Патент на изобретение №2298188

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ НЕБЛАГОПРИЯТНОГО ТЕЧЕНИЯ УВЕИТОВ

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и предназначено для прогнозирования неблагоприятного течения увеитов. В смешанную культуру лейкоцитов периферической крови больного увеитом в начале культивирования вносят инактивированный вирус простого герпеса (ВПГ). Через 24 часа от начала культивирования в супернатанте определяют содержание фактора некроза опухоли – альфа (ФНО-) и интерлейкина 4 (ИЛ-4). При содержании ФНО- более 200 пкг/мл и отсутствии ИЛ-4 прогнозируют неблагоприятное течение увеита. Использование способа позволяет осуществлять доклиническое прогнозирование рецидива заболевания при обследовании пациента в период ремиссии, прогнозирование тяжелого, затяжного процесса при обследовании в период обострения, что дает возможность повысить эффективность проводящегося лечения и его своевременной коррекции.

(56) (продолжение):

CLASS=”b560m”phenotype and activation status in intermediate uveitis. Br. J. Ophthalmol. 2004, 88(3), p.412-416, реф., PMID: 14977779, [он-лайн], [найдено 28.04.2006], найдено из базы данных PubMed.

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и предназначено для прогнозирования неблагоприятного течения заболевания у больных увеитами. Под неблагоприятным течением увеита подразумевается длительный хронический или часто рецидивирующий воспалительный процесс.

Увеиты являются одной из наиболее тяжелых форм воспалительных заболеваний глаз, встречающейся у 3-5% населения. Хроническое, часторецидивирующее течение увеита часто сопровождается развитием осложнений и приводит к тяжелым нарушениям зрительных функций, вплоть до слабовидения и слепоты (Катаргина Л.А., Хватова А.В. Эндогенные увеиты у детей и подростков. – М.: – Медицина. – 2000 г.).

Известен способ, основанный на выявлении аутоиммунных реакций к антигенам тканей глаза. Определяют клеточный или гуморальный иммунный ответ на антигены увеапигментной ткани, хрусталика, сетчатки в РПГА и РТМЛ (О.С.Слепова. Органоспецифический аутоиммунитет при воспалительной патологии сетчатки и увеального тракта (патогенез, диагностика, обоснование терапии). Дисс. докт. биол. наук. – М. – 1991. – 407 с.). Однако данные показатели выявляются лишь в 42-75%; кроме того, они наиболее информативны при обследовании пациента в динамике; однократное исследование часто бывает недостаточным, что существенно ограничивает информативность данного способа.

Ближайшим аналогом предлагаемого изобретения является способ того же назначения, включающий выявление повышенного уровня провоспалительных цитокинов, прежде всего – фактора некроза опухоли – альфа (ФНО-), в сыворотке крови больных с воспалительной офтальмопатологией (Слепова О.С., Герасименко В.А., Макаров П.В., Кушнир В.Н. и др. Сравнительное исследование роли цитокинов при разных формах глазных заболеваний. Сообщение 1. Фактор некроза опухоли – альфа. Вестник офтальмологии. – 1998. – №3. – с.28-32). Однако по результатам исследования сыворотки крови этот показатель информативен лишь в 60% случаев.

Задачей изобретения является разработка такого способа прогнозирования неблагоприятного течения увеита, информативность которого будет существенно выше. С этой целью предлагается определение соотношения уровней про- и противовоспалительных цитокинов ФНО- и интерлейкина-4 (ИЛ-4) в суточном супернатанте смешанной культуры лейкоцитов периферической крови, в которую в начале культивирования вносят инактивированный вирус простого герпеса (ВПГ).

В настоящее время увеиты рассматриваются как заболевание инфекционной, аутоиммунной или смешанной инфекционно-аутоиммунной природы. Причем основной предпосылкой возникновения и неблагоприятного течения увеита считаются предсуществующие, фоновые нарушения иммунитета, причина которых часто остается неясной.

Известно, что нарушение баланса про- и противовоспалительных цитокинов – патогенетически неблагоприятный фактор, обусловливающий периодические обострения и/или затяжное течение увеитов.

