфекционной болезни. По статистическим данным, около 26% больных пневмонией, госпитализированных в отделение реанимации, умирают от осложнений в виде септического шока и острого респираторного дистресс-синдрома [3]. Основными причинами осложненного течения, по мнению ряда авторов, являются поздняя госпитализация больных, недооценка степени тяжести и риска развития осложнений у конкретного пациента, что влечет за собой несвоевременное начало проведения и неадекватность интенсивной терапии, вентиляционной поддержки – все это способствует не только более длительному пребыванию больных в стационаре, но и значительно увеличивает стоимость лечения больных [1, 3]. В связи с чем адекватная оценка состояния пациента, своевременное прогнозирование развития осложнений заболевания приобретает в этой ситуации первостепенное значение. В России ежегодно П заболевают 1,5 миллиона человек, причем показатель заболеваемости составляет 348,1 на 100000 жителей, т.е. в абсолютных числах чуть более 500000 жителей. Правильный диагноз ставится только трети больным, примерно у 1 миллиона человек заболевание не распознается и адекватное лечение не проводится [5]. Подобная практика приводит к резкому увеличению числа больных с затяжным течением болезни и значительному числу легочных осложнений. Общая летальность при П составляет около 20-30 случаев на 100000 человек в год и занимает первое место среди причин летальности от инфекционных болезней и 6-е место среди всех причин летальности [3]. При П тяжелого течения, сопровождающихся высокой летальностью, чрезвычайно важна ранняя антибактериальная терапия в течение первых часов после установления диагноза.

Таким образом, распространенность, значительный экономический ущерб, обусловленный временной утратой трудоспособности, обуславливают актуальность проблемы и необходимость разработки своевременной диагностики этого заболевания с целью адекватного лечения в зависимости от степени тяжести.

В настоящее время рекомендовано для постановки диагноза руководствоваться клиническими критериями с обязательным проведением диагностического комплекса, включающего: рентгенографию органов грудной клетки и лабораторные исследования. Лабораторное обследование включает клинический минимум и микробиологическое исследование мокроты. Однако данный диагностический комплекс имеет ряд недостатков: во-первых, только через 24-48 часов имеется предварительный результат идентификации возбудителя, во-вторых, при рентгенологическом обследовании не всегда имеются четкие инфильтративные изменения, может отмечаться только усиление легочного рисунка, что связано со стадией морфологического изменения в легких или особенностями этологического фактора, например, атипичные возбудители пневмонии (хламидии, микоплазма и др.). Эти причины затрудняют диагностику заболевания и тем более степени тяжести П. Лабораторно-инструментальные исследования, включающие клинический минимум, анализ мокроты, рентгенографию органов грудной полости, занимают длительное время обследования, полученные результаты зависят от сопутствующих заболеваний у обследуемого и грамотности медперсонала. Время обследования занимает в среднем не менее 3 дней и отодвигает своевременное назначение необходимого адекватного медикаментозного лечения в зависимости от степени тяжести П.

Задача изобретения – разработка достоверного ускоренного метода диагностики тяжести течения внебольничной пневмонии.

Поставленная задача достигается определением реактивной способности иммунокомпетентных клеток (ИКК) вырабатывать туморнекротизирующий фактор (TNF-), интерлейкин-2 (IL-2) и интерлейкин-8 (IL-8). Мы отдали предпочтение цитокинам, синтезируемым макрофагом или антигенпрезентирующей клеткой, как центральному звену иммунной защиты, которое активирует факторы неспецифической резистентности и способствует развитию специфического иммунитета. Уровень IL-2, синтезируемого CD4 клетками, определяет процесс дифференцировки и пролиферации Т-клеток, что является важным звеном, определяющим поздний адаптивный ответ на инфекционный антиген.

В качестве аналога использован способ диагностики органов дыхания, заключающийся в определении в крови оксипролина и глюкозамингликанов при типичном и затяжном течениях внебольничной пневмонии и инфильтративном туберкулезе. Проводится оценка только биохимических показателей сыворотки крови у пациентов с уже известным диагнозом ВП, 2003122545 А, 10.01.2005. В прототипе авторы не оценивали показатели иммунной системы у больных пневмонией. В отличие от прототипа в нашем изобретении оцениваются не особенности течения уже имеющегося заболевания, а наличие или отсутствие болезни, а именно пневмонии, и тяжесть ее течения.

Под наблюдением находилось 48 больных внебольничной пневмонией (ВП), которые проходили обследование в клинике ИМКВЛ. Пациентов с легким, средним и тяжелым течением заболевания было поровну. Аллергических заболеваний у данной группы наблюдения выявлено не было. Группу контроля составили 15 практически здоровых человек с нормальной функцией внешнего дыхания, подтвержденной клиническими и функциональными методами обследования, не имеющих в анамнезе хронической бронхолегочной патологии аллергических заболеваний, не болевших острыми заболеваниями в течение 6 месяцев.

Реактивную способности иммунокомпетентных клеток оценивали по уровню цитокинов TNF и IL-2, 8 в крови с помощью специфических реактивов фирмы “Genzyme diagnostics” методом иммуноферментного анализа согласно прилагаемой к наборам инструкции в модификации Е.Г.Исаченко и др. [2]. Результаты оценивали с помощью иммуноферментного анализатора EL-800 при длине волны 450 нм.

