Патент на изобретение №2297631
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ НЕБНЫХ МИНДАЛИН У БОЛЬНЫХ ПАРАТОНЗИЛЛИТОМ
(57) Реферат:
Изобретение относится к области медицины, а именно к оториноларингологии и иммунологии. Заявителем предложен способ оценки функционального состояния иммунной системы небных миндалин у больных паратонзиллитом, в котором в ткани небных миндалин у больных паратонзиллитом выявляют вирус Эпштейна-Барр и определяют содержание имуноглобулина класса G в слюне. При обнаружении в биоптате вируса Эпштейна-Барр и содержании IgG менее 20 мкг/мл определяют функциональную несостоятельность иммунной системы небных миндалин. Применение изобретения повышает точность оценки. 1 табл.
(56) (продолжение): Изобретение относится к области медицины, а именно к оториноларингологии и иммунологии, и может быть использовано для оценки функционального состояния иммунной системы небных миндалин больных паратонзиллитом. Известны способы оценки и прогнозирования состояния местного иммунитета небных миндалин при паратонзиллите по определению представительства иммунокомпетентных клеток в ткани небных миндалин с использованием иммуноморфологических методов (Быкова В.П. Современные аспекты проблемы тонзиллярной болезни. – Российская ринология, №2-3, 1996. – С.13-14). Прототипом данного изобретения является оценка состояния иммунной системы небных миндалин путем определения клеточного представительства иммунокомпетентных клеток в биопсийном материале (Иммунология, иммунопатология и проблемы иммунотерапии в ринологии. / Под ред. Н.А.Арефьевой. – Уфа, 1997. – 120 с.). Однако в данном способе не учитывались инфицированность небных миндалин возбудителями оппортунистических инфекций, в частности герпесвирусами, что не позволяет в достаточной степени оценить функциональное состояние иммунной системы небных миндалин. Технический результат – повышение точности оценки за счет определения инфицированности герпесвирусами ткани небных миндалин. Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. У больных паратонзиллитом в биопсийном материале небных миндалин выявляют ДНК герпесвирусов – цитомегаловируса, вируса простого герпеса, вируса Эпштейна-Барр (ЦМВ, ВПГ, ВЭБ) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и исследуют содержание иммуноглобулина класса G в слюне. Для этого биопсийный материал небных миндалин объемом 2 мм3 берут утром натощак окончатым зажимом после предварительной местной анестезии Sol. Lidocaini 10%, погружают в буферный раствор и замораживают при -86°С до проведения ПЦР. Слюну забирают утром, через час после еды. Ротовую полость ополаскивают дистиллированной водой, через 10 минут слюну собирают в чистый флакон в объеме 1,0-2,0 мл, центрифугируют 10 минут при 1500 об/мин, надосадочную жидкость замораживают при -86°С до проведения исследования. Количественное определение иммуноглобулинов классов SIgA, G, A, M в слюне проводят иммуноферментным методом (тест-системы «Вектор-Бест», Новосибирская обл.). Под нашим наблюдением находились 32 больных паратонзиллитом. В качестве контрольной группы выступали 27 практически здоровых лиц. У больных паратонзиллитом в ткани небных миндалин была обнаружена высокая выявляемость герпесвирусов – 71,88%. Из них в большинстве своем они были представлены вирусом Эпштейна-Барр либо в виде моноинфекции (73,9%), либо в сочетании с вирусом простого герпеса (ВПГ) или цитомегаловирусом (ЦМВ) (13,1%). Оценку показателей исследования клеточного и гуморального звеньев местного иммунитета проводили по данным фенотипирования лимфоцитов, выделенных из биопсийного материала небных миндалин, по кластерам дифференцировки (CD3, CD4, CD8, CD22, CD16, HLA-DR, CD25 и CD71), количественного определения в слюне иммуноглобулинов SIgA, IgA, IgG, IgM иммуноферментным методом и расчетов показателей секреции иммуноглобулинов на местном уровне – относительные коэффициенты секреции – ОКС. Были выявлены три типа реагирования иммунной системы небных миндалин в ответ на гнойно-воспалительный процесс. Полученные данные представлены в таблице. Для больных паратонзиллитом без персистенции вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ) был характерен 1 тип, сопровождающийся ожидаемой активацией факторов защиты. Для больных с персистенцией ВЭБ – преимущественно 2 и 3 типы, сопровождающиеся дисбалансом иммунного реагирования. 