ФНО- является одним из ключевых медиаторов воспаления и обладает выраженным увеитогенным эффектом. Данные о патогенетической роли ИЛ-4 в развитии увеитов достаточно противоречивы, однако, этот медиатор, продуцируемый Th-2-лимфоцитами, традиционно относят к антагонистам провоспалительных цитокинов.

Значение собственно инфекционных (этиологических или сопутствующих) факторов, в том числе вируса простого герпеса, в развитии и поддержании иммунологического дисбаланса у больных увеитами остается неисследованным. Вместе с тем, в литературе имеются данные, свидетельствующие об отягощающем влиянии герпес-вирусной инфекции на течение увеита, независимо от этиологии последнего (Анджелов В.О, Кричевская Г.И., Катаргина Л.А. и др. Диагностика и значение оппортунистической герпес-вирусной инфекции в этиопатогенезе различных заболеваний глаз. Вестник Российской Академии медицинских наук. – М.: – Медицина. – 2003. – №5. – с.21-23).

При разработке данного способа мы базировались на известной способности белых клеток крови в процессе культивирования in vitro продуцировать некоторые цитокины, в том числе регулирующие воспаление. Исходя из того, что антигенное воздействие может изменить выработку этих иммуномедиаторов, считали вполне обоснованным использование в качестве стимулирующего фактора антигена ВПГ. Учитывая, что in vivo, в организме больного человека, особое значение имеют ранние, пусковые факторы иммунопатологических реакций, считали необходимым вносить вирусный антиген в культуру клеток крови сразу в начале культивирования.

Были обследованы 30 чел. в возрасте от 8 до 50 лет с различными клиническими формами увеитов (иридоциклиты, ПУ, хориоретиниты, панувеиты); 16 чел. – в стадию активности увеита, 14 чел. – в стадию ремиссии. Длительность заболевания составляла от 1 до 5 лет.

В ходе предварительных исследований были получены данные, подтверждающие факт изменения характера продукции цитокинов лейкоцитами периферической крови человека под антигенным воздействием ВПГ. Установлено, что во взятых через 24 ч от начала культивирования супернатантах смешанной культуры лейкоцитов периферической крови, в которую в начале культивирования вносили ВПГ, ФНО- определяется в 100% случаев.

Техническим результатом предлагаемого способа является более надежное и качественное прогнозирование неблагоприятного течения увеита: доклиническое прогнозирование рецидива заболевания при обследовании пациента в период ремиссии или прогнозирование тяжелого, затяжного процесса при обследовании в период обострения, что является важным для выбора соответствующей тактики лечения.

Технический результат достигается за счет определения баланса патогенетически значимых для увеита цитокинов – ФНО- и ИЛ-4 в суточном супернатанте смешанной культуры лейкоцитов периферической крови, в которую в начале культивирования вносят инактивированный ВПГ. Содержание ФНО- более 200 пкг/мл при отсутствии ИЛ-4 свидетельствует о неблагоприятном течении увеита.

Способ осуществляется следующим образом.

Объектом иммунологического исследования служит супернатант суточной культуры лейкоцитарных клеток периферической крови больных, в которую в начале культивирования вносят инактивированный ВПГ. Для получения 3-х мл культуры достаточно 5 мл гепаринизированной венозной крови. Антиген ВПГ добавляется в культуру в количестве 0,3 мл.

Для определения концентрации ФНО- и ИЛ-4 используется иммуноферментный анализ (например, коммерческие тест-системы производства ООО «Протеиновый контур», С.-Петербург, или аналогичные; чувствительность тест-систем – от 40 пкг/мл – для ФНО-, от 20 пкг/мл – для ИЛ-4). Постановка реакции осуществляется традиционным способом согласно инструкции фирмы-производителя.

В случаях обследования больных в период активности увеита при содержании ФНО- в супернатанте более 200 пкг/мл и отсутствии ИЛ-4 прогнозируют затяжное, тяжелое течение процесса, плохо поддающееся традиционной терапии. При обследовании в период ремиссии выявление такого дисбаланса позволяет прогнозировать обострение увеита.

