Патент на изобретение №2300389

(54) НООТРОПНОЕ СРЕДСТВО

(57) Реферат:

Изобретение относится к области создания лекарственных препаратов растительного происхождения с проявлением ноотропного действия. Предложено применение экстракта бересты в качестве ноотропного средства. Средство обеспечивает мягкое воздействие без проявления побочного действия. 10 ил.

Изобретение относится к области медицины, более конкретно к психофармакологии, еще более конкретно к отысканию новых ноотропных средств.

Ноотропы (греч. noos – мышление, разум; tropos – направление) – средства, оказывающие специфическое позитивное влияние на высшие интегративные функции мозга. Они улучшают умственную деятельность, стимулируют познавательные функции, обучение и память, повышают устойчивость мозга к различным повреждающим факторам, в т.ч. к экстремальным нагрузкам и гипоксии. Кроме того, ноотропы (нейрометаболические стимуляторы) обладают способностью снижать неврологический дефицит.

Концепция ноотропных средств возникла в 1963 году, когда бельгийскими фармакологами С. Giurgea и V. Skondia был синтезирован и внедрен первый препарат этой группы – пирацетам. Последующие исследования показали, что пирацетам облегчает процессы обучения и улучшает память. Подобно психостимуляторам препарат повышал умственную работоспособность, но в то же время не оказывал присущих психостимуляторам побочных эффектов.

После успешного внедрения в лечебную практику пирацетама было синтезировано более 10 оригинальных ноотропных препаратов пирролидинового ряда, в настоящее время находящихся в фазе III клинических испытаний или уже зарегистрированных в ряде стран: оксирацетам, анирацетам, этирацетам, прамирацетам, дупрацетам, ролзирацетам, цебрацетам, нефирацетам, изацетам, детирацетам и др. Эти ноотропные препараты, исходя из их химического строения, получили название «рацетамы». Вслед за ними стали формироваться и другие семейства ноотропных препаратов, включающие холинергические, ГАМКергические, глутаматергические, пептидергические и другие вещества; кроме того, была идентифицирована ноотропная активность у некоторых ранее известных веществ.

Ряд веществ, относящихся к группе ноотропных средств, обладает достаточно широким спектром фармакологической активности, включающим противогипоксический, анксиолитический, седативный, противосудорожный, миорелаксантный и другие эффекты.

Стимулирующее влияние ноотропов на психическую деятельность не сопровождается речевым и двигательным возбуждением, истощением функциональных возможностей организма, развитием привыкания и пристрастия, хотя в некоторых случаях они могут вызывать беспокойство и расстройство сна. Положительным свойством ноотропов является их малая токсичность, хорошая сочетаемость с препаратами других фармакологических групп и практическое отсутствие побочных действий и осложнений.

Последнее время отмечено высокими темпами исследовательской деятельности, связанной с поиском и изучением механизма действия новых и уже имеющихся ноотропных препаратов. Актуальным является поиск новых препаратов, которые обладали бы большей фармакологической активностью и оказывали бы избирательное действие на интегративные функции головного мозга, улучшая психопатологическое состояние пациента, его умственную активность и ориентацию в повседневной жизни.

Одним из направлений поиска новых ноотропов является исследование продуктов растительного происхождения на предмет наличия у них ноотропной активности.

Известен растительный ноотропный препарат, выпускаемый под торговой маркой «Танакан» (Tanakan), представляющий собой стандартизированный экстракт из листьев Гинкго билоба. Однако Гинкго билоба является реликтовым деревом с крайне узким ареалом распространения, поэтому задача отыскания новых эффективных и недорогих растительных препаратов с ноотропной активностью продолжает оставаться актуальной.

Авторами настоящего изобретения в результате проведения ряда исследований ноотропная активность была обнаружена у экстракта бересты – верхней, белой части коры березы – одного из наиболее распространенного в мире видов деревьев. Применение такого экстракта в качестве ноотропного средства и определяет сущность настоящего изобретения.

Психотропная активность была выявлена авторами изобретения при исследованиях «Бересты экстракта сухого» (далее сокращено БЭС), производимого Обществом с ограниченной ответственностью «Березовый мир» (г. Москва, Россия) для изготовления пищевых добавок. Основным компонентом экстракта бересты является бетулин.