1 тип реагирования характеризовался активацией клеточного и гуморального звеньев иммунной системы небных миндалин в виде Т-клеточной активации (CD4+, Р<0,05) и выраженной тенденцией к увеличению в слюне иммуноглобулинов класса A (SIgA – выше 550 мкг/мл, IgA – выше 95 мкг/мл) за счет повышения их родукции клетками небных миндалин (ОКС SIgA выше 65, IgA – выше 3.5). У больных с персистенцией ВЭБ подобная активация иммунной системы небных миндалин отмечалась лишь в единичных случаях (n=3; 14,3%). В большинстве случаев наблюдения у больных была выявлена либо гуморальная недостаточность на фоне активации клеточных факторов защиты (2 тип реагирования, n=14; 52,4%), либо комбинированная недостаточность в виде низких значений показателей как гуморального, так и клеточного звеньев иммунной системы небных миндалин, сопровождающаяся угнетением продукции иммуноглобулинов на местном уровне (3 тип реагирования, n=7; 33,3%). 2 тип реагирования характеризовался активацией Т-клеточного звена – отмечались статистически значимые повышенные значения CD3+, CD4+ и CD8+ лимфоцитов (соответственно Р<0,05, Р<0,001 и Р<0,05) и низкими показателями содержания в слюне иммуноглобулинов классов G и М (IgG – ниже 20 мкг/мл, IgM – ниже 2,5 мкг/мл) по-видимому за счет их активного потребления, так как показатели секреции IgG и IgM на местном уровне (ОКС) имели лишь тенденцию к снижению (ОКС IgG – ниже 0,11 и ОКС IgM – ниже 0,17). 3 тип реагирования характеризовался Т-клеточной недостаточностью – низкими значениями содержания в ткани небных миндалин Т-лимфоцитов (CD3+, Р<0,01), клеток с маркерами активации (CD25+ с Р<0,01 и HLA-DR+ с Р>0,05), низким содержанием иммуноглобулинов класса G – ниже 20 мкг/мл, и повышенными, возможно компенсаторно, показателями концентрации в слюне SIgA – выше 550 мкг/мл. Кроме того, показатели секреции иммуноглобулинов на местном уровне (ОКС) свидетельствовали о выраженном угнетении продукции IgG, IgA, IgM и SIgA небными миндалинами (ОКС IgG – ниже 0,11, ОКС IgA – ниже 2,0, ОКС IgM – ниже 0,17 и ОКС SIgA – ниже 40). В целом, в обеих группах больных паратонзиллитом, инфицированных ВЭБ, отмечались статистически достоверно низкие значения концентрации иммуноглобулинов класса G в слюне. Сочетание с недостаточностью клеточного звена иммунной системы небных миндалин (3 тип реагирования) сопровождалось угнетением продукции практически всех классов иммуноглобулинов на местном уровне. Для определения пороговых значениий содержания иммуноглобулина класса G в слюне использовалась формула расчета: М±2m, где М – средняя арифметическая величина, m – средняя ошибка средней арифметической (Н.Х.Шарафутдинова с соавт. Средние величины, методика их вычисления, оценка достоверности средних и относительных величин. Методические указания для самостоятельной работы студентов медицинского института и курсантов факультета усовершенствования врачей. – Уфа: БГМИ, 1994. – С.24). Таким образом, нижняя граница содержания иммуноглобулина класса G в слюне в группе практически здоровых лиц составляет М-2m=32,09-2·509=21,9 мкг/мл ( Таким образом, персистенция вируса Эпштейна-Барр в ткани небных миндалин является маркером иммунодефицитного состояния небных миндалин у больных паратонзиллитом, характеризующегося нарушением продукции иммуноглобулинов на местном уровне, особенно в отношении иммуноглобулинов класса G (содержание в слюне менее 20 мкг/мл), что необходимо учитывать при проведении лечебно-профилактических мероприятий). Пример 1 (без персистенции ВЭБ в ткани небных миндалин, 1 тип реагирования). Больной Абизгильдин И.З., 15 лет, история болезни №873, поступил в стационар 20.02.03 г. с диагнозом левосторонний передне-верхний паратонзиллярный абсцесс (ПТА), состояние средней тяжести, температура тела 38°С, частых ангин и сочетание ПТА с ангиной – не отмечает, рецидивов ПТА в анамнезе нет. В биопсийном материале небных миндалин ДНК герпесвирусов методом ПЦР не обнаружены. Показатели исследования лимфоцитов, выделенных из биопсийного материала небных миндалин, по данным фенотипирования: CD3-64% (выше нормы), CD4-47% (выше нормы), CD8-19%, CD22-9%, CD 16-6% (ниже нормы), HLA-DR-30%, CD25-8% (ниже нормы), CD71-7% (ниже нормы). Показатели исследования содержания иммуноглобулинов в смешанной слюне: SIgA – 1144,58 мкг/мл (выше нормы), IgA – 221,05 мкг/мл (выше нормы), IgG – 30,68 мкг/мл, IgM – 2,97 мкг/мл, внеклеточная пероксидазная активность – 2564 у.