В результате анализа лабораторных показателей у обследованных с ВП выявлен характерный для каждой степени тяжести системный синтез TNF- и IL-2, 8 по сравнению с контрольной группой (табл.1). У пациентов с легким течением заболевания уровень IL-2 составил 12,6±0,6 пг/мл, TNF- – 8,08±0,7 пг/мл, IL-8 – 68,43±1,6 пг/мл. Отмечена разница секреции IL-8 у больных с разным течением ВП, при тяжелой ВП его уровень в 3 раз превышает секрецию при легком течении заболевания, что свидетельствует о минимальном воспалительном процессе в легких с незначительным привлечением в орган-мишень цитокина – хемоатрактанта. У пациентов со средней тяжестью воспалительного процесса обращает на себя внимание снижение синтеза TNF- и IL-2 и значительное увеличение IL-8 по сравнению с аналогичными уровнями у пациентов с легкой ВП. Имеется достоверное количественное различие показателей по сравнению с контрольной группой, где системный синтез изученных цитокинов значительно ниже (р<0,001).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют, что легкое течение заболевания наблюдается при системном уровне IL-2 в интервалах от 12 до 13,2 пг/мл, IL-8 от 63,83 до 73,03 пг/мл и TNF от 7,37 до 8,77 пг/мл, течение средней степени тяжести ВП при уровне IL-2 – от 6, 07 до 7,23 пг/мл, IL-8 от 110,71 до 117,31 пг/мл, TNF от 6,96 до 8,76 пг/мл и тяжелая ВП диагностируется при уровне – IL-2 от 15,78 до 17,98 пг/мл, IL-8 от 146,4 до 170,2 пг/мл, TNF от 11,73 до 12,73 пг/мл. Данные интервалы величин явились критериями тяжести течения ВП.

Диагностика ВП и выявление тяжести течения заболевания с использованием предлагаемого метода осуществляется в течение 5 часов. Это в 14 раз ускорило диагностику и определение тяжести течения заболевания, что способствовало быстрому своевременному назначению необходимых лекарственных препаратов.

Уровень цитокинов в сыворотке крови пациентов с ВП и здоровых
Контингент обследованных	TNF	IL-8	IL-2
ВП легкая, n=16	8,08±0,7***	68,43±1,6***	12,6±0,6***
ВП средней тяжести, n=16	7,87±0,9**	114,01±3,3***	6,65±0,6**
ВП тяжелая, n=16	12,24±0,5***	158,3±11,9***	16,88±1,1***
Контрольная группа, n=15	0,5±0,03	1,7±0,3	3,32±0,9
Примечание. Звездочками показана достоверность показателей здоровых к показателям групп наблюдения (*** – р<0,001; ** – р<0,01; * – р<0,05).

Полученные результаты были дополнительно проверены общепринятыми критериями постановки диагноза ВП. Диагноз подтверждали на основании функциональных и лабораторных методов обследования индивидуально для каждого больного. Сопоставление результатов полностью подтвердило достоверность предложенного метода диагностики внебольничной пневмонии, а также степень тяжести заболевания. Способ осуществляется следующим образом: содержание цитокинов в сыворотке крови исследовали методом твердофазного иммуноферментного анализа (с использованием реактивов фирмы «R&D diagnostic Inc.» США).

Пример 1. Больной Ж, 20 лет, поступил в госпиталь на 3-и сутки от начала заболевания с жалобами на: слабость, вялость, повышение температуры до 37,9°С, кашель малопродуктивный частый, усиливающийся при вдыхании холодного воздуха и физической нагрузке. Пациенту проведено обследование по предлагаемой методике. Получены следующие результаты: уровень в крови IL-2 12,8 пг/мл, IL-8 65,2 пг/мл, TNF 7,9 пг/мл. Согласно результатам обследования, которое заняло 5 часов, пациенту был выставлен диагноз: Внебольничная пневмония, нетяжелое течение.

Назначены антибактериальные препараты цефалоспоринового ряда и симптоматическое лечение. Через 10 дней приема препаратов состояние пациента значительно улучшилось, купированы симптомы интоксикации, гиперреактивность верхних дыхательных путей, кашель не беспокоил.

Таким образом, способ оценки реактивной способности иммунокомпетентных клеток с целью диагностики внебольничной пневмонии и определения тяжести течения заболевания является актуальным, достоверным, информативным, ускоренным диагностическим методом, показанным всем больным ВП. Помогает диагностировать заболевание, оценить тяжесть течения ВП, что необходимо для более дифференцированного, своевременного и качественного лечения.

Источники информации

Формула изобретения

Способ определения тяжести внебольничной пневмонии, включающий лабораторные исследования крови, отличающийся тем, что проводят определение реактивной способности иммунокомпетентных клеток с выявлением системного уровня цитокинов TNF и IL-2,8, при уровне IL-2 от 12 до 13,2 пг/мл, IL-8 от 63,83 до 73,03 пг/мл и TNF от 7,37 до 8,77 пг/мл диагностируют легкое течение, при уровне IL-2 от 6,07 до 7,23 пг/мл, IL-8 от 110,71 до 117,31 пг/мл и сохранении содержания TNFa на уровне от 7,37 до 8,77 пг/мл – течение средней степени тяжести и при уровни IL-2 – от 15,78 до 17,98 пг/мл, IL-8 от 146,4 до 170,2 пг/мл, TNF от 11,73 до 12,73 пг/мл диагностируют тяжелую внебольничную пневмонию.