Вначале исследовалась фармакокинетика БЭС, при этом было установлено, что при его однократном введении крысам в дозе 100 мг/кг максимальная концентрация в ткани головного мозга (114±6 мкг/г) отмечается уже через 2 ч после введения, в то время как максимальная концентрация БЭС в крови (189±11 мкг/мл) достигается лишь через 3 ч.

Дальнейшие опыты проводились на мышах-самцах линии C57/BI/6 с массой 20-25 г, содержащихся в условиях лабораторного вивария на стандартной диете.

БЭС вводили мышам с помощью зонда внутрижелудочно в форме суспензии в 1%-ном растворе картофельного крахмала в дозах 25, 50 и 100 мг/кг за 1,5 ч до тестирования. Контрольной группе вводили эквивалентные объемы 1%-ного крахмала. В экспериментах с острым введением препарата контрольная и 3 опытные группы животных состояли из 16-20 особей каждая. В экспериментах с неоднократным введением БЭС использовали 1 контрольную и 1 опытную группу животных (50 мг/кг/день).

При обработке полученных результатов использовали методы параметрической и непараметрической статистики (t-тест Стьюдента, Хи-квадрат и др.) согласно «Методическим рекомендациям по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», Москва, 2000.

Для предварительной оценки возможного психотропного эффекта БЭС был использован комплекс из двух тестов – т.н. «крестообразный лабиринт» и «скользкая воронка», позволяющий в двух последовательных пассажах животных зарегистрировать характер их поведения в незнакомой и неизбегаемой ситуации и рассчитать параметры поведения, отражающие тревожность, двигательную активность, реакцию на новизну, рациональность передвижения в новой обстановке.

Тест «крестообразный лабиринт»

1. Латентный период начала исследовательского поведения (FLAT), то есть время, прошедшее до первого захода в боковой отсек, и продолжительность пребывания в первом тупике. Эти параметры имеют отрицательную корреляцию с продолжительностью пребывания в открытых рукавах приподнятого лабиринта и могут рассматриваться как показатель баланса между любопытством и тревогой животного в новой обстановке.

2. Число визитов в боковые отсеки во время первого и второго патрулирования лабиринта (то есть посещения всех его помещений) (FPAT). Например, если последовательность номеров посещенных боковых отсеков была 1241413344321, то на первое патрулирование было затрачено 7 визитов. Чем больше визитов требуется для полного обхода лабиринта, тем менее эффективным является исследовательское поведение данной особи.

3. Общее число патрулирований (PATN). В вышеприведенном примере этот показатель равен 2, поскольку второе патрулирование было завершено на 13-м визите. Чем больше наблюдалось патрулирований лабиринта, тем более эффективным является исследовательское поведение данного животного.

4. Общая продолжительность пребывания в центре и рукавах лабиринта, которая имеет обратную корреляцию с числом пересеченных квадратов в тесте открытого поля [Markina N.V., Salimov R.M., Poletaeva I.I. Exploratory behaviour of F2 crosses of mouse lines having selected for different brain weight: A multivariate analysis. Prog. Neuro-Psychopharmacol. Biol.Psychiat, 2004, 28(3):583-589].

Тест «скользкая воронка»

1. Продолжительность пребывания в воде в нижней части воронки (FIMM).

2. Продолжительность пассивного избегания ситуации в виде попытки держаться в распластанной позе на наклонной стенке воронки (FAVO).

3. Продолжительность активного избегания ситуации в виде попыток вылезти или выпрыгнуть из воронки (FESC).

С использованием указанных тестов были проведены следующие исследования.

1. Изучение профиля поведения мышей в тестах «крестообразный лабиринт» и «скользкая воронка» после однократного введения БЭС внутрь в дозах 25, 50 и 100 мг/кг через 2 ч.

2. Изучение профиля поведения мышей в тестах «крестообразный лабиринт» и «скользкая воронка» после однократного введения БЭС внутрь в дозах 25, 50 и 100 мг/кг через 6 ч.

3. Изучение профиля поведения мышей в тесте «крестообразный лабиринт» после субхронического введения БЭС внутрь в дозе 50 мг/кг/сутки в течение 5 дней.

1. Изучение поведения мышей линии C57BI в тестах «крестообразный лабиринт» и «скользкая воронка» через 2 ч после однократного введения БЭС внутрь в дозах 25, 50 и 100 мг/кг.

