Патент на изобретение №2292046

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СТРЕССОРНОЙ КАРДИОМИОПАТИИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области лабораторной диагностики, может быть использовано для ранней диагностики поражения сердца у спортсменов. Сущность способа состоит в том, что в сыворотке крови с помощью реакции торможения пассивной гемагглютинации определяют наличие кардиального антигена и при снижении титра антимиокардиальной тест-сыворотки в присутствии сыворотки исследуемого лица в два и более раза диагностируют стрессорную кардиомиопатию. Техническим результатом является выявление стрессорной кардиомиопатии на доклинических стадиях развития.

Предлагаемый способ относится к медицине, в частности к кардиологии, и может быть использован для ранней (доклинической) диагностики поражения сердца у спортсменов.

Наиболее частым поражением сердца у спортсменов является дистрофия миокарда вследствие физического перенапряжения (1, 2). В международной классификации болезней (до пересмотра) это заболевание носит название стрессорной кардиомиопатии, поэтому в последние годы в нашей стране вместо термина «дистрофия миокарда вследствие физического перенапряжения» стал использоваться термин «стрессорная кардиомиопатия» (3, 4). Использование этого термина оправдано также тем, что у больных имеет место не только физическое, но и нервное перенапряжение.

Основным методом выявления стрессорной кардиомиопатии является ЭКГ-исследование. О развитии дистрофического процесса в миокарде свидетельствуют изменения процесса реполяризации и появление нарушений ритма и проводимости. Эти изменения, как правило, сопровождаются снижением работоспособности. Вместе с тем, дистрофия миокарда может носить как диффузный, так и очаговый характер, поэтому в последнем случае изменения на ЭКГ могут отсутствовать.

Следовательно, основной недостаток ЭКГ диагностики состоит в том, что она не позволяет выявить ранние этапы развития стрессорной кардиомиопатии до возникновения изменений, регистрируемых на ЭКГ очаговых изменений.

В связи с вышесказанным, является оправданным поиск разных информативных критериев, свидетельствующих о развитии дистрофии миокарда, когда еще отсутствуют изменения на ЭКГ и не страдает работоспособность, то есть на доклинической стадии возникновения болезни. Такая ранняя диагностика дистрофии миокарда позволит своевременно проводить лечебно-профилактические мероприятия. Это, в свою очередь, дает возможность сохранить здоровье, высокую работоспособность и предупредить развитие заболевания.

Наиболее близким техническим решением к заявляемому способу является способ, описанный в работе Гавриловой Е.А. «Стрессорная кардиомиопатия у спортсменов: (дистрофия миокарда физического перенапряжения)». Автореф. Докт. Дисс., СПб., 2001.

Согласно этому способу одним из критериев диагностики стрессорной кардиомиопатии является выявление в сыворотке крови антител к антигену миокарда в реакции (РПГА) пассивной гемагглютинации.

Задачей, которую решает изобретение, является повышение результативности лечения стрессорной кардиомиопатии за счет выявления ее на доклинических стадиях развития.

Однако этот способ подтверждает наличие дистрофии миокарда на клинической стадии, но не позволяет выявить ее на доклинической стадии, когда нет изменений на ЭКГ, именно тогда нужно проводить профилактику, чтобы не развилась клиническая стадия: снизить объемы и интесивность тренировочной нагрузки и назначить препараты.

Указанная задача достигается за счет того, что в известном способе диагностики стрессорной кардиомиопатии путем серологического исследования сыворотки крови, в сыворотке крови определяют наличие кардиального антигена с помощью реакции торможения пассивной гемагглютинации и при снижении титра антимиокардиальной тест-сыворотки в присутствии сыворотки исследуемого лица в два и более раза диагностируют стрессорную кардиомиопатию.

Предлагаемый способ диагностики стрессорной кардиомиопатии основан на серологическом исследовании крови, при котором определяют наличие миокардиального антигена путем постановки реакции торможения пассивной гемагглютинации (РТПГА).

При его выполнении в сыворотке крови обследуемого (в случаях деструктивных процессов в миокарде) серологическим методом выявляют наличие антигена, присутствие и уровень которого свидетельствует о степени повреждения миокарда.

Способ основан на том, что антиген миокарда, который может присутствовать в крови при стрессорной кардиомиопатии, тормозит взаимодействие тест-антигена с антителами в реакции торможения пассивной гемагглютинации. При этом определяют снижение титра диагностической антитканевой сыворотки после инкубации с исследуемой сывороткой. В этих случаях снижение титра антисыворотки на одну ступень и более (например, с 1:160 до 1:80 и более) означает обнаружение в крови антигена и является признаком деструкции миокарда. Снижение титра тест-антисыворотки на 2 ступени и более позволяет оценить уровень выявляемого антигена и, следовательно, степень деструкции миокарда.

Присутствие в сыворотке крови антигенов миокарда говорит о наличии стрессорной кардиомиопатии даже в тех случаях, когда еще нет клинических проявлений заболевания, или они очень скудные, а также когда еще нет изменений на ЭКГ.

Предлагаемый способ доклинической диагностики стрессорной кардиомиопатии осуществляют следующим образом.

Проведение серологических исследований

1. Приготовление миокардиального антигена

Ткань миокарда от человека с 0 (I) группой крови, погибшего от случайной причины, используют в свежем виде или после хранения в замороженном состоянии.

Навеску ткани измельчают ножницами, помещают в марлевый мешочек, промывают в течение часа проточной водой. Промытую ткань тщательно размельчают в фарфоровой ступке с кварцевым песком, добавляют физиологический раствор, пропускают через один слой марли для удаления крупных частиц. Полученный материал отмывают 5 раз физиологическим раствором с помощью центрифугирования при 18-20 тыс. оборотов в 1 минуту. Полученный осадок смешивают с фосфатным буферным раствором (рН 7,2) и выдерживают при 4°С в течение суток. После этого жидкость центрифугируют 20 минут при 3000 об./мин, затем надосадок центрифугируют при 18 тыс.оборотов 30 минут при 4°С.

Надосадочную жидкость доводят до концентрации 2 мг белка в 1 мл и хранят в холодильнике с добавлением мертиолата в разведении 1:10000.

2. Получение антимиокардиальной тест-сыворотки с антителами к миокардиальному антигену

Кроликов весом не менее 2,5 кг иммунизируют антигеном из миокарда по следующей схеме. В подушечки задних лап кролика вводят смесь антигена с полным адъювантом Фрейнда в объеме 0,4 мл: 0,2 мл антигена, содержащего 2 мг белка в 1 мл + 0,2 мл адъюванта. Через 3 недели антиген в общей дозе 10 мг вводят непосредственно в увеличенные лимфатические узлы. Через 10 дней после последней иммунизации берут пробу крