|
|
(21), (22) Заявка: 2006123357/15, 03.07.2006
(24) Дата начала отсчета срока действия патента:
03.07.2006
(46) Опубликовано: 27.05.2007
(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске:
МАЙБОРОДИН И.В. «Лимфоидные органы при воздействии интерферона», Автореф. канд. дисс., Новосибирск, 1992. FLEISCHMANN WR JR et al. “Modulation of peripheral leukocyte counts in mice by oral administration of interferons”, Proc Soc Exp Biol Med., 1991, Sep; 197(4), p.424-430. KOREN S. et al. “Orally administered interferons suppress bone marrow
Адрес для переписки:
119607, Москва, ул. Лобачевского, 100, корп.2, кв.568, И.Ю.Давыдкину
|
(72) Автор(ы):
Рыбкин Владимир Семёнович (RU),
Алёшкин Владимир Андрианович (RU),
Афанасьев Станислав Степанович (RU),
Сентюрова Людмила Георгиевна (RU),
Галимзянов Халил Мингалиевич (RU),
Рубальский Олег Васильевич (RU),
Косарева Вероника Павловна (RU),
Давыдкин Валерий Юрьевич (RU),
Давыдкин Игорь Юрьевич (RU),
Пичугина Наталья Александровна (RU),
Рубальский Евгений Олегович (RU)
(73) Патентообладатель(и):
Федеральное государственное учреждение науки “Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.Н. Габричевского Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека” (ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора) (RU),
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования “Астраханская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию” (ГОУ ВПО АГМА Росздрава) (RU)
|
(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИМФАДЕНОТРОПНОГО ДЕЙСТВИЯ ПРЕПАРАТА РЕКОМБИНАНТНОГО ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ИНТЕРФЕРОНА- 2
(57) Реферат:
Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использовано при определении лимфаденотропного действия препарата рекомбинантного человеческого интерферона-2. Сущность изобретения состоит в том, что в ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводят глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-2 в нетоксичной дозе, через 30-60 минут одновременно забивают опытную мышь и интактную мышь, готовят криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей, в подобных гистологических срезах ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей определяют интерферон-2 методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа, тканевые базофилы, окрашенные по Романовскому-Гимзе, сравнивая интенсивность специфического свечения и число тканевых базофилов определяют лимфоаденотропное действие препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2. Техническим результатом является разработка способа, позволяющего установить наличие лимфоаденотропного действия препарата рекомбинантного человеческого интерферона-2.
(56) (продолжение):
CLASS=”b560m”function”, Proc Soc Exp Biol Med, 1993, Nov; 204(2), p.155-164. GIMBLE JM et al. “Modulation of lymphohematopoiesis in long-term cultures by gamma interferon: direct and indirect action on lymphoid and stromal cells”, Exp. Hematol., 1993, Feb; 21(2), p.224-230.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано при определении лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2.
Известен способ определения лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2 на основе обнаружения в лимфатических узлах увеличения количества клеток, объема мякотных тяжей и лимфоидных узелков, сокращения объема краевого синуса, уменьшения объема цитоплазмы, численности свободных и прикрепленных рибосом, объема, количества и суммарной длины профиля среза внутренней мембраны митохондрий, появления эритроцитов, увеличения численности зрелых плазмоцитов, нейтрофилов и тучных клеток (Майбородин И.В. Лимфоидные органы при воздействии интерферона. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. – Новосибирск, 1992. – 16 с.).
Недостатками известного прототипа является то, что:
– отсутствует критерий прямого лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2;
– используется большой перечень критериев лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2 и не определены наиболее информативные из них, что увеличивает трудозатраты при определении лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2.
В основу изобретения положена задача обеспечения информативной, нетрудоемкой регистрации прямого лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2.
Задача решена тем, что согласно заявляемому способу в ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводят глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-2 в нетоксичной дозе, через 30-60 минут одновременно забивают опытную мышь и интактную мышь, готовят криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей, в подобных гистологических срезах ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей определяют интерферон-2 методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа, тканевые базофилы, окрашенные по Романовскому-Гимзе, сравнивая интенсивность специфического свечения и число тканевых базофилов, и устанавливают:
при отсутствии в подобных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной мыши усиления специфического свечения и при отсутствии тканевых базофилов – отсутствие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-2, и прекращают исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2;
при наличии в подобных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной мыши усиления специфического свечения и при появлении тканевых базофилов – наличие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-2 и продолжают исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2.
В результате проведенных нами исследований были выбраны наиболее чувствительные к лимфаденотропному действию препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2 животные – мыши линии BALB/c; установлена необходимость использования нетоксичной для выбранных чувствительных животных дозы глицериносодержащего раствора рекомбинатного человеческого интерферона-2; определено время забоя опытной и интактной мышей; определено сочетание двух критериев, обеспечивающих у выбранных чувствительных животных информативную, нетрудоемкую регистрацию прямого лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2, а именно сравнительного определения в идентичных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей интенсивности специфического свечения при определении интерферона-2 методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа и числа тканевых базофилов.
Сущность изобретения поясняется на следующих примерах, показывающих обеспечение информативной, нетрудоемкой регистрации прямого лимфаденотропного действия препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2 при использовании заявляемого способа.
Пример 1. В ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводили глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-2 в нетоксичной дозе 20 ME. Через 30 минут одновременно забивали опытную мышь и интактную мышь, готовили криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей. В криостатных срезах методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа определяли интерферон-2 .В парафиновых срезах, окрашенных по Романовскому-Гимза, определяли тканевые базофилы. Сравнительный просмотр подобных участков срезов ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей выявил отсутствие усиления специфического свечения и отсутствие тканевых базофилов, поэтому было установлено отсутствие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-2, и были прекращены исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2.
Пример 2. В ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводили глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-2 в нетоксичной дозе 100 ME. Через 45 минут одновременно забивали опытную мышь и интактную мышь, готовили криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей. В криостатных срезах методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа определяли интерферон-. В парафиновых срезах, окрашенных по Романовскому-Гимза, определяли тканевые базофилы. Сравнительный просмотр подобных участков срезов ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей выявил наличие усиления специфического свечения и появление тканевых базофилов, поэтому было установлено наличие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-2, и были продолжены исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2.
Пример 3. В ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводили глицериносодержащий раствор рекомбинатного человеческого интерферона-2 в нетоксичной дозе 500 ME. Через 60 минут одновременно забивали опытную мышь и интактную мышь, готовили криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей. В криостатных срезах методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа определяли интерферон-2. В парафиновых срезах, окрашенных по Романовскому-Гимза, определяли тканевые базофилы. Сравнительный просмотр подобных участков срезов ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей выявил наличие усиления специфического свечения и появление тканевых базофилов, поэтому было установлено наличие прямого лимфаденотропного действия рекомбинатного человеческого интерферона-2, и были продолжены исследования препарата рекомбинатного человеческого интерферона-2.
Формула изобретения
Способ определения лимфаденотропного действия рекомбинантного человеческого интерферона-2 на основании оценки морфофункционального состояния лимфоидной ткани, отличающийся тем, что в ротовую полость опытной инбредной мыши BALB/c однократно вводят глицериносодержащий раствор рекомбинантного человеческого интерферона-2 в нетоксичной дозе, через 30-60 мин одновременно забивают опытную мышь и интактную мышь, готовят криостатные и парафиновые гистологические срезы ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей, в подобных гистологических срезах ткани лимфатических узлов опытной и интактной мышей определяют интерферон-2 методом непрямого иммунофлюоресцентного анализа, тканевые базофилы, окрашенные по Романовскому-Гимзе, сравнивая интенсивность специфического свечения и число тканевых базофилов, и устанавливают:
при отсутствии в подобных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной мыши усиления специфического свечения и при отсутствии тканевых базофилов – отсутствие прямого лимфаденотропного действия рекомбинантного человеческого интерферона-2 и прекращают исследования препарата рекомбинантного человеческого интерферона-2;
при наличии в подобных участках гистологических срезов ткани лимфатических узлов опытной мыши усиления специфического свечения и при появлении тканевых базофилов – наличие прямого лимфаденотропного действия рекомбинантного человеческого интерферона-2 и продолжают исследования препарата рекомбинантного человеческого интерферона-2.
|
|