а) Влияние БЭС на число визитов, затраченных мышами на 1-е и 2-е патрулирования лабиринта (средние величины и доверительный интервал).

Анализ данных с помощью непараметрического критерия Хи-квадрат обнаружил статистически значимое уменьшение числа визитов, затраченных на 2-е патрулирование. В контроле у 8 из 15 мышей этот показатель был больше 5, а после введения БЭС в дозе 25 мг/кг – только у 2 из 15 мышей (р=0,02) (Фиг.1).

Данный эффект характерен для действия ноотропных средств.

б) Влияние БЭС на латентный период первого захода (время в центре) и продолжительность первого визита (время в тупике) в тупик лабиринта (средние величины и доверительный интервал).

Сравнение средних по критерию Стьюдента не выявило различий, однако анализ данных с помощью непараметрического критерия Хи-квадрат обнаружил статистически значимое увеличение латентного периода первого захода. В контроле ни у одной из 15 мышей этот показатель не превышал 19,5 секунд, а после БЭС в дозе 25 мг/кг у 4 из 15 мышей он был больше указанной величины (р=0,032). Близкий результат наблюдался после БЭС в дозе 50 мг/кг – у 3 из 15 мышей данный показатель был больше указанной величины (р=0,068) (фиг.2).

Избирательное (по сравнению с показателями, приведенными на фиг.3) увеличение данного показателя характерно для средств, усиливающих настороженность и бдительность. Укорочение данных показателей характерно для действия транквилизирующих средств.

в) Влияние БЭС на общую продолжительность пребывания в центре и в тупиках лабиринта без учета показателей, показанных на фиг.2 (средние величины и доверительный интервал).

Анализ данных с помощью непараметрического критерия Хи-квадрат обнаружил статистически значимое уменьшение общей продолжительности пребывания в центре лабиринта. В контроле у 5 из 15 мышей этот показатель был больше 63 секунд, а после БЭС в дозе 25 мг/кг – ни у одной из 15 мышей (р=0,014) (фиг.3).

Укорочение данных показателей характерно для действия тимолептических и психостимулирующих средств, а их удлинение – для седативных средств.

г) Влияние БЭС на общее время неподвижности, пассивного или активного избегания в тесте скользкой воронки (средние величины и доверительный интервал).

Сравнение средних по критерию Стьюдента обнаружило статистически значимое увеличение общего времени пассивного избегания (t(1,26)=2,61, р=0,032) (фиг.4).

Увеличение пассивного и активного избегания характерно для действия тимолептических и антидепрессивных средств.

2. Изучение поведения мышей линии C57BI в тестах «крестообразный лабиринт» и «скользкая воронка» через 6 часов после однократного введения БЭС внутрь в дозах 25, 50 и 100 мг/кг.

а) Влияние БЭС на число визитов, затраченных мышами на 1-е и 2-е патрулирования лабиринта (средние величины и доверительный интервал).

Сравнение средних по критерию Стьюдента не выявило различий, однако анализ данных с помощью непараметрического критерия Хи-квадрат обнаружил статистически значимое уменьшение числа визитов, затраченных на 1-е патрулирование. В контроле у 4 из 15 мышей этот показатель был больше 7, а после БЭС в дозе 50 мг/кг – ни у одной из 15 мышей (р=0,014) (фиг.5).

Данный эффект характерен для действия ноотропных средств.

3. Изучение поведения мышей линии C57BI в тесте «крестообразный лабиринт» после 5-кратного введения БЭС внутрь в дозе 50 мг/кг.

а) Влияние БЭС на латентный период первого захода (время в центре) и продолжительность первого визита (время в тупике) в тупик лабиринта (средние величины и доверительный интервал).

Дисперсионный анализ выявил тенденцию к увеличению обоих показателей под влиянием введения БЭС в дозе 50 мг/кг (F(1,32)=3,885, р=0,057) (фиг.6).

В проведенных поведенческих тестах общего предварительного скрининга на мышах обнаружено, что экстракт бересты демонстрирует мягкое психотропное действие, профиль которого можно охарактеризовать, как умеренно активирующий, энергизирующий, тимолептический.

Далее изучение эффектов БЭС проводилось в соответствующих специфических тестах направленного скрининга, рекомендованных для обнаружения ноотропной, антидепрессивной и психостимулирующей активности, с использованием доз 25 и/или 50 мг/кг. В выборе времени экспозиции препарата руководствовались результатами, полученными при изучении фармакокинетики БЭС (1,5-2 ч), когда уровень препарата в крови и мозге приближался к максимальным значениям.

При этом решались следующие задачи.

– Изучить действие БЭС в стандартных нейрофармакологических тестах, основанных на взаимодействии с веществами, активирующими центральную нервную систему:

а) по влиянию на эффекты антидепрессанта с активирующим компонентом – пиразидола в «тесте отчаяния»;

б) по влиянию на двигательную гиперактивность, вызываемую введением фенамина и апоморфина.

– Изучить профиль поведения мышей линии C57BI/6 на предмет обнаружения ноотропной активности по стандартной методике условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ) через 1,5 ч после однократного БЭС внутрь в дозах 25 и 50 мг/кг.

Тест «отчаяния»

Относится к тестам, направленных на изучение возможного влияния препарата на эмоционально-стрессовое состояние животных. Данное состояние вызывается у мышей форсированным плаванием.

Мышей помещают в цилиндр диаметром 10 см, высотой 25 см, наполненный на 2/3 водой (27°С). После неудачных попыток выбраться из воды животные принимают характерную неподвижную позу, которую расценивают, как проявление подавленности, «отчаяния». Фиксируют все активные попытки мышей выбраться из воды в течение первых 6 мин после погружения в воду, в частности:

– длительность свободного плавания, (с);

– длительность плавания у бортика (с); а также

– длительность иммобильности (с).

Под влиянием антидепрессантов, независимо от механизма их действия активность животных возрастает и время неподвижности (иммобилизации) уменьшается.

В настоящем эксперименте в качестве препарата сравнения использовали антидепрессант с активирующим компонентом действия пиразидол в стандартной дозе 25 мг/кг, который вводили внутрибрюшинно за 30 мин до тестирования.

В эксперименте участвовали 4 группы животных.

1. Контрольная группа (1%-й крахмал – внутрь, физраствор – в/б).

2. Группа сравнения 1 (1%-й крахмал – внутрь, пиразидол – в/б).

3. Группа сравнения 2 (БЭС – внутрь, физраствор – в/б).

4. Опытная группа (БЭС – внутрь, пиразидол – в/б).

Тест «двигательная активность»

Возможность влияния 50 мг/кг БЭС на гиперактивность, вызываемую подобранными дозами фенамина (1 мг/кг, в/б) и апоморфина (1 мг/кг, в/б) оценивали по изменению двигательной активности мышей в специальной актометрической установке «Ugo Basile» (Италия), регистрирующей горизонтальные перемещения животных. Усиление локомоций связывают с активацией под влиянием стимуляторов дофаминергической активности в мезолимбической и экстрапирамидной системах мозга. Регистрировали перемещения в условных единицах за 2 пятиминутных периода в отдельности и суммарно.

В эксперименте участвовали 6 групп животных (N=8-10).

1. Группа 1 (1%-й крахмал – внутрь, физраствор – в/б).

2. Группа 2 (БЭС – внутрь, физраствор – в/б).

3. Группа 3 (1%-й крахмал – внутрь, фенамин – в/б).

4. Группа 4 (1%-й крахмал – внутрь, апоморфин – в/б),

5. Группа 5 (БЭС – внутрь, фенамин – в/б).

6. Группа 6 (БЭС – внутрь, апоморфин – в/б).

Обычно усиливают эффект фенамина препараты с антидепрессантной активностью. На гиперактивацию, вызываемую апоморфином, разные антидепрессанты влияют по-разному, в зависимости от механизма действия и доз психостимулятора.

Влияние на обучаемость в методике условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ).

Тест является базисной моделью для оценки влияния веществ на формирование и воспроизведение памятного следа в норме и в условиях его нарушения (амнезии). Основными преимуществами этой методики является быстрота выработки рефлекса (обучение с одной пробы) и возможность дифференцированно воздействовать на различные фазы памяти.

Выработку условного рефлекса избегания проводили с помощью электрокожного раздражения в специальной двухкамерной установке с электрическим полом «Ugo Basile» (Италия). Подбор параметров раздражения осуществляли экспериментальным способом. Проверку сохранения рефлекса избегания проводили через 24 и 48 часов после обучения. «Поломку» рефлекса (амнезию) вызывали введением подобранной экспериментально дозы скополамина сразу после сеанса обучения животного.

