Патент на изобретение №2301012

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ ИНТЕРЛЕЙКИНОМ-1

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, в частности к инфекционным и воспалительным заболеваниям Способ прост в исполнении и позволяет сделать прогноз эффективности лечения препаратом IL-1 на основании индивидуальной восприимчивости больного к лечению этим препаратом для исключения побочного эффекта предстоящей терапии. Анализируют совокупность данных генотипирования по признакам аллельного полиморфизма гена цитокина и показателей температуры тела пациента в ответ на первое введение препарата, причем при наличии у пациента гомозиготного по высокопродуцирующему аллелю гена цитокина и изменении температуры в сторону повышения прогнозируют низкую эффективность лечения, а при наличии у пациента гомозиготного по низкопродуцирующему аллелю гена цитокина и отсутствии повышения температуры прогнозируют высокую эффективность лечения. 4 ил.

(56) (продолжение):

CLASS=”b560m”of apoptosis and release of interleukin-1 beta by cell wall-associated 19-kDa lipoprotein during the course of mycobacterial infection. J.Infect.Dis. 2004, Sept.15; 190(6): 1167-76. Publ. 2004, Aug. 11.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам лечения инфекционных и воспалительных заболеваний рекомбинантными цитокинами, и может быть использовано при иммунотерапии, иммунокоррекции, иммунореабилитации или иммунопрофилактики различных заболеваний, в частности заболеваний ЛОР-органов, хронического гепатита С и туберкулеза легких.

Различные виды иммунопатологии, синдромы, протекающие в виде рецидивов инфекционно-воспалительных процессов, иммунодефицитные болезни, аллергические и аутоаллергические заболевания возникают как следствие транзиторных и стойких нарушений иммунного ответа. Естественны попытки, воздействуя на эти иммуномодуляции, купировать патологический процесс.

Для специфического лечения используют препараты антигенов или антител, специфичные по отношению к возбудителю или антигену. Неспецифические методы включают воздействия на систему иммунитета химических веществ, физических факторов и антигенов, неспецифичных по отношению к возникшему патологическому процессу. Заместительная неспецифическая иммунотерапия характеризуется тем, что готовые неспецифические факторы иммунитета и клетки вводят больному, у которого имеется их недостаточность.

Для этой цели помимо иммуноглобулинов широко используют рекомбинантные цитокины, в частности цитокины, регулирующие воспаления – интерлейкин-1 (далее IL-1), фактор некроза опухолей (TNFa), «пролиферативные» – IL-2, или «стимуляторы аллергии» – IL-4, IL-5 и др. Они могут возмещать недостающие регуляторные факторы и тем усиливать иммунные реакции.

В настоящее время наблюдается переход от терапии массовой к терапии индивидуальной, позволяющей вылечить конкретного больного. Однако отсутствие значимых прогностических факторов эффективности делает такую терапию зачастую непредсказуемой, поскольку в зависимости от условий и доз воздействующего агента можно вызвать как стимуляцию, так и угнетение ряда показателей системы иммунитета.

Опыт клинического применения рекомбинантных аналогов цитокинов показал, что действуют они выборочно. Многим пациентам такая терапия существенно помогает в ряде случаев, позволяя вылечить после первого применения, некоторым не помогает вообще, а в ряде случаев наблюдаются выраженные побочные реакции.

Рекомбинантный IL-lb под коммерческим названием Беталейкин (далее БЛ) разрешен Минздравом РФ к клиническому применению (№97/51/6). Биологические свойства этого цитокина, а именно стимуляция костномозгового кроветворения, перестройка иммунопоэза, активация метаболизма соединительной ткани, усиление пролиферации фибробластов и эпителиальных клеток (ранозаживляющее действие), в настоящее время с успехом используются в клинической практике для лечения ряда патологий (онкологических, инфекционных, хирургических, ЛОР и др.). Побочным эффектом терапии БЛ является повышение температуры тела (лихорадка).

Известно, что IL-1 является основным медиатором в механизме развития лихорадки, благодаря чему в литературных источниках часто обозначается как эндогенный или лейкоцитарный пироген. В нормальных условиях он не проникает через гематоэнцефалический барьер. Однако при нарушении иммунного гомеостаза IL-1 достигает преоптической области передней части гипоталамуса и взаимодействует с рецепторами нейронов центра терморегуляции. Посредством активации циклооксигеназы, синтеза простагландинов, повышения внутриклеточного уровня циклического аденозинмонофосфата происходит перестройка активности центров теплопродукции и теплоотдачи с повышением образования тепловой энергии и снижением тепловыделения, что и обусловливает повышение температуры тела [1].

Очевидно, что использование препарата, являющегося аналогом медиатора какой-либо иммунной реакции, предполагает вмешательство, прежде всего в природу этой реакции, а значит до терапии необходимо учитывать исходное индивидуальное состояние той реакции, которую предполагают модулировать.

