Патент на изобретение №2301666

(54) ОБЛАДАЮЩИЙ ПИТАТЕЛЬНЫМИ СВОЙСТВАМИ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ СОСТАВ НА ОСНОВЕ ПОЛИФЕНОЛОВ И ЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПРИ ЛЕЧЕНИИ РАКА

(57) Реферат:

Настоящее изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается фармацевтического состава и его применения при лечении рака. Более конкретно настоящее изобретение относится к содержащим полифенол фармацевтическим композициям, причем содержание полифенолов в них эффективно при лечении рака. Композиции по настоящему изобретению используются как средство профилактики и лечения рака, включающие аскорбиновую кислоту, лизин, пролин и, по меньшей мере, одно полифенольное соединение, выбранное из группы, состоящей из галлата эпигаллокатехина, галлата эпикатехина, эпигаллокатехина, эпикатехина и катехина. Технический результат – заявленные фармацевтические композиции на основе полифенола способны эффективно блокировать пролиферацию раковых клеток и метастазирование. 4 н. и 15 з.п. ф-лы, 14 ил., 10 табл.a с 10% фетальной сыворотки быка (FBS) в 24-гнездных планшетах. Среда использовалась как таковая (основная), так и с определенными дополнениями. Плашки инкубировали в инкубаторе с подачей воздуха (без дополнения CO₂) в течение четырех дней. Клетки рака прямой кишки НСТ 116 выращивали на среде McCoya 5A и поддерживали в инкубаторе с подачей воздуха, содержащего 5% СО₂. В конце инкубационного периода среду отбрасывали, а клетки в ячейках промывали PBS с последующей инкубацией в течение 3 часов с МТТ красителем. В каждую ячейку добавляли диметилсульфоксид (DMSO, 1 мл). Плашки с DMSO оставляли при комнатной температуре 15 минут (при осторожном перемешивании) и затем измеряли OD раствора в каждой ячейке при 550 нм. Было сделано заключение о том, что OD₅₅₀ раствора DMSO в каждой ячейке прямо пропорционально количеству клеток. За 100 была принята OD₅₅₀ обработанной пробы, не содержащей добавок (основная среда).

Изучение инвазии в Matrigele

Опыты проводили, используя Matrigel (Becton Dickinson), помещенный в виде вставок в соответствующий 24-гнездный планшет. Производили засев и выращивание фибробластов в ячейках планшета, используя DMEM. Когда фибропласты достигли слияния, среду отбросили и заменили ее 750 л среды, предназначенной для обработки. Раковые клетки (5×10⁴), суспендированные в 250 л среды, обогащенной питательными элементами, определенными планом проводимого опыта, были посеяны в гнезда планшета с гелевыми вставками. Таким образом, обе среды на вставке и в ячейке содержали одни и те же добавки. Планшеты со вставками затем инкубировали (в инкубаторе) с подачей воздуха для MDA-MB-231 клеток и в инкубаторе с 5% СО₂ для клеток рака прямой кишки и меланомных клеток) в течение 18-20 часов. После инкубации среду из ячеек выбрасывали. С верхней поверхности вставок клетки осторожно соскребали ватным тампоном. Клетки, которые, преодолев барьер, проникли внутрь Matrigel и добрались до нижней поверхности Matrigel, окрасили гемаколоровым красителем (ЕМ Science), они были визуально подсчитаны с помощью микроскопа. Результаты были подвергнуты ANOVA и все возможные пары были протестированы на значимость при р<0,05.

Эта среда в различных опытах дополнялась аскорбиновой кислотой, пролином, лизином и EGCG в указанных концентрациях.

Зимография желатиназы

Зимографию желатиназы проводили в 10% Novex предварительно отлитом (отформованном) полиакриламидном геле (Invitrogen) в присутствии 0,1% желатины. Загружали культуральную среду (20 л) и проводили SDS-PAGE с трис-глициновым SDS буфером. После электрофореза гели отмывали 5% тритоном Х-100 в течение 30 мин и окрашивали. Параллельно определяли содержание белка и определяли примерную молекулярную массу.

Пример 1.

MDA-MB 231 (АТСС) клетки рака молочной железы засевали на Matrigel вставку в усовершенствованной Matrigel инвазионной камере (BD). Кондиционированную среду нормальных фибробластов кожи человека (Clonetics) с добавлением различных агентов (как показано на Фиг.1) добавляли в ячейку. Камеру инкубировали в течение 24 часов, и клетки, которые прошли через Matrigel мембрану и мигрировали к нижней поверхности мембраны, были подсчитаны. Эти данные показали ингибирующий эффект галлата эпигаллокатехина и комбинации аскорбиновой кислоты, пролина и лизина на инвазию в Matrigel и миграцию MDA-MB 231 клеток рака молочной железы человека.

Пример 2.

НТСТ 116 (АТСС) клетки рака прямой кишки человека засевали на Matrigel вставку в усовершенствованной Matrigel инвазионной камере (BD). Кондиционированную среду нормальных фибробластов кожи человека (Clonetics) с добавлением различных агентов (как показано на Фиг.1) добавляли в ячейку. Камеру инкубировали в течение 24 часов, и клетки, которые прошли через Matrigel мембрану и мигрировали к нижней поверхности мембраны, были подсчитаны. Эти данные показали ингибирующий эффект галлата эпигаллокатехина и комбинации аскорбиновой кислоты, пролина и лизина на инвазию в Matrigel и миграцию НСТ 116 клеток рака прямой кишки человека.

Пример 3.

А 2058 (АТСС) клетки меланомы человека засевали на Matrigel вставку в усовершенствованной Matrigel инвазионной камере (BD). Кондиционированную среду нормальных фибробластов кожи человека (Clonetics) с добавлением различных агентов (как показано на Фиг.1) добавляли в ячейку. Камеру инкубировали в течение 24 часов, и клетки, которые прошли через Matrigel мембрану и мигрировали к нижней поверхности мембраны, были подсчитаны. Эти данные показали ингибирующий эффект галлата эпигаллокатехина и комбинации аскорбиновой кислоты, пролина и лизина на инвазию в Matrigel и миграцию А 2058 клеток меланомы человека.

Пример 4.

В этом эксперименте А 2058 (АТСС) клетки меланомы человека сеяли на Matrigel вставку в усовершенствованной Matrigel инвазионной камере (BD) в присутствии:

А: кондиционированной среды от Normal Human Dermal Fibroblast (Clonetics) и

В: той же среды с добавлением различных компонентов питания, как показано в пояснении к Фиг.4.

После 24 часов инкубации клетки, которые прошли через Matrigel мембрану и переместились к нижней поверхности мембраны, проверили под микроскопом и подсчитали.

Эти данные показывают апоптотический эффект галлата эпигаллокатехина и комбинации аскорбиновая кислота + пролин + лизин на А 2058.

А: Клетки меланомы человека в тканевой культуральной среде.

В: Клетки меланомы человека в тканевой культуральной среде, содержащей аскорбиновую кислоту (100 M), пролин (140 М), лизин (400 М) и EGCG (20 (г/мл). Замечание: клетки были разрушены.

Пример 5.

Исследование пролиферации раковых клеток

Клетки меланомы А 2058.

На фиг.5 показана способность 10, 20 и 50 г/мл EGCG с добавлением и без добавления лизина, пролина и аскорбиновой кислоты влиять на пролиферацию меланомных клеток. Ни лизин, пролин и аскорбиновая кислота, ни EGCG при концентрации 10 и 20 г/мл не оказывали значительного эффекта на пролиферацию клеток. Но при 50 г/мл EGCG существенно уменьшал число клеток вплоть до 30%. Аналогичный эффект наблюдался с лизином, пролином и аскорбиновой кислотой.

Клетки рака молочной железы MDA-MB-231

В этих экспериментах основная среда дополнялась 0, 10, 20, 50, 100 или 200 г/мл EGCG (Фиг.6). Результаты показывают, что дополнение основной среды 50, 100 или 200 г/мл EGCG значительно уменьшало число клеток до 66,1±5,3, 33,6±2 и 29,6±0,8% в сравнении с контролем без дополнений соответственно. Концентрации EGCG в клеточной среде до 20 г/мл не оказывали какого-либо существенного ингибирующего эффекта на пролиферацию клеток.

Изучались также воздействия аскорбиновой кислоты, лизина, пролина и различных концентраций RGCG на пролиферацию клеток рака. На фиг.7 показано незначительно уменьшение числа клеток до 86,1±1,93% за счет аскорбиновой кислоты, лизина и пролина. Добавление к этой комбинации 20, 50 и 100 г EGCG существенно уменьшало число клеток до 74±5,8, 64,8±1,6 и 22±5% по сравнению с контрольной группой соответственно.

Клетки рака прямой кишки НСТ 116

Несмотря на то, что об ингибирующем эффекте аскорбиновой кислоты, пролина и лизина на пролиферацию клеток рака прямой кишки не объявлялось, комбинация аскорбиновой кислоты, пролина и лизина с 20 г/мл EGCG существенно снижала число клеток до 69±0,5% (Фиг.8).

Более высокий уровень EGCG в этой комбинации (50 г/мл) радикально снижал число клеток до 4,6±0,3%.

Антипролиферативная активность комбинаций питательных компонентов, используемых в этих опытах, была разной в зависимости от типа раковых клеток. Для клеток рака молочной железы комбинация аскорбиновой кислоты, пролина и лизина с TGCG показывала более высокие антипролиферативные эффекты, чем когда эти компоненты применялись по отдельности. Ожидалось, что для клеток меланомы и рака прямой кишки сочетание аскорбиновой кислоты, пролина, лизина не будет оказывать воздействия на пролиферацию этих клеток. Однако сочетание этих питательных компонентов с 20 г/мл EGCG привело к значительному снижению количества клеток рака прямой кишки и не повлияло на клетки меланомы. По-видимому, клетки рака прямой кишки более чувствительны, чем клетки рака молочной железы и клетки меланомы в наименьшей степени к сочетанию аскорбиновой кислоты, пролина, лизина и EGCG. Пролиферация клеток рака прямой кишки была почти полностью снижена (4,6%) при использовании аскорбиновой кислоты, пролина и лизина вместе с 50 г/мл EGCG.

Пример 6.

Зимографические исследования желатиназы

Влияние EGCG на клетки меланомы на основной среде с дополнениями аскорбиновой кислотой, пролином и лизином в отношении экспрессирования MMPs показано на фиг.9 с помощью зимографии желатиназы. Меланомным клеткам характерны две полосы, соответствующие ММР-2 и ММР-9. Сочетание аскорбиновой кислоты, лизина и пролина не влияет на экспрессию MMPs полос по сравнению с основной средой. Однако EGCG ингибирует экспрессию обеих ММР-2 и ММР-9 в зависимости от дозы. Интенсивность полос для основной среды и сочетания аскорбиновой кислоты, лизина и пролина была одинаковой.

Пример 7.

Исследования инвазии и миграции в экстрацеллюлярном матриксе

Исследовали ингибирующее действие сочетания аскорбиновой кислоты, пролина и лизина, используемых по отдельности и вместе с различными концентрациями EGCG. Изучалось влияние этих комбинаций на экстрацеллюлярный матрикс с использованием отформованных Matrigel матриц, используемых по известной методике для оценки инвазивного потенциала различных линий клеток рака.

Клетки рака молочной железы MDA-MB-231

На фиг.10 показаны результаты инвазии клеток рака молочной железы в Matrigel, инкубированных в присутствии аскорбиновой кислоты, пролина и лизина. Инвазия раковых клеток, проинкубированных в комбинации аскорбиновой кислоты, пролина и лизина уменьшилась до 48,1±22,1% по сравнению с клетками, проинкубированными в среде без добавок. В среде с добавлением только 20 г/мл EGCG количество инвазирующих клеток снизилось до 69,5±27,4%. Полное ингибирование инвазии в матриксе у клеток рака молочной железы было достигнуто в присутствии более высоких концентрациях (50 (г/мл и 100 г/мл).

В другой серии опытов дополнение среды 10 М аскорбиновой кислоты снижало инвазию на 36%. Дополнение аскорбиновой кислотой и 140 М пролина дополнительно снижало инвазию на 47%. Использование 400 М лизина помимо аскорбиновой кислоты и пролина в качестве дополнения еще снижало инвазию на 67%; лизин показывает линейный ответ в увеличении эффектов аскорбиновой кислоты и пролина вплоть до уровня 800 М.

На фиг.10 показано, что комбинация аскорбиновой кислоты, пролина и лизина так же, как и 20 г/мл EGCG эффективна в отношении полного прекращения инвазии раковых клеток сквозь экстрацелюлярный матрикс. Это сочетание делает возможным достижение максимума ингибиторного эффекта на инвазию раковых клеток без необходимости использовать высокие концентрации отдельных питательных компонентов. Аскорбиновая кислота, пролин и лизин вместе с EGCG сделали возможным полностью остановить матричную инвазию клеток рака молочной железы при более низком уровне EGCG (20 г/мл).

Клетки рака прямой кишки НСТ 116

На фиг.11 показано, что сочетание аскорбиновой кислоты, пролина и лизина существенно снизило инвазию клеток рака прямой кишки до 67,2±3,7%. EGCG используемый сам по себе при 20 г/мл, уменьшал инвазию до 44,9±3,3%, тогда как сочетание аскорбиновой кислоты, лизина и пролина и 20 г/мл EGCG имело синергетический эффект, уменьшая инвазию клеток рака до 24,9±4,6%.

Клетки меланомы А 2058

На фиг.12 показано, что комбинация аскорбиновой кислоты, пролина и лизина была эффективной в уменьшении количества распространяющихся клеток до 88,2±4%, однако, это снижение статистически не существенно. Сочетание этих питательных компонентов при самое малое 20 г/мл EGCG было эффективным в плане снижения распространяющегося количества клеток до нуля.

Эти результаты показывают, что использование аскорбиновой кислоты, пролина и лизина с EGCG позволяют достигнуть резкого снижения числа клеток, распространяющихся и мигрирующих через Matrigel мембрану при более низких уровнях EGCG. Инвазия снижалась до нуля при использовании такого же низкого уровня в 20 л/мл EGCG вместе с аскорбиновой кислотой, пролином и лизином для клеток рака молочной железы и меланомы. Преимущества результатов этого сочетания не так эффектны для клеток рака прямой кишки, как для клеток рака молочной железы. Уровень содержания EGCG должен был быть 50 г/мл, чтобы получить 90% уменьшение инвазии этих клеток. В этом исследовании не наблюдалось изменения в экспрессии MMPs у клеток меланомы, хотя EGCG оказывает ингибирующее воздействие на их экспрессию, в зависимости от дозы.

Эти серии опытов отчетливо демонстрируют, что заявляемый обладающий питательными свойствами фармацевтический состав, содержащий аскорбиновую кислоту, пролин, лизин и, по меньшей мере, одно полифенольное соединение, проявляет антипролиферативное и антиинвазивное свойства в отношении раковых клеток.

Пример 8.

Для приготовления питательных фармацевтических композиций приводятся следующие рецептуры компонентов (Таблицы 1-5) и EPICAN FORTE (Таблица 6). Установлено, что эти рецептуры, содержащие аскорбиновую кислоту, пролин, лизин и, по меньшей мере, одно полифенольное соединение, эффективны для блокирования инвазии раковых клеток и метастазирования раковых клеток.

Таблица 6
Состав для EPICAN FORTE
Доза приема: 6 капсул (Предлагаемое использование: 2 капсулы 3 раза в день вместе с едой)
6 капсул содержат:	Количество на прием	% от дневного количества
L-лизин	1000 мг
L-пролин	750 мг
L-аргинин	500 мг
Витамин С (в виде аскорбиновой кислоты, аскорбата кальция, аскорбата магния и аскорбил-палмитата	782 мг	1180%
Кальций (из аскорбата кальция)	22 мг	2%
Магний (из аскорбата магния)	50 мг	12%
Обычный экстракт зеленого чая (листья) (80% полифенолов – 800 мг) без кофеина	1000 мг
N-ацетил-цистеин	200 мг
Селен (из селен-метионина)	30 мг	43%
Медь (из глицината меди)	2 мг	100%
Марганец (из цитрата марганца)	1 мг	50%
мг = миллиграммы
мкг = микрограммы
EPICAN FORTE – торговая марка, указанная в US заявке

Другие ингредиенты: Капсулы на основе растительного сырья (гидроксипропил-метилцеллюлоза), диоксид кремния, целлюлоза и стеарат магния.

Пример 9.

Влияние EPICAN FORTE на раковые клетки человека.

Изучалось влияние EPICAN FORTE на клетки рака человека. Были исследованы метастатические параметры, такие как экспрессия матричных металлопротеиназ (MMPs) с помощью желатиназной зимографии, инвазионный потенциал через Matrigel и пролиферация/рост с помощью МТТ-исследования. Подробные протоколы этих исследований приведены ниже. Использовали различные линии клеток рака: рак кожи – клетки меланомы 2058, рак печени – клетки HepG2, фибросаркома – клетки НТ 1080, рак прямой кишки – НСТ 116, рак молочной железы – ER+/-MCF-7 и рак молочной железы ER-/-MDA-MB-231.

В нижеследующих таблицах (Таблицы 7 и 8) показаны все результаты.

Влияние EPICAN FORTE на пролиферацию/рост клеточных линий рака человека

Таблица 7
Лечебные дозы EPICAN FORTE (г/мл): Процент контроля
Раковые клетки	0	10	50	100	500	1000
Меланома	100%	98	–	105	–	50
HepG2	100%	92	–	138	–	85
НТ-1080	100%	100	–	97	80	63
прямой кишки
(НСТ116)	100%	119	125	141	120	106
MCF-7	100%	93	88	92	97	77
MDA-MB-231	100%	103	–	82	–	25

Влияние EPICAN FORTE на инвазию и миграцию в Matrigel клеток рака человека

Таблица 8
Дозы обработки EPICAN FORTE (г/мл): Процент ингибирования
Клетки рака	0	10	50	100	500	1000
Меланома	0%	80	98	100	–	–
HepG2	0%	15	25	50	95	100
НТ-1080	0%	90	–	50	70	100
Прямая кишка
(НСТ 116)	0%	20	50	80	100	–
MDA-MB-231	0%	50	–	98	–	–
MCF-7				Нет инвазии

Влияние EPICAN FORTE^TM на экспрессию матричных металлопротеиназ (MMPs) клеточными линиями рака человека:

Клетки меланомы: клетки меланомы дают 2 полосы на желатиназной зимограмме, соответствующие ММР-2 и ММР-9. EPICAN FORTE ингибировал экспрессию ММР-2 и ММР-9 в зависимости от дозы. Экспрессия ММР-2 и -9 существенно ингибировалась при концентрации 100 г/мл EPICAN FORTE и не могла быть детектирована при концентрации 1000 г/мл.

Клетки HepG2: Как и клетки меланомы, клетки HepG2 также показывали 2 полосы, соответствующие ММР-2 и ММР-9. EPICAN FORTE^TM ингибировал экспрессию ММР-2 и ММР-9 при концентрации 500 и 1000 г/мл

Фибросаркома НТ-1080: Клетки НТ-1080 показывали 2 полосы: ММР-2 и ММР-9. EPICAN FORTE^TM также ингибировал экспрессию обеих полос в зависимости от дозы. Очень слабые полосы наблюдались при концентрациях 500 и 1000 г/мл.

Рак прямой кишки НСТ 116: Клетки рака прямой кишки показали только одну полосу на зимограмме, соответствующую ММР-2, которая вообще исчезла при концентрации 100 г/мл,

MCF-7 и MDA-MB-231: Эти клеточные линии рака не давали никаких полос MMPs при исследуемых нами концентрациях, которые были бы аналогичны (полосам) других клеточных линий рака.

Инвазия MDA-MB-231 через Matrigel ингибировалась на 50, 60 и 95% при концентрации EPICAN FORTE^TM 10, 50 и 100 г/мл соответственно. EPICAN FORTE^TM не был токсичен для MDA-MB-231 при 10 л/мл, показывал слабую токсичность при 100 м. Однако он демонстрировал высокую токсичность при 1000 г/мл. Ни ММР-2, ни ММР-9 не проявлялись на зимограмме. Для MCF-7 EPICAN FORTE^TM, напротив, оказался нетоксичным даже при 500 г/мл и показывая слабую токсичность при 1000 г/мл. MCF-7 были неинвазивными и не экспрессировали MMPs активности.

EPICAN FORTE^TM ингибирует экспрессию ММР-2 и ММР-9 в зависимости от дозы. Экспрессия ММР-2 и ММР-9 значительно ингибируется при концентрации 100 г/мл EPICAN FORTE^TM и зримо не детектируется при 100 г/мл. EPICAN FORTE, используемый при концентрациях 10 и 100 г/мл, не существенно влияет на жизнеспособность клеток, а при 100 г/мл обладает цитотоксичностью в интервале 10-40%, в зависимости от типа клеток. Инвазия меланомных клеток MDA-MB-231 и сокультуры меланомных клеток с NHDF через Matrigel была существенно ниже (в зависимости от концентрации). Инвазия НТ-1080 клеток через Matrigel ингибировалась на 10%, 50%, 70% и 100% при 10, 100, 200 и 1000 г/мл соответственно. Интересно, что EPICAN FORTE^TM не токсичен по отношению к НТ-1080 клеткам при концентрации 100 г/мл. Эти результаты показывают, что EPICAN FORTE очень эффективен для различных линий клеток рака, а также сокультур. Эти наблюдения позволяют установить, что EPICAN FORTE^TM может обеспечить терапевтическое средство природного происхождения, которое может рассматриваться как ценное и многообещающее лекарство для лечения рака человека.

Пример 10.

Влияние EPICAN FORTE^TM на линии клеток рака человека

Изучали воздействие EPICAN FORTE на нормальные клетки человека. Применяли условия и параметры, подобные тем, при которых исследовались линии клеток рака, а именно: зимография для MMPs экспрессии, инвазия через Matrigel и пролиферация/рост с помощью МТТ-анализа. Использовались несколько нормальных дермальных фибробластов человека (NHDF), включая человеческие хондроциты и человеческие стволовые клетки.

В нижеследующих таблицах (Таблицы 9, 10 и 11) показано влияние EPICAN FORTE^TM на пролиферацию/рост, распространение метастазов и продуцирование ММР в нормальных клетках человека:

Таблица 9
Влияние EPICAN FORTETM на пролиферацию/рост нормальных клеток человека. Дозы обработки EPICAN FORTETM (г/мл): Процент контроля
Нормальные клетки	0	10		50			100		500	100
NHDF	100%	118		–			135		–	90
Хондроциты	100%	113		–			148		76	82
Стволовые клетки	100%	100		116			115		98	64
Таблица 10
Влияние EPICAN FORTE на инвазию в Matrigel нормальных клеток человека. Дозы обработки EPICAH FORTETM (г/мл): Процент ингибирования
Нормальные клетки	0		10		50	100		200		1000
NHDF	0%		67%		89%	100%		–		–
Хондроциты	0%		45%		85%	95%		100%		–
Стволовые клетки	0%		0%		–	95%		100%

Влияние EPICAH FORTE^TM на экспрессию матричных металлпротеиназ (MMPs) нормальными клетками человека проанализировано и в совокупности является следующим.

NHDF:NHDF показывали только одну полосу на зимограмме, соответствующую ММР-2, которая исчезала при концентрации EPICAH FORTE 1000 г/мл.

Хондроциты: Хондроциты также показывали только одну полосу, соответствующую ММР-2. EPICAH FORTE^TM ингибировал экспрессию ММР-2 в зависимости от дозы. Экспрессия ММР-2 существенно ингибировалась при концентрации EPICAH FORTE^TM 100 г/мл и вообще исчезала при концентрации EPICAH FORTE^TM 200 г/мл.

Стволовые клетки: Стволовые клетки также показывали только одну полосу, соответствующую ММР-2. EPICAH FORTE ингибировал экспрессию ММР-2 в зависимости от дозы. Очень слабая полоса была видна при концентрациях 500 и 100 г/мл, которая не была видна при концентрациях 200 и 500 г/мл.

Подводя итоги, можно сказать, что EPICAH FORTE^TM ингибирует экспрессию ММР-2 в зависимости от дозы. Экспрессия ММР-2 существенно ингибируется при концентрации EPICAH FORTE^TM 100 г/мл и практически не определяется при концентрации его 200 г/мл. Кроме того, установлено также, что инвазия хондроцитов через Matrigel ингибируется на 50%, 85% и 95% при 10 г/мл, 100 г/мл и 200 г/мл. При 500 г/мл инвазия вообще прекращается (снижается до 0%).

EPICAH FORTE не токсичен для хондроцитов даже при концентрации 200 г/мл. Фактически EPICAH FORTE оказывал влияние на пролиферацию клеток, 70% повышение клеточной пролиферации при 200 г/мл, более чем 70% превышение по сравнению с контролем. Слабый токсический эффект проявлялся только при концентрации 500 г/мл. Эти результаты показывают, что EPICAH FORTE эффективен в плане ингибирования экспрессии ММР-2 и что EPICAH FORTE^TM представляет собой новый противовоспалительный состав, содержащий питательные компоненты, отражающий естественную попытку ингибировать ММР и деградацию экстрацеллюлярного матрикса при остеоартрите и других родственных заболеваниях, включая прогрессирующую деградацию хрящей.

Несмотря на то, что только начали работать in vivo опытные линии Epican-Forte, поступили сообщения о двух случаях, подтверждающих действенность Epican-Forte как медикамента для лечения рака.

Женщина – пациент с диагнозом рак мозга безуспешно подвергалась химиотерапии и радиотерапии, в конце апреля 2002 года это лечение было прекращено. Как один из шансов она использовала возможность лечиться Epican-Forte в рекомендованных дозах. В конце августа 2002 года MRTS показал, что опухоль исчезла.

Пациенту – мужчине 64 лет, имеющему заметно повышенный уровень опухолевого маркера PSA в мае 2002 г. (59,9 г/мл), был поставлен диагноз карцинома простаты с метастазами вдоль лимфатических сосудов аорты. Он начал лечение Epican-Forte в рекомендованных дозах. Тремя месяцами позже PSA уровень упал до 0,9 г/л. СТ проверка в конце октября 2002 г. показала, что ранее видимые лимфатические метастазы (узлы) были не больше кажущихся, и его простата была нормальных размеров.

Были описаны некоторые варианты данного изобретения. Тем не менее понятно, что могут быть сделаны различные модификации без искажения идеи и объема изобретения.

Формула изобретения

1. Фармацевтическая композиция, блокирующая пролиферацию раковых клеток и метастазирование, используемая при лечении рака, содержащая:

– аскорбиновую кислоту или ее фармацевтически приемлемое производное, выбранное из группы, состоящей из соли аскорбиновой кислоты, сложного эфира аскорбиновой кислоты и/или их смеси;

– фармацевтически приемлемое производное лизина;

– фармацевтически приемлемое производное пролина;

– фармацевтически приемлемое производное аргинина;

– N-ацетил-цистеин;

– по крайней мере, один микроэлемент, выбранный из группы, состоящей из селена, меди, магния, кальция и марганца; и

– по крайней мере, одно производное полифенола, выбранное из группы, состоящей из галлата эпигаллокатехина, галлата эпикатехина, эпигаллокатехина, эпикатехина и катехина.

2. Композиция по п.1, в которой фармацевтически приемлемой солью аскорбиновой кислоты является аскорбат кальция или аскорбат магния.

3. Композиция по п.1, в которой сложным эфиром аскорбиновой кислоты является аскорбилпальмитат.

4. Композиция по п.1, в которой фармацевтически приемлемое производное лизина выбрано из группы, состоящей из гидрохлорида лизина и соли лизина.

5. Композиция по п.1, в которой фармацевтически приемлемое производное пролина выбрано из группы, состоящей из гидрохлорида пролина и соли пролина.

6. Фармацевтическая композиция, используемая при лечении рака, содержащая аскорбиновую кислоту, аскорбат кальция, аскорбат магния, аскорбилпальмитат, полифенолы, N-ацетилцистеин, лизин, пролин, аргинин, селен, медь и марганец.

7. Композиция по п.6, которая содержит 250 мг аскорбиновой кислоты, 250 мг аскорбата кальция, 250 мг аскорбата магния, 250 мг аскорбилпальмитата, 1000 мг полифенолов, 200 мг N-ацетилцистеина, 1000 мг лизина, 750 мг пролина, 500 мг аргинина, 30 мкг селена, 2 мг меди и 1 мг марганца.

8. Композиция по п.6, которая содержит 25 мг аскорбиновой кислоты, 25 мг аскорбата кальция, 25 мг аскорбата магния, 25 мг аскорбилпальмитата, 200 мг полифенолов, 10 мг N-ацетилцистеина, 50 мг лизина, 25 мг пролина, 50 мг аргинина, 1 мкг селена, 20 мкг меди и 50 мкг марганца.

9. Композиция по п.6, которая содержит 5000 мг аскорбиновой кислоты, 5000 мг аскорбата кальция, 5000 мг аскорбата магния, 5000 мг аскорбилпальмитата, 5000 мг полифенолов, 1500 мг N-ацетилцистеина, 5000 мг лизина, 3000 мг пролина, 3000 мг аргинина, 200 мкг селена, 9 мг меди и 10 мг марганца.

10. Композиция по п.6, которая содержит 250 мг аскорбиновой кислоты, 250 мг аскорбата кальция, 250 мг аскорбата магния, 250 мг аскорбилпальмитата, 1000 мг полифенолов, 200 мг N-ацетилцистеина, 1000 мг лизина, 750 мг пролина, 500 мг аргинина, 100 мкг селена, 2 мг меди, 1 мг марганца, 500 мг кальция и 400 мг магния.

11. Композиция по п.6, которая содержит 250 мг аскорбиновой кислоты, 250 мг аскорбата кальция, 250 мг аскорбата магния, 250 мг аскорбилпальмитата, 1000 мг полифенолов, 200 мг N-ацетилцистеина, 1000 мг лизина, 750 мг пролина, 500 мг аргинина, 100 мкг селена, 2 мг меди, 1 мг марганца, 500 мг кальция, 400 мг магния и 200 мг цитрусовых биофлавонойдов.

12. Фармацевтическая композиция, используемая при лечении рака, содержащая L-лизин, L-пролин, L-аргинин, аскорбиновую кислоту, фармацевтически приемлемое производное аскорбиновой кислоты, кальций, магний, полифенолы, N-ацетилцистеин, селен, медь и марганец.

13. Композиция по п.12, которая содержит 1000 мг L-лизина, 750 мг L-пролина, 500 мг L-аргинина, 710 мг аскорбиновой кислоты или фармацевтически приемлемого производного аскорбиновой кислоты, 22 мг кальция, 50 мг магния, 1000 мг полифенолов, 200 мг N-ацетилцистеина, 30 мкг селена, 2 мг меди и 1 мг марганца.

14. Композиция по п.13, в которой фармацевтически приемлемое производное аскорбиновой кислоты выбрано из группы, состоящей из аскорбата кальция, аскорбата магния и аскорбилпальмитата.

15. Композиция по п.13, в которой полифенол выбран из группы, состоящей из галлата эпигаллокатехина, галлата эпикатехина, эпигаллокатехина, эпикатехина, катехина и других фармацевтических приемлемых солей полифенолов и/или их смесей.

16. Способ лечения рака у индивидуума, включающий стадию введения индивидууму фармацевтической композиции по любому из пп.1-15.

17. Способ по п.16, где рак выбран из группы, состоящей из меланомного рака, рака молочной железы, рака прямой кишки, рака легкого, рака головного мозга.

18. Способ лечения воспалительного заболевания у индивидуума, включающий стадию введения индивидууму фармацевтической композиции по любому из пп.1-15.

19. Способ по п.18, где воспалительным заболеванием является остеоартрит.

РИСУНКИ