Патент на изобретение №2301830

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММОБИЛИЗОВАННОЙ ЛИПАЗЫ

(57) Реферат:

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для очистки животноводческих отходов и сточных вод. Способ предусматривает иммобилизацию липазы в смеси полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия, взятых в массовых соотношениях 1:0,3-1,0. Иммобилизацию липазы проводят при массовом соотношении липаза: смесь полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия 1:50-200 и при рН 9,0-11,0, температуре 18-24°С в течение 10-20 минут. Способ позволяет получить целевой продукт с повышенной ферментативной активностью.

Предлагаемое изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для очистки животноводческих отходов и сточных вод.

Способ получения липазы путем иммобилизации ее в полиэлектролите (патент США №5667634, опубл. 16.09.1997, МКИ D21C 9/08).

Однако получения липазы путем иммобилизации ее в комплекс разнозаряженных полиэлектролитов неизвестно.

Техническим эффектом предлагаемого изобретения является повышение активности целевого продукта в комплексе из двух полимеров.

Технический эффект достигается в предлагаемом способе получения липазы путем иммобилизации ее в полиэлектролите тем, что в качестве полиэлектролита используют смесь полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия, взятых в массовых соотношениях равных 1:0,3-1,0, причем иммобилизацию липазы проводят при массовом соотношении липаза:смесь полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия 1:50-200 и при рН 9-11, температуре 18-24°С в течение 10-20 минут.

В научно-технической литературе неизвестно техническое решение, аналогично заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию изобретения “новизна”.

Полученная согласно предлагаемому способу иммобилизованная липаза может быть использована для очистки животноводческих отходов и сточных вод, т.е. “промышленно применима”.

Впервые предложена смесь полиэлектролитов полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия при определенном авторами массовом соотношении для повышения активности липазы. Авторами впервые показано, что взаимодействие полиэлектролитов полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия и липазы приводит к изменению конформации липазы и, по-видимому, открытию активных центров фермента, т.е. предложение соответствует критерию “изобретательский уровень”.

Предлагаемое изобретение иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1. Получают смесь полиэлектролитов при массовом соотношении полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия равном 1:0,6 путем смешивания 100 мг полидиаллилдиметиламмоний хлорида и 60 мг полистиролсульфоната натрия. Далее к 50 мг полученной смеси добавляют 1 мг липазы, полученной из бактерий Pseudomonas fluorescens /фирмы Сигма/ (соотношение липаза:полиэлектролит 1:50). Иммобилизацию проводят в течение 10 минут при рН 11 при температуре 18°С.

Полученную иммобилизованную липазу проверяли на ферментативную активность по отношению к субстрату триацетину. В результате активность иммобилизованной липазы составила 100% по отношению к контролю.

Пример 2. Получают смесь полиэлектролитов при массовом соотношении полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия равном 1:0,6 путем смешивания 100,0 мг полидиаллилдиметиламмоний хлорида и 60,0 мг полистиролсульфоната натрия. Далее к 100 мг полученной смеси добавляют 1 мг липазы, полученной из бактерий Pseudomonas fluorescens /фирмы Сигма/ (соотношение липаза:полиэлектролит 1:100). Иммобилизацию проводят в течение 20 минут при рН 11,0 при температуре 24°С.

Полученную иммобилизованную липазу проверяли на ферментативную активность по отношению к субстрату триацетину. В результате активность иммобилизованной липазы составила 104% по отношению к контролю.

Пример 3. Получают смесь полиэлектролитов при массовом соотношении полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия равном 1:0,6 путем смешивания 200,0 мг полидиаллилдиметиламмоний хлорида и 120,0 мг полистиролсульфоната натрия. Далее к 200 мг полученной смеси добавляют 1 мг липазы, полученной из бактерий Pseudomonas fluorescens /фирмы Сигма/ (соотношение липаза:полиэлектролит 1:200). Иммобилизацию проводят в течение 15 минут при рН 11,0 при температуре 21°С.

Полученную иммобилизованную липазу проверяли на ферментативную активность по отношению к субстрату триацетину. В результате активность иммобилизованной липазы составила 119% по отношению к контролю.

Пример 4. Получают смесь полиэлектролитов при массовом соотношении полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия равном 1:0,3 путем смешивания 100 мг полидиаллилдиметиламмоний хлорида и 30 мг полистиролсульфоната натрия. Далее к 100 мг полученной смеси добавляют 1 мг липазы, полученной из поджелудочной железы свиньи /фирмы Сигма/ (соотношение липаза:полиэлектролит 1:100). Иммобилизацию проводят в течение 10 минут при рН 9,0 при температуре 18°С.

Полученную иммобилизованную липазу проверяли на ферментативную активность по отношению к субстрату триацетину. В результате активность иммобилизованной липазы составила 180% по отношению к контролю.

Пример 5. Получают смесь полиэлектролитов при массовом соотношении полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия равном 1:0,6 путем смешивания 100,0 мг полидиаллилдиметиламмоний хлорида и 60,0 мг полистиролсульфоната натрия. Далее к 100 мг полученной смеси добавляют 1 мг липазы, полученной из Mucor javanicus /фирмы Сигма/ (соотношение липаза:полиэлектролит 1:100). Иммобилизацию проводят в течение 20 минут при рН 9,0 при температуре 24°С.

Полученную иммобилизованную липазу проверяли на ферментативную активность по отношению к субстрату триацетину. В результате активность иммобилизованной липазы составила 180% по отношению к контролю.

Пример 6. Получают смесь полиэлектролитов при массовом соотношении полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия равном 1:1 путем смешивания 100 мг полидиаллилдиметиламмоний хлорида и 100 мг полистиролсульфоната натрия. Далее к 100 мг полученной смеси добавляют 1 мг липазы, полученной из Mucor javanicus /фирмы Сигма/ (соотношение липаза:полиэлектролит 1:100). Иммобилизацию проводят в течение 15 минут при рН 9,0 при температуре 21°С.

Полученную иммобилизованную липазу проверяли на ферментативную активность по отношению к субстрату триацетину. В результате активность иммобилизованной липазы составила 177% по отношению к контролю.

Таким образом, заявленный способ получения липазы позволяет сохранить (100%) или увеличить в 1,04-1,8 раз ферментативную активность целевого продукта по отношению к исходной липазе.

Формула изобретения

Способ получения иммобилизованной липазы путем иммобилизации ее в полиэлектролите, отличающийся тем, что в качестве полиэлектролита используют смесь полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия, взятых в массовых соотношениях 1:0,3-1,0, причем иммобилизацию липазы проводят при массовом соотношении липаза: смесь полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия 1:50-200 и при рН 9,0-11,0, температуре 18-24°С в течение 10-20 мин.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 11.04.2008

Извещение опубликовано: 20.10.2009 БИ: 29/2009