Из вышесказанного ясно, что поиск и использование факторов, которые позволят сделать прогноз степени эффективности и побочного эффекта цитокиновой терапии, является актуальным и определение персональной чувствительности больного к цитокиновой терапии позволит применять ее более обоснованно и результативно.

Известен способ использования IL-1 для подавления развития гепатита, включающий лечение препаратами на основе IL-1, при котором показан диапазон применяемых доз и характер развития заболевания [2].

Недостатками данного способа является отсутствие прогностического критерия, определяющего индивидуальную восприимчивость и побочный эффект терапии IL-1, а также то, что этот способ подтвержден только данными терапии животных с экспериментальным поражением печени, а результаты применения данного препарата на людях отсутствуют.

Известен также способ лечения туберкулеза легких с преимущественно продуктивным типом тканевой реакции путем проведения этиопатогенетической терапии препаратом Беталейкин [3].

Предложенный способ позволяет повысить эффективность лечения за счет снижения числа рецидивов и осложнений.

Недостатком данного способа является отсутствие прогностического критерия, определяющего индивидуальную восприимчивость к терапии IL-1.

Известен также способ лечения хронических гнойных риносинуситов путем иммунотерапии препаратом БЛ, включающий его системное и местное применение [4].

После терапии БЛ по данному способу у большинства больных (53%) резко сокращается количество гноя в промывной жидкости, который исчезает на третьи сутки лечения (отличный результат), у части больных (33%) небольшое количество гноя в промывной жидкости наблюдается до четвертого дня лечения (хороший результат), и у части пациентов (14%) на фоне уменьшения количества выделений из пазух сохраняются прожилки гноя и имеет место отек и гиперемия слизистой оболочки носа (удовлетворительный результат). Таким образом, эффект терапии отличается у разных больных.

Однако в данном способе отсутствует прогностический критерий, определяющий индивидуальную восприимчивость и побочный эффект терапии БЛ, что является недостатком этого способа. Таким образом, данный способ не позволяет проводить высокоэффективную терапию препаратом IL-1 для всех пациентов.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому решению является способ прогнозирования присоединения воспалительных осложнений в остром периоде черепно-мозговой травмы и способ их профилактики, в котором различия в уровне продукции IL-1 в сыворотке используют в качестве прогностического критерия для проведения иммунокоррегирующей терапии препаратом БЛ [5].

Недостатком данного способа является высокая вариабельность сывороточного уровня IL-1 в зависимости от пола, возраста и наличия сопутствующих заболеваний, что может оказывать существенное влияние на индивидуальный прогноз. Также недостатком известного способа является то, что для его осуществления в обязательном порядке необходимо наличие в клиническом учреждении методов лабораторной диагностики для измерения продукции IL-1, которые в свою очередь требуют дорогостоящих реагентов.

Технический результат изобретения заключается в создании простого способа, позволяющего сделать прогноз эффективности лечения препаратом IL-1 на основании индивидуальной восприимчивости больного к лечению этим препаратом для исключения побочного эффекта предстоящей терапии.

Для достижения указанного технического результата в способе прогнозирования эффективности лечения интерлейкином-1, основанном на совокупности клинических и лабораторных признаков, согласно предложению, анализируют совокупность данных генотипирования по признакам аллельного полиморфизма гена цитокина и показателей температуры тела пациента в ответ на первое введение препарата, причем при наличии у пациента гомозиготного по высокопродуцирующему аллелю гена цитокина и изменении температуры в сторону повышения прогнозируют низкую эффективность лечения, а при наличии у пациента гомозиготного по низкопродуцирующему аллелю гена цитокина и отсутствии повышения температуры прогнозируют высокую эффективность лечения.

Наличие вышеуказанных отличительных признаков свидетельствует о соответствии заявляемого технического решения критерию патентоспособности «новизна».

Из патентной информации известен способ прогнозирования риска внутриутробной инфекции у новорожденных, в котором показатель температуры тела у матери в родах включен в набор факторов риска, совместно с другими клиническими признаками, а именно оценкой по шкале Апгар, массой ребенка при рождении, причем определяют характер каждого фактора риска, оценивают в баллах и по значению суммы баллов прогнозируют риск внутриутробной инфекции [6].

Известный способ включает определение температуры тела у матери в родах.

Однако данный способ достигает иной технический результат, а именно позволяет повысить точность прогноза за счет учета экстрагенитальной патологии, создающей фундамент для начальных сдвигов в гомеостазе и ослаблению резистентности к внешним воздействиям.

Определение температуры используется для прогнозирования риска внутриутробной инфекции и не позволяет прогнозировать эффективность лечения инфекционного заболевания, например препаратом IL-1.

К недостаткам данного способа также следует отнести использование для составления прогноза балльной оценки набора сразу нескольких признаков, что является трудоемким.

Данный способ не учитывает вариабельность этих признаков, воздействие на них других факторов (состояние гомеостаза, заболевания матери), что может оказывать влияние на значение суммы баллов и являться сложным для интерпретации возможного риска.

На основании экспериментальных данных, частично представленных в качестве примеров, в заявляемом способе выявлена связь между показателями температуры тела и индивидуальной восприимчивостью больного к лечению препаратом IL-1, что позволяет исключить побочный эффект предстоящей терапии.

Этот вывод основан на данных генотипирования по признакам аллельного полиморфизма гена цитокина.

В настоящее время доказано, что функциональный (ответственный за измененную экспрессию и продукцию соответствующего белка) полиморфизм генов, кодирующих ряд известных про- и противовоспалительных цитокинов, несущих небольшие мутационные изменения (точечные замены нуклеотидов (SNP, single nucleotide polymorphism) или тандемные повторы частей гена (VNTR, variable number tandem repeat)) может приводить к дисбалансу воспалительного и противоинфекционного иммунного ответа.

Выявлены аллельные варианты генов ряда про- и противовоспалительных цитокинов, ответственных за повышенную продукцию кодируемых ими белков: IL-1a – замена нуклидов в позиции (-889), IL-1b (+3953), IL-1Ra (VNTR), TNFa (-308), IL-6 (-174), IL-4 (-590), IL-10 (-1082), IFNg (+874), IL-2 (-330) и др., частота встречаемости которых в ряде популяций в гетерозиготном виде достигает 40-50%, а в гомозиготном 10-15%.

Таким образом, в зависимости от индивидуального ансамбля высоко- или низкопродуцируюших (нормальных) вариантов этих генов, характер воспалительного ответа может варьироваться между индивидуумами с «полярными» сочетаниями: например, «провоспалительный генотип» – большинство генов провоспалительных цитокинов (IL-1a, IL-1b, TNFa, IFNgamma и др.) являются высокопродуцирующими, а противовоспалительных цитокинов (IL-1Ra, IL-4, IL-10 и др.) – низкопродуцирующими; или «противовоспалительный генотип» – носительство нормальных вариантов генов провоспалительных цитокинов в сочетании с высокопродуцирующими вариантами генов противовоспалительных цитокинов.

В семейство IL-1 принято включать IL-1a, IL-1b, рецепторы IL-1 (IL-1Re) и рецепторный антагонист этого цитокина (IL-Ra).

Равновесие между продукцией, экспрессией и ингибицией синтеза белков семейства IL-1 играет одну из ключевых ролей в развитии, регуляции и исходе воспалительного процесса.

Кластер генов IL-1 (430 Kb) находится на 2ql3 хромосоме и содержит гены IL-1a, IL-1b, рецептора IL-1 Re и IL-1Ra, строение которых достаточно консервативно.

Некоторые аллельные ассоциации генов семейства IL-1 ответственны за измененный характер экспрессии и продукции кодируемых ими белков.

Выявлен ряд SNP-маркеров высокопродуцирующего варианта гена IL-1b, наследуемых, как правило, совместно (+3953, -511, -3737, -1469, -999). Носительство полиморфного варианта 2 гена IL-1Ra (VNTR), несущего ряд повторов по 86 п.о. (IL-1Ra*2) связано с повышенным уровнем циркулирующего IL-1Ra и уровнем экспрессии мРНК этого белка в ходе воспаления.

У лиц, гомо- или гетерозиготных по полиморфному варианту гена IL-1b (+3953), продуцируется соответственно в 4 и 2 раза большее количество этого цитокина при воспалительном ответе, чем у лиц, гомозиготных по нормальному варианту этого гена (IL-1b*1).

Присутствие в геноме сочетаний (знак «+» – вариант гена присутствует, знак «-» – отсутствует) IL-1b (SNP)⁺/IL-1Ra*2^–, IL-1b (SNP)⁺/IL-1Ra*2⁺и IL-1b (SNP)⁺/IL-1Ra*2⁺ может оказывать существенное влияние на соотношение экспрессии и продукции этих белков и являться одной из главных причин дисрегуляции воспалительного ответа. Согласно данным популяционных исследований, вариант IL-1Ra*2 чаще встречается в ассоциации с нормальным (низкопродуцирующим) вариантом гена IL-1b (IL-1b*1) и редко присутствует совместно с высокопродуцирующим вариантом – IL-1b*2 (маркер – одна из замен нуклеотидов, перечисленных выше). Феномен такого наследования объясняется тем, что эти варианты генов, расположенных близко друг к другу, наследуются, как правило, совместно.

У лиц, гетерозиготных по этим вариантам генов, одна из хромосом несет гаплотип IL-1b*1/IL-1Ra*2, вторая – IL-1b*2/IL-1Ra*1, в результате давая сочетание «1/2»IL-1b+«l/2»IL-1Ra. Гаплотип IL-1b*2/IL-1Ra*2 встречается у 1-2% популяции и, по всей видимости, является результатом мейотической рекомбинации.

Экспериментальные данные показали, что выявление гомозиготного высокопродуцирующего варианта гена цитокина, регулирующего воспаление, определяет неэффективность и побочный эффект терапии рекомбинантным аналогом этого цитокина, а выявление гомозиготного по нормальному варианту гена цитокина определяет высокую эффективность и отсутствие побочного эффекта такой терапии. Это в свою очередь позволяет не только выбрать тактику лечения больных с воспалительными и инфекционными заболеваниями на основании индивидуальной генетически обусловленной восприимчивости больного к такой терапии, но и позволяет исключить побочный эффект предстоящей терапии, отменяя препарат после первого введения.

Из вышесказанного следует, что технический результат изобретения достигается новой совокупностью существенных признаков, следовательно, заявляемый способ соответствует критерию патентоспособности «изобретательский уровень».

Способ иллюстрируется чертежами, где на фиг.1 представлена таблица частоты встречаемости лихорадки у пациентов с ХГС после первой инъекции БЛ (%); на фиг.2 показан график изменений уровней АЛТ после терапии БЛ у лиц с нормальными и фебрильными значениями лихорадки после первого введения БЛ; на фиг.3 представлена таблица соотношений экспрессии генов IL-1b/IL-1Ra и температурной реакции на введение БЛ у больных ХГС; на фиг.4 представлен образец опросника.

Способ осуществляется следующим образом.

При необходимости назначения терапии препаратом на основе IL-1 пациенту задают вопросы о характере температуры тела в анамнезе жизни. Также изучают данные амбулаторных и стационарных заключений, которые могут содержать информацию о повышении температуры тела пациента во время заболевания острыми вирусными и бактериальными инфекциями.

Если в анамнезе отмечаются гипертермические состояния, препарат не назначают. При отсутствии данных анамнеза проводят генотипирование по признакам аллельного полиморфизма гена цитокина, а также оценивают уровень повышения температуры после первого введения препарата.

При наличии у пациента гомозиготного по низкопродуцирующему аллелю гена цитокина и отсутствии повышения температуры прогнозируют высокую эффективность лечения. При наличии у пациента гомозиготного по высокопродуцирующему аллелю гена цитокина и изменении температуры в сторону повышения прогнозируют низкую эффективность лечения.

Вышеуказанные результаты получены при генотипировании 283 человек.

У пациента брали материал, содержащий клетки (кровь, смывы и др.) и проводят молекулярно-генетическое определение вариантов генов цитокинов. Из клеток одним из известных методов, например с помощью фенол/хлороформ-экстракции по Хомчинскому, получали образцы высокомолекулярной ДНК.

Варианты аллелей генов, нормальные и несущие точечные замены нуклеотидов SNP определяли, например, методом ПДРФ-анализа продуктов ПЦР-амплификации специфических участков генома (RELF-PCR). ПЦР-реакцию проводили с использованием праймеров (библиотека Gene Bank), ограничивающих участок гена IL-1b, могущий содержать указанную замену нуклеотидов, а на этапе рестрикации полученный амплификат инкубировали с индивидуально подобранными ферментами рестрикции.

Продукты рестрикции разделяли, например, электрофоретически в агарозном геле, окрашивали ДНК-красителем и визуализировали. В качестве маркера размера фрагментов ДНК использовали, например, набор маркеров молекулярного веса.

При наличии в геноме полиморфной мутации продукт амплификации остается целым, у гетерозиготных индивидов выявляли как целый, так и фрагментированный продукт.

Наличие тандемных повторов частей гена (VNTR) определяли, например, методом ПЦР (PCR): амплифицировали участок ДНК, содержащий разное число тандемных повторов, аллельный тип определяли по длине получаемого продукта амплификации при разделении и визуализации.

Для краткого обозначения аллелей генов IL-1b и IL-1Ra были приняты следующие сокращения: нормальный, не несущий выявляемую мутацию, аллель обозначается цифрой 1, полиморфный – 2, соответственно гомозиготный нормальный ген – «1/1», гомозиготный высокопродуцирующий ген – «2/2», гетерозиготный – «1/2».

При выявлении у больного варианта «1/1» гена цитокина прогнозировали высокую эффективность и отсутствие выраженного побочного эффекта после введения в организм его рекомбинантного аналога.

При выявлении у больного варианта «2/2» гена прогнозировали неэффективность терапии и высокий побочный эффект.

179 пациентов с инфекционными (вирусными и бактериальными инфекциями) и воспалительным заболеваниями прошли курс лечения БЛ: 70 больных хроническим гепатитом С (далее ХГС), 56 больных туберкулезом легких, 53 пациента с хроническим гнойным риносинуситом (далее ХГР), 104 донора.

Диагноз ХГС был установлен 60 пациентам на основании общепринятых клинических, эпидемиологических и биохимических данных и подтвержден обнаружением маркеров вирусного гепатита С методом иммуноферментного анализа, а также обнаружением РНК вируса гепатита С в сыворотке крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Кроме того, проводили морфологическое исследование биоптатов ткани печени, которое подтвердило хроническую форму течения вирусного гепатита у обследуемых больных. Возраст больных колебался в пределах от 15 до 26 лет.

