Патент на изобретение №2158131

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕСТИКУЛЯРНОЙ ГИАЛУРОНИДАЗЫ

(57) Реферат:

Изобретение относится к производству лекарственных средств, применяемых в медицинской практике, и касается получения препаратов из животного сырья. Жмых семенников убойных животных подвергают замораживанию при температуре минус 5-20°С и оттаиванию с последующей осветляющей фильтрацией и выделением целевого продукта. Гиалуронидаза может быть получена также путем добавления к жмыху новой порции экстрагента в масс/объемном соотношении 3:1, измельчения полученного субстрата в роторно-пульсационном аппарате с последующим замораживанием при температуре минус 5-20°С и оттаиванием. Изобретение позволяет повысить выход целевого продукта. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к производству лекарственных средств, применяемых в медицинской практике, и касается получения препаратов из животного сырья.

Известно множество способов получения тестикулярной гиалуронидазы из семенников убойного скота, предусматривающих экстракцию измельченного сырья, отделение жмыха центрифугированием и последующее выделение целевого продукта из экстракта [1-3] . Однако большинство известных способов не обеспечивают достаточно полного извлечения фермента их экстрагируемого сырья, и часть целевого продукта утилизируется вместе со жмыхом.

Для повышение выхода фермента с единицы сырья предложен способ повторно-последовательной экстракции [4], заключающийся в том, что жмых, получаемый после отделения экстракта, обрабатывают водным раствором уксусной кислоты и экстракцию каждой последующей партии жмыха осуществляют экстрактом, полученным от предыдущего извлечения с добавлением экстрагента и т.д. до насыщения извлечения ферментом, что является длительным и весьма трудоемким процессом, а кроме того, в условиях крупномасштабного производства приводит к бактериальному контаминированию извлечения, обуславливающему пирогенность получаемых из него медицинских препаратов.

За прототип принят способ получения ферментного препарата “Ронидаза” (одно из коммерческих названий гиалуронидазы) путем однократной повторной экстракции жмыха семенников, заключающийся в том, что жмых смешивают со свежей порцией экстрагентов в соотношении 1:3, экстрагируют при определенных условиях, сепарируют, а надосадочную ферментсодержащую жидкость используют для выделения целевого продукта [5]. Этот способ прост, но малоэффективен ввиду невысокого дополнительного выхода фермента.

Задачей изобретения является более полное использование сырья в производстве тестикулярной гиалуронидазы.

Поставленная задача достигается тем, что в способе получения тестикулярной гиалуронидазы из отходов производства – жмыха семенников убойных животных, жмых подвергают замораживанию при температуре минус 5-20^oC и оттаиванию с последующей осветляющей фильтрацией и выделением целевого продукта.

Гиалуронидаза может быть получена также путем добавления к жмыху новой порции экстрагента в масс/объемном соотношении 3:1, измельчения полученного субстрата в роторно-пульсационном аппарате с последующим замораживанием при температуре минус 5-20^oC и оттаиванием.

Отличительным признаком предлагаемого способа от прототипа является замена повторной экстракции жмыха его замораживанием с последующим оттаиванием. Этот прием, известный как криоструктурирование, приводит к сшиванию полидисперсных частиц соединительной ткани и высокомолекулярных белков в термостабильный криогель, позволяющий при последующем размораживании наиболее полно и эффективно выделить из осадка жидкую фазу.

Преимущество предлагаемого способа по сравнению с прототипом заключается в повышении выхода гиалуронидазы с единицы сырья.

Примеры осуществления способа.

Пример 1. 100 кг жмыха семенников (осадка), полученного после центрифугирования, помещают в бачки из нержавеющей стали или полиэтилена и подвергают замораживанию при температуре минус 5^oC с последующим оттаиванием. Для ускорения процесса размораживания бачки можно установит в ванну с горячей водой. После полного оттаивания содержимое бачков фильтруют через миткаль. Получают 50-55 л раствора с гиалуронидазной активностью не менее 64 у.е./мл, который подвергают дальнейшей очистке одним из известных методов.

Выход целевого продукта составляет 32000-35200 у.е. с 1 кг жмыха (см. табл.).

Пример 2. К 100 кг жмыха семенников добавляют 30-35 л свежего экстрагента, смесь тщательно перемешивают мешалкой, пропускают через роторно-пульсационный аппарат, замораживают при температуре минус 20^oC и размораживают в емкостном вакуумном фильтре типа ЕВО-04К03 на решетке, покрытой миткалью, при температуре в верхней рубашке фильтра – (75 5)^oC, в нижней – (62)^oC. По мере оттаивания жидкость фильтруется через миткаль и собирается в нижней емкости фильтра. Получают 80-85 л раствора с активностью не менее 50 у.е. /мл, который подвергают дальнейшей концентрации и очистке.

Выход целевого продукта составляет 40000-42500 у.е. с 1 кг жмыха.

Данные, представленные в таблице, свидетельствуют о том, что заявляемый способ позволяет в 1,5-2 раза, по сравнению с прототипом, повысить дополнительный выход гиалуронидазы с единицы жмыха.

Использованные источники информации:
1. Гуров В. А. Производство органопрепаратов /М. – “Пищевая промышленность”, – 1976. – С. 81.

2. Пак В.И., Офицеров В.И. Способ получения гиалуронидазы /Патент РФ N 2027759. – С. 12 N 9/26. – 1995.

3. Вахитов Р. З. и соавт. Способ получения гиалуронидазы /Патент РФ N 2068267. – A 61 K 35/48. – 1996.

4. Стекольников Л.И. и соавт. Способ получения гиалуронидазы / Авторское свидетельство СССР N 955932. – A 61 K 37/48. – 1982.

5. Шилов Г.Г. и соавт. Способ получения ферментных препаратов /Авторское свидетельство СССР N 1090407 A 61 K 37/48/ – 1984. – Прототип.

Формула изобретения

1. Способ получения тестикулярной гиалуронидазы из отходов производства – жмыха семенников убойных животных, включающий обработку жмыха с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что жмых подвергают замораживанию при температуре минус 5 – 20^oC с последующим оттаиванием и осветляющей фильтрацией.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что перед замораживанием к жмыху добавляют экстрагент в масс/объемном соотношении 3:1, перемешивают и пропускают через роторно-пульсационный аппарат.

РИСУНКИ

PD4A – Изменение наименования обладателя патента Российской Федерации на изобретение

(73) Новое наименование патентообладателя:

Федеральное государственное унитарное предприятие “Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам “Микроген”

Извещение опубликовано: 10.10.2004 БИ: 28/2004

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 27.10.2003

Извещение опубликовано: 27.11.2004 БИ: 33/2004

NF4A Восстановление действия патента Российской Федерации на изобретение

Извещение опубликовано: 20.04.2005 БИ: 11/2005