Регистрировали продолжительность латентного периода первого захода в опасный отсек, количество заходов и время пребывания в нем.

В эксперименте участвовали 6 групп животных (N=8-10).

1. Группа 1 (плацебо – внутрь за 90 мин до обучения, физраствор – в/б сразу после обучения).

2. Группа 3 (БЭС, 25 мг/кг – внутрь за 90 мин до обучения, физраствор – сразу после обучения в/б).

3. Группа 4 (БЭС, 50 мг/кг – внутрь за 90 мин до обучения, физраствор – в/б сразу после обучения).

4. Группа 2 (плацебо – внутрь за 90 мин до обучения, скополамин – в/б сразу после обучения).

5. Группа 5 (БЭС (25) – внутрь за 90 мин до обучения, скополамин – в/б сразу после обучения).

6. Группа 6 (БЭС (50) – внутрь за 90 мин до обучения, скополамин – в/б сразу после обучения).

Для веществ с ноотропным действием характерно устранение скополаминовой амнезии, что характеризуется увеличением латентного периода захода в опасный отсек камеры и уменьшением времени пребывания в нем при воспроизведении УРПИ.

Далее представлены результаты исследования с использованием указанных тестов.

4.1. Изучение поведения мышей линии C57BI в тесте «отчаяния» через 2 часа после однократного введения БЭС внутрь в дозе 25 мг/кг. Данные эксперимента (Таблица 1, фиг.7) свидетельствуют, что БЭС в дозе 25 мг/кг (группа 3) несколько увеличивает (+16%), а антидепрессант пиразидол (группа 2) снижает (-22%) продолжительность иммобильности в тесте, однако эти результаты не относятся к статистически значимым.

В то же время введение пиразидола на фоне БЭС приводит к существенному уменьшению (-58% к контролю и -46% относительно эффекта пиразидола) времени иммобильности животных в тесте (Табл.1, фиг.7):

Следовательно, данная доза БЭС почти вдвое усиливает антииммобилизационный эффект антидепрессанта пиразидола.

Наоборот, показатели длительности плавания у бортика под влиянием пиразидола возрастали на 24% относительно контроля (группы 1), сам БЭС не увеличивал продолжительность активного противодействия стрессовой ситуации на этот параметр, но вдвое потенцировал активирующий эффект пиразидола (+55% относительно группы 1 и +25% относительно группы 2) (Табл.2, фиг.7) на фоне предварительного введения.

Представленные данные свидетельствуют об активирующем влиянии БЭС на эффект Пиразидола, выраженном в увеличении периода пребывания животных в активных попытках выбраться из воды.

Таким образом, БЭС проявляет свойства положительного модулятора эффекта Пиразидола по двум основным параметрам теста на выявление антидепрессантной активности.

4.2. Изучение влияния БЭС (50 мг/кг), фенамина (1 мг/кг), апоморфина (1 мг/кг) и их комбинаций на двигательную активность мышей линии C57BI.

В данном тесте сравнивались эффекты БЭС, фенамина, апоморфина и их парных комбинаций на двигательную активность животных. Регистрировали горизонтальную активность мышей в течение двух последовательных 5-минутных периодов, а также их суммы.

Установлено, что основные различия в эффектах проявляются в течение первой пятиминутки (Таблица 3), что находит отражение и в результатах регистрации суммарной активности (Таблица 4).

Данные указывают, что введение БЭС отражается в статистически значимом возрастании горизонтальных перемещений мышей на 21% относительно контроля, что соответствует стимулирующему эффекту апоморфина (+25%). Фенамин также проявляет тенденцию к двигательной активации (+17% при 0,05<р<0,1). Однако на фоне введения БЭС его эффект сохраняется (+14%), в то время как действие апоморфина не проявляется вовсе.

Количества перемещений за десятиминутный интервал сохраняют основные различия в действии испытуемых препаратов, хотя и в меньшей степени выраженности.

Представленные данные демонстрируют способность БЭС увеличивать двигательную активность мышей, количественно сравнимую с эффективностью препаратов сравнения. Однако отсутствие кумулятивного эффекта может свидетельствовать о различии в механизмах их осуществления между БЭС, с одной стороны, и фенамином и апоморфином – с другой.

5. Изучение влияния БЭС в дозах 25 и 50 мг/кг на обучаемость в тесте условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ).

Данный стандартный тест был использован для уточнения предположений о наличии у БЭС ноотропных свойств, возникших по результатам изучения действия препарата на поведение мышей в крестообразном лабиринте.

Представленные на фиг.8, 9, 10 данные подтверждают сделанные ранее полученные данные о влиянии БЭС на условно-рефлекторный компонент поведения животных.

Так фиг.8 демонстрирует, что наказание вызывает увеличение латентного периода захода в темную камеру как через 24 ч, так и через 48 ч по сравнению с 1-м заходом, который происходил до наказания (F(1,77)=14,75, p<0,001).

Введение вызывающего амнезию Скополамина сразу после наказания вызывает укорочение латентного периода захода в темную камеру через 24 ч после наказания по сравнению с физраствором (F(1,77)=4,94, р=0,029).

Предварительное введение БЭС в дозах 25 и 50 мг/кг в сочетании со Скополамином противодействует эффекту Скополамина (вызывает увеличение латентного периода захода в темную камеру через 24 ч после наказания) по сравнению с группой, получавшей Скополамин на фоне плацебо (F(1,77)=5,07, р=0,027).

О той же направленности эффекта БЭС свидетельствуют данные, представленные на фиг.9: введение Скополамина сразу после наказания вызывает укорочение общего времени пребывания в светлой камере через 24 и 48 ч после наказания по сравнению с физраствором (F(1,77)=43,01, р<0,001).

Предварительное введение БЭСа в дозах 25 и 50 мг/кг в сочетании со Скополамином противодействует и этому эффекту Скополамина, вызывая увеличение общего времени пребывания в светлой камере через 24 и 48 ч после наказания по сравнению с группой, получавшей Скополамин плюс плацебо (F(1,77)=11,20, p=0,001).

Третий регистрируемый параметр – количество заходов в темную камеру изменениям под влиянием препаратов не подвергался (фиг.10).

Проведенные эксперименты показали наличие у БЭС ноотропной, тимолептической и локомоторной активности, представленных в оригинальном сочетании. Преобладающим среди них компонентом на основе полученных результатов следует признать ноотропный. Действительно, в тесте поведения «отчаяния» по Порсолту БЭС не проявил самостоятельной активности по отношению к основным показателям – времени иммобилизации и времени активных попыток. Вместе с тем БЭС существенно улучшал действие препарата сравнения – пиразидола, в механизме действия которого доминирует блокада МАО А и захвата серотонина и норадреналина. Считается что для истинно ноотропных препаратов класса рацетамов эти эффекты нехарактерны. Однако оптимизация ими функционирования нейромедиаторных систем, напротив, признается.

Во-вторых, действие БЭС на локомоторную активность сравнимо с эффектами психоаналептика фенамина лишь количественно, так как отсутствие кумуляции при совместном их введении указывает на различные механизмы осуществления их эффектов. Важным подтверждением этого является видимое отсутствие у БЭС синдрома отдачи, характерного для фенаминоподобных психоаналептиков. Напротив, после введения БЭС со временем усиливается выраженность устойчивого тимолептического эффекта.

В-третьих, в спектре фармакологического действия пиразидола, препарата с выраженной антидепрессивной активностью, присутствует эффект потенцирования действия фенамина, оказавшийся нехарактерным для БЭС.

В-четвертых, при изучении влияния БЭС на условные рефлексы в тесте УРПИ на модели скополаминовой амнезии были получены наиболее убедительные данные, свидетельствующие о наличии у препарата ноотропной активности. Действительно память о наказании в виде электрокожного раздражения сохранялась и через 24, и через 48 ч наблюдения у мышей и с плацебо и с БЭС (25 мг/кг), тогда как защитное действие БЭС против скополамина обнаруживалось через сутки у обеих доз экстракта с высокой степенью статистической достоверности: Р=0,027 по параметру «величина латентного периода первого захода в опасную камеру» и Р=0,001 по параметру «общее время пребывания в светлой камере».

Формула изобретения

Применение экстракта бересты в качестве ноотропного средства.

РИСУНКИ