е. Показатели секреции иммуноглобулинов на местном уровне: ОКС SIgA – 143,90 (выше нормы), ОКС IgA – 4,65 (выше нормы), ОКС IgG – 0,17, ОКС IgM – 0,09. Заключение: функциональное состояние небных миндалин характеризуется активацией Т-клеточного звена иммунной системы, сопровождающейся повышенным уровнем в слюне IgA и IgM и концентрации IgG в пределах нормы за счет высокой продукции на местном уровне иммуноглобулинов класса А и G. Пример 2 (с персистенцией ВЭБ в ткани небных миндалин, 2 тип реагирования). Усманов И.Т., 17 лет, история болезни №1701, поступил в стационар 11.04.03 г. с диагнозом левосторонний передне-верхний паратонзиллярный абсцесс (ПТА), состояние удовлетворительное, температура тела 36,8°С, отмечает в анамнезе частые ангины. В биопсийном материале небных миндалин методом ПЦР были обнаружены ДНК вируса Эпштейна-Барр. Показатели исследования лимфоцитов, выделенных из биопсийного материала небных миндалин по данным фенотипирования: CD3-61% (выше нормы), CD4-50% (выше нормы), CD8-38% (выше нормы), CD22-41% (выше нормы), CD16-7%, HLA-DR-44%, CD25-37%, CD71-30% (выше нормы). Показатели исследования содержания иммуноглобулинов в смешанной слюне: SIgA – 273,3 мкг/мл (ниже нормы), IgA – 129,41 мкг/мл (выше нормы), IgG – 1,36 мкг/мл (ниже нормы), IgM – 1,3 мкг/мл (ниже нормы); внеклеточная пероксидазная активность – 922 у.е. Показатели секреции иммуноглобулинов на местном уровне: ОКС SIgA – 0,36 (ниже нормы), ОКС IgA – 12,54 (выше нормы), ОКС IgG – 0,009 (ниже нормы), ОКС IgM – 0,17 (ниже нормы). Заключение: функциональное состояние небных миндалин характеризуется персистенцией в ткани вируса Эпштейна-Барр, активацией клеточного звена иммунной системы, сопровождающейся повышенным уровнем в слюне IgA, но низким уровнем SIgA, IgG и IgM за счет низкой их продукции на местном уровне. Пример 3 (с персистенцией ВЭБ в ткани небных миндалин, 3 тип реагирования). Таран Т.Д., 36 лет, история болезни №2039, поступил в стационар 2.05.03 г. с диагнозом правосторонний передне-верхний паратонзиллярный абсцесс (ПТА) в сочетании с лакунарной ангиной, состояние удовлетворительное, температура тела 37,8°С. Частых ангин и сочетание ПТА с ангиной не отмечает, рецидивов ПТА в анамнезе нет. В биопсийном материале небных миндалин методом ПЦР были обнаружены ДНК вируса Эпштейна-Барр. Показатели исследования лимфоцитов, выделенных из биопсийного материала небных миндалин по данным фенотипирования: CD3-35% (ниже нормы), CD4-28%, CD8-8% (ниже нормы), CD22-15%, CD16-11%, HLA-DR-21% (ниже нормы), CD25-19% (ниже нормы), CD71-15%. Показатели исследования содержания иммуноглобулинов в смешанной слюне: SIgA – 675,21 мкг/мл (выше нормы), IgA – 114,91 мкг/мл (выше нормы), IgG – 12,42 мкг/мл (ниже нормы), IgM – 1,47 мкг/мл (ниже нормы); внеклеточная пероксидазная активность – 1313 у.е. Показатели секреции иммуноглобулинов на местном уровне: ОКС SIgA – 7,13 (ниже нормы), ОКС IgA – 0,3 (ниже нормы), ОКС IgG – 0,006 (ниже нормы), ОКС IgM – 0,007 (ниже нормы). Заключение: функциональное состояние небных миндалин характеризуется персистенцией в ткани вируса Эпштейна-Барр, угнетением Т-клеточного звена иммунной системы (CD3, CD8), процессов активации иммунной системы (HLA-DR, CD25 и CD71), сопровождающееся повышенным уровнем в слюне иммуноглобулинов класса А (SIgA и IgA), но низким уровнем IgG и IgM, отмечается низкая продукция на местном уровне практически всех классов иммуноглобулинов. Способ оценки функционального состояния иммунной системы небных миндалин у больных паратонзиллитом
Формула изобретения
Способ оценки функционального состояния иммунной системы небных миндалин у больных паратонзиллитом, отличающийся тем, что в ткани небных миндалин у больных паратонзиллитом выявляют вирус Эпштейна-Барр, определяют содержание имуноглобулина класса G в слюне и при обнаружении вируса Эпштейна-Барр и содержании IgG менее 20 мкг/мл определяют функциональную несостоятельность иммунной системы небных миндалин.
MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 17.06.2007
Извещение опубликовано: 27.01.2009 БИ: 03/2009
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
20 мкг/мл), что определено как пороговое значение содержания иммуноглобулина класса G в слюне.