Следующие клинические примеры иллюстрируют возможность прогнозирования характера течения заболевания у больных увеитами предлагаемым способом.

Пример №1. Больной Б., 18 лет.

DS: OU – периферический увеит неясной этиологии, OD – артифакия.

На момент иммунологического обследования: OD – обострение, OS – ремиссия. В супернатанте суточной культуры лейкоцитарных клеток периферической крови, стимулированной ВПГ, – уровень ФНО- – 220 пкг/мл, ИЛ-4 не определяется, в связи с чем прогнозировали неблагоприятное течение увеита: затяжной процесс на OD, вероятный рецидив на OS.

На протяжении последующих 2-х лет, несмотря на постоянно проводимую противовоспалительную терапию (кортикостероиды (КС) местно, неспецифические противовоспалительные препараты – НПВП), отмечался длительный вялотекущий воспалительный процесс в OD и эпизоды обострения увеита OS, нарастание фиброзных изменений стекловидного тела OS.

Пример №2. Больная П., 26 лет.

DS на момент иммунологического обследования: OD – периферический увеит неясной этиологии, обострение; OS – здоров.

В суточном супернатанте культуры лейкоцитарных клеток периферической крови, стимулированной ВПГ, содержание ФНО- – 500 пкг/мл, ИЛ-4 не определяется, в связи с чем прогнозировали неблагоприятное, затяжное течение увеита.

В течение 4-х мес, несмотря на проводимое противовоспалительное лечение (КС местно, НПВП), сохранялась активность воспалительного процесса на OD. Через 4 месяца отмечено развитие увеита OS. На протяжение последующих 2-х лет на фоне постоянно проводимой противовоспалительной терапии (КС местно в виде инстилляций и парабульбарных инъекций, НПВП) наблюдалось непрерывно рецидивирующее течение увеита OU, с образованием поствоспалительных шварт в стекловидном теле и значительным снижением остроты зрения.

Пример №3. Больная Б., 15 лет.

DS: OU – энтеровирусный увеит, вторичная глаукома.

На момент иммунологического обследования – OU – ремиссия. В суточном супернатанте культуры лейкоцитарных клеток периферической крови, стимулированной ВПГ, содержание ФНО- – 50 пкг/мл, ИЛ-4 – 25 пкг/мл, в связи с чем рецидив заболевания в ближайшие месяцы представлялся маловероятным.

В течение последующих 1,5 лет обострений заболевания не отмечалось.

Таким образом, выявление дисбаланса провоспалительного ФНО- и противовоспалительного ИЛ-4 при исследовании их продукции в суточном супернатанте смешанной культуры лейкоцитов периферической крови, в которую в начале культивирования вносят инактивированный ВПГ, позволяет прогнозировать неблагоприятное течения увеита: доклиническое прогнозирование рецидива заболевания при обследовании пациента в период ремиссии или прогнозирование тяжелого, затяжного процесса при обследовании в период обострения, что является важным для своевременного назначения интенсивной противовоспалительной терапии или оценки эффективности проводящегося лечения и его своевременной коррекции. Существенным преимуществом способа является возможность однократного обследования больного и повышение информативности теста за счет значительного увеличения частоты выявления провоспалительного ФНО- в супернатанте культуры лейкоцитарных клеток периферической крови по сравнению с сывороткой крови.

Формула изобретения

Способ прогнозирования неблагоприятного течения увеитов, отличающийся тем, что в смешанную культуру лейкоцитов периферической крови в начале культивирования вносят инактивированный вирус простого герпеса (ВПГ), через 24 часа от начала культивирования в супернатанте определяют содержание фактора некроза опухоли – альфа (ФНО-) и интерлейкина-4 (ИЛ-4) и при содержании ФНО- более 200 пкг/мл и отсутствии ИЛ-4 прогнозируют неблагоприятное течение увеита.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 20.09.2007

Извещение опубликовано: 20.05.2009 БИ: 14/2009