Препарат БЛ назначали внутривенно капельно в дозе 6 нг/кг в течение 20 дней (10 инъекций через день). При терапии у ряда больных отмечался ожидаемый подъем температуры тела, который появлялся непосредственно после инъекции препарата и держался в течение 2-3 часов после прекращения его введения, что не являлось осложнением, вызвавшим отмену препарата. Температурную реакцию организма в ответ на первое введение БЛ, не превышающую 36,9°С, классифицировали как нормальную, субфебрильную – в интервале 37-37,9°С, фебрильную – свыше 38°С. Уровень репликации вируса гепатита С и его генотипы определяли с помощью тест-систем Amplicor (Швецария).

Фебрильные температурные значения после первого введения наблюдались у 18% пациентов. С другой стороны, у 34% температурный скачок после инъекции БЛ отсутствовал (фиг.1).

При анализе корреляций значений лихорадки после первого введения БЛ с показателями эффективности терапии БЛ при ХГС (уровень аланиновой трансаминазы (АЛТ), репликативная активность вируса гепатита С в сыворотке крови) выявлено, что у лиц, имеющих фебрильные значения лихорадки, после первого введения БЛ уровень АЛТ до терапии БЛ был в 1,5 раза ниже, чем у лиц, не отвечающих генерацией лихорадки (фиг.2).

При ретроспективном наблюдении в течение 1,5 лет после курса инъекций Б Л значительное и достоверное (в 2,5 раза) снижение уровня АЛТ через 1-3 месяца после терапии БЛ отмечалось у лиц с нормальными значениями температуры тела после первого введения БЛ. Кроме того, показатель АЛТ не увеличивался в течение всего срока наблюдения. Тогда как у лиц с фебрильными значениями в ответ на введение БЛ не наблюдалось достоверных изменений этого показателя в течение всего срока наблюдения. При сравнении значений лихорадки на введение БЛ и уровня АЛТ через месяц после начала терапии отмечалась обратная корреляция этих показателей (r=-0,32, р<0,05).

С другой стороны, несмотря на более низкие значения АЛТ, лица, отвечающие фебрильной температурой тела на первое введение БЛ, имели достоверно (р<0,05) более высокий уровень репликации вируса гепатита С в сыворотке крови, чем больные без повышения температуры тела на первую инъекцию. Однако терапия БЛ лиц с фебрильными значениями лихорадки на введение не приводила к достоверному снижению репликативной активности вируса гепатита С в сыворотке крови после курса БЛ. Как показал анализ данных количественного ПЦР-обнаружения вирусных частиц гепатита С в сыворотке крови, при ретроспективном 1,5 годовом наблюдении после курса инъекций БЛ наиболее значимо и достоверно (р<0,05) этот показатель снижался у больных, не отвечающих лихорадкой на первую инъекцию препарата. Частота встречаемости генотипов вируса гепатита С у пациентов была (%): 1b – 25,8; 1b2 – 1,6; 1а – 4,8; 1b3а – 11,3; 2а – 1,6; 3а – 54,8. Не наблюдалось достоверной зависимости показателей эффективности БЛ от генотипа вируса гепатита С.

В целом, наряду с относительно низкими показателями АЛТ и более высоким уровнем репликации вируса гепатита С в сыворотке крови у больных, отвечающих фебрильной температурной реакцией на первое введение IL-1, терапия была не эффективна.

У больных, не имеющих повышения температуры тела в ответ на введение БЛ выявлено обратное: более высокие показатели АЛТ и более низкие – репликативной активности вируса в сыворотке крови до лечения ассоциировались с низкими значениями лихорадки вплоть до ее отсутствия при введении пациентам БЛ. И терапия БЛ для таких больных была высокоэффективна, так как позволяла значительно снизить уровни АЛТ и репликации вируса гепатита С в сыворотке крови. Кроме того, эффект терапии сохранялся в течение всего срока наблюдения.

При тестировании интенсивности экспрессии генов IL-1b и IL-1Ra на уровне мРНК в лимфоцитах периферической крови методом ОТ-ПЦР больных разделили на две группы (8 и 5 человек) по показателям лихорадки в ответ на первое введение БЛ: через сутки после начала лечения БЛ у больных группы I (нормальная температура тела) наблюдались достоверные снижение экспрессии эндогенного IL-1b и повышение IL-1Ra, а у больных группы II (фебрильная температура), напротив, повышение IL-1b и снижение IL-1Ra в сравнении с соответствующими значениями до введения БЛ (фиг.3).

Таким образом, первая инъекция экзогенного IL-1b, вызывающая повышение экспрессии этого цитокина в клетках крови, сопровождалась фебрильными значениями лихорадки в ответ на введение.

Далее было назначено иммунокоррегирующее лечение Беталейкином 10 пациентам с ХГС. Доза вводимого препарата составила 7-8 нг/кг, планировался курс лечения – 20 дней (10 внутривенных капельных вливаний через день). Согласно результатам предыдущего эксперимента измеряли температуру тела после первой инъекции БЛ. У 2 пациентов значения лихорадки достигли фебрильных значений 38,2 и 38,5°С. Дальнейшее лечение этих пациентов БЛ было отменено.

Результаты, полученные при анализе эффективности терапии пациентов туберкулезом легких препаратом БЛ, совпадают с полученными данными при терапии больных с ХГС.

Терапия БЛ осуществлялась больным с туберкулезом с продуктивным типом течения путем подкожной инъекции в физиологическом растворе в дозе бнг/кг 5-кратно с интервалом через день. По данным рентгенологического обследования легких у больных с фебрильными значениями лихорадки после первого введения БЛ не отмечалось достоверных изменений размеров полостей инфильтрата. Тогда как у больных с нормальными значениями этого показателя в 64% случаев регистрировалось значительное уменьшение или исчезновение полостей инфильтрата в легких уже через 1 месяц после проведения терапии БЛ.

Таким образом, определение уровня лихорадки после первого введения препарата IL-1 позволяет со значительной долей вероятности предсказать степень эффективности лечения этим препаратом.

Пациентам и донорам также был предложен опросник о характере лихорадки при простудных заболеваниях в анамнезе жизни (фиг.4).

Согласно полученным данным, 78% респондентов, как правило, болеют простудными заболеваниями без фебрильных значений температуры тела, из них 16% вообще не отмечают повышение температуры тела в анамнезе; 22% имеют фебрильные значения температуры – в 5% случаев выше 39°С. При сравнении показателей лихорадки в анамнезе жизни и уровнями лихорадки в ответ на первое введение препарата IL-1 у пациентов выявлена достоверная прямая корреляция: лица, отвечающие фебрильными значениями лихорадки на первое введение БЛ, имеют фебрильные значения лихорадки в анамнезе жизни (р<0,01).

Эти признаки могут использоваться как совместно, так и независимо друг от друга, так как каждый из этих признаков достоверно и значительно коррелирует с эффективностью лечения препаратом IL-1.

Таким образом, одним из достоверных критериев прогнозирования степени эффективности терапии IL-1 может являться характер значений лихорадки в анамнезе жизни пациента.

Технический результат, достигаемый заявляемым способом, подтверждают и результаты, полученные при терапии препаратом БЛ пациентов с воспалительным заболеванием – хроническим гнойным риносинуситом (ХГР).

Терапия БЛ проводилась 53 пациентам с ХГР местно (10-15 нг в 1-1,5 мл физиологического раствора). Лечение осуществлялось путем промывания раз в день раствором БЛ пунктированных верхнечелюстных пазух до исчезновения гнойного отделяемого. В исследуемую группу входили только пациенты с вовлечением в патологический процесс верхнечелюстных и этмоидальных пазух с двух сторон. Длительность заболевания у всех пациентов составляла около 10 лет с возникновением рецидивов 4-5 раз в год. Больным с диагностической и лечебной целью производилась пункция верхнечелюстных пазух.

Применение БЛ в лечении больных ХГР показало, что этот препарат высокоэффективен для лиц, не отмечающих фебрильных значений лихорадки в анамнезе жизни. В течение 2-5 дней терапия таких больных приводила к полному исчезновению гнойного отделяемого и прекращению воспалительного процесса в верхнечелюстных пазухах. Введение экзогенного IL-1b оказывало стимулирующее воздействие на функции иммунной системы таких пациентов, регулировало соотношение IL-1Ra и IL-1b в сыворотке крови и очаге воспаления, активировало функциональное состояние иммунного ответа непосредственно в очаге воспаления и способствовало ускоренному завершению воспалительного процесса.

Отрицательный результат терапии наблюдался у больных с высокими значениями лихорадки в анамнезе жизни: после введения БЛ усиливался отек слизистой, увеличивалось слизисто-гнойное отделяемое. Практически у всех пациентов ХГР протекает без повышения температуры тела, однако у таких пациентов наблюдалось повышенная температура на фоне заболевания.

Способ поясняется следующими конкретными примерами.

Пример 1. Больная П., 19 лет, поступила в ЛОР НИИ с жалобами на заложенность носа, гнойное выделяемое из носа, головную боль, повышение температуры тела до 38,5°С, ухудшение самочувствия.

Анамнез заболевания: больной себя считает с детства. Частые рецидивы до 3-4 раз в год. Периоды обострения на фоне высоких цифр температуры до 39°С.

Риноскопия: Слизистая носа гиперемирована, влажная, умеренно отечная. В носовых ходах слизисто-гнойное отделяемое. Носовая перегородка по средней линии.

КТ (компьютерная томография) – Отмечается выраженный отек слизистой верхнечелюстных пазух и клеток решетчатого лабиринта. DS. Обострение двустороннего хронического гнойного гаймороэтмоидита.

Иммуногенетика: IL-1b «2/2», IL-1Ra «1/1». Таким образом, у пациентки определено наличие гомозиготного по высокопродуцирующему аллелю гена цитокина. Предварительный прогноз эффективности лечения: низкая эффективность цитокиновой терапии.

После первого введения БЛ в дозе 10 нгр в каждую пазуху отмечается резкое ухудшения самочувствия, повышение температуры до 39,0°С, усилилась заложенность носа, появилась головная боль. Окончательный прогноз эффективности лечения: низкая эффективность цитокиновой терапии.

Больная была пролечена традиционными методами лечения.

Пример 2. Больная Р., 36 лет, поступила в ЛОР НИИ с диагнозом: Обострение хронического гнойного полисинусита. Состояние после фронтотомии справа в восьмилетнем возрасте. Состояние после этмоидотомии двусторонней септопластики, инфунбунотомии двусторонней (в 33 года). Жалобы на головную боль, гнойное отделяемое из носа, слабость, температура 36,6°С.

Больной себя считает с 8 лет, рецидивы 4 раза в год. В периоды обострения температура тела не выше 37,3°С.

Объективно: Слизистая носа розовая, носовая перегородка искривлена вправо. Средних носовых раковин нет. Носовые ходы широкие. В верхних носовых ходах гнойные полоски справа и слева. При эндоскопическом контроле в левой верхнечелюстной пазухе гной.

КТ – фронтальные пазухи тотально заполнены жидкостью, задние клетки решетчатого лабиринта отечные. В левой верхнечелюстной пазухе уровень жидкости.

Иммуногенетика: IL-1b «1/1», IL-1Ra «2/2». Таким образом, у пациентки определено наличие гомозиготного по низкопродуцирующему аллелю гена цитокина. Предварительный прогноз эффективности лечения: высокая эффективность цитокиновой терапии.

После первого введения БЛ в дозе 15 нгр не наблюдалось изменения температуры тела в сторону повышения, показания температуры: 36,6°С. Окончательный прогноз эффективности лечения: высокая эффективность цитокиновой терапии.

Введение БЛ продолжили ежедневно в течение 5 дней. Полная санация пазух на 6 сутки. Контрольная КТ через 2 недели.

Заключение. Искривление носовой перегородки. КТ – признаков воспаления околоносовых пазух не выявлено.

Пример 3. Больной Б., 19 лет обратился в ЛОР НИИ с жалобами на выделения гнойные из носа, температура 36,7°С, слабость, умеренная головная боль, носовое дыхание свободно, ухудшение самочувствия.

Анамнез заболевания: Больным себя считает с 12 лет. Слизисто-гнойное отделяемое со слов больного постоянно отделяется из носа в небольшом количестве и увеличивается объем его в период обострения. На фоне обострения температура тела не выше 37,2-37,5°С. Рецидивы до 5 раз в год. Лечение в периоды обострения не завершается полной санацией верхнечелюстных пазух.

Риноскопия: Слизистая носа гиперемирована. В носовых ходах обильное гнойное отделяемое. Носовая перегородка искривлена S-образно.

КТ – Патологическое содержимое тотально заполняющее обе верхнечелюстные пазухи и клетки решетчатой кости. Concha Bullosa правой средней носовой раковины. DS: Искривление носовой перегородки. Обострение двустороннего хронического гнойного гаймороэтмоидита. Concha Bullosa правой средней носовой раковины.

Иммуногенетика: IL-1b «1/1», IL-1Ra «1/2». Таким образом, у пациента определено наличие гомозиготного по низкопродуцирующему аллелю гена цитокина. Предварительный прогноз эффективности лечения: высокая эффективность цитокиновой терапии.

После первого введения БЛ в дозе 10 нгр в каждую верхнечелюстную пазуху резко сократилось отделяемое из носа, самочувствие улучшилось. Температура тела после первого введения препарата не изменилась в сторону повышения, температура тела: 36,6°С. Окончательный прогноз эффективности лечения: высокая эффективность цитокиновой терапии.

Принято решение продолжить терапию. Для полного купирования воспалительного процесса потребовалось 4-кратное введение БЛ в той же дозировке.

КТ через две недели: отмечается умеренный отек правой верхнечелюстной пазухи. Другие носовые пазухи пневматизированы. Concha Bullosa правой средней носовой раковины.

Пример 4. Больной К., 47 лет, обратился в НИИ ЛОР с жалобами на гнойное отделяемое из носа, головную боль, слабость, быструю утомляемость, температура тела 37,1°С.

Объективно: Носовые ходы заполнены гнойным отделяемым сливкообразной консистенции, зеленого цвета, слизистая носа застойная, умеренно отечная. Носовое дыхание умеренно затруднено. Носовая перегородка по средней линии.

КТ – верхнечелюстные пазухи заполнены патологическим содержимым (жидкостной плотности).

Анамнез заболевания: Больным себя считает более 10 лет, рецидивы 3-4 раза в год. На фоне заболеваний температура тела не повышается выше 37,5°С.

Больному поставлен диагноз: обострение двустороннего хронического гнойного гаймороэтмоидита.

Иммуногенетика: IL-1b «1/2», IL-1Ra «1/2». Таким образом, у пациента определено наличие гомозиготного по низкопродуцирующему аллелю гена цитокина. Предварительный прогноз эффективности лечения: высокая эффективность цитокиновой терапии.

После первого введения БЛ в дозе 10 температура тела не изменилась в сторону повышения, значения составили 37,1°С. Окончательный прогноз эффективности лечения: высокая эффективность цитокиновой терапии.

Терапия: Произведено трехкратное введение БЛ. Доза Юнгр БЛ разведенного в 3 мл физиологического раствора в каждую пазуху. Пазухи санированы на 4-е сутки.

Контрольное КТ: верхнечелюстные пазухи пневматизированы. Отмечается отек этмоидальных клеток.

Пример 5. Больная С.В., 61 год, обратилась в НИИ ЛОР с жалобами на слабость, тяжесть в проекции верхнечелюстных пазух, переносицы, гнойное отделяемое из носа, умеренное затруднение носового дыхания, температура тела 37,0°С.

Анамнез заболевания: Больной себя считает более 7 лет. Рецидивы заболевания 4 раза в год. Повышение температуры тела при инфекционных заболеваниях и при обострениях хронических не выше 37,5°С.

Объективно: Носовые ходы свободны. Слизистая застойная, влажная. После анемизации в среднем носовом ходе Dex et sin гнойные полоски.

КТ – В верхнечелюстных пазухах отмечаются уровни жидкости, выраженный отек этмоидальных клеток.

DS основной: Обострение двустороннего хронического гнойного гаймороэтмоидита. Искривление носовой перегородки.

Иммуногенетика: IL-1b «1/2», IL-1Ra «2/2». Таким образом, у пациентки определено наличие гомозиготного по низкопродуцирующему аллелю гена цитокина. Предварительный прогноз эффективности лечения: высокая эффективность цитокиновой терапии.

После первого введения БЛ в дозе 10 температура тела не изменилась в сторону повышения, значения составили 37,0°С. Окончательный прогноз эффективности лечения: высокая эффективность цитокиновой терапии.

Терапия: После 3-кратного введения БЛ в дозе 10 нгр, разведенного в 3 мл физиологического раствора в каждую пазуху, воспалительный процесс купировался, гнойного отделяемого нет.

Контрольная КТ через 2 недели – верхнечелюстные пазухи и клетки решетчатого лабиринта пневматизированы.

Согласно представленным примерам, заявляемый способ позволяет достоверно прогнозировать эффективность лечения IL-1, исходя из совокупности данных генотипирования и показателей температуры тела пациента в ответ на первое введение препарата.

Заявляемый способ можно использовать при проведении массового лечения препаратом IL-1 больных с той или иной патологией, для которой в результате клинических испытаний этот препарат разрешен и рекомендован в качестве лечебного средства. Способ имеет большое практическое значение, так как лечение препаратом БЛ на сегодняшний день проводят большим группам пациентов, однако в ряде случаев оно не только не результативно, но сопровождается выраженным побочный эффектом и может приводить к обратному результату – усилению патологического процесса. С другой стороны, для части пациентов такая терапия является единственным средством, которое помогает вылечить болезнь.

Способ позволяет, как до назначения больному необходимой в данный момент терапии установить, как подействует на пациента лечение, будет ли оно эффективно, не нанесет ли вред.

Применение экспериментально установленных прогностических критериев позволяет исключить в процессе лечения лица, для которых лечение этим препаратом будет неэффективно.

Данные исследования проведены и прошли апробацию на базе:

ГНЦ НИИ особо чистых биопрепаратов, Санкт-Петербург;

Медицинской академии последипломного образования, Санкт-Петербург;

НИИ ЛОР, Санкт-Петербург;

Из вышесказанного следует, что предлагаемый способ обеспечивает технический результат, не вызывает затруднений, предполагает использование освоенных материалов и стандартного оборудования, что свидетельствует о соответствии заявляемого технического решения критерию патентоспособности «промышленная применимость».

Источники информации

1. Foreman J.С.Pyrogenesis / Textbook of Immunopharmacology. – Blackwel Scientific Publications, 1989. – P.199.

2. Патент US №5723117, A61K 38/20, 1998.

3. Патент RU №2204409, A61K 38/20, A61P 11/00, 2003.

4. Патент RU №2161983, A61K 38/20, A61B 17/24, 2001.

5. Патент RU №2214602, G01N 33/52, A61N 5/067, 2003.

6. Патент RU №2246247, A61N 5/00, 2005.

Формула изобретения

Способ прогнозирования эффективности лечения интерлейкином-1, основанный на совокупности клинических и лабораторных признаков, отличающийся тем, что анализируют совокупность данных генотипирования по признакам аллельного полиморфизма гена цитокина и показателей температуры тела пациента в ответ на первое введение препарата, причем при наличии у пациента гомозиготного по высокопродуцирующему аллелю гена цитокина и изменении температуры в сторону повышения прогнозируют низкую эффективность лечения, а при наличии у пациента гомозиготного по низкопродуцирующему аллелю гена цитокина и отсутствии повышения температуры прогнозируют высокую эффективность лечения.

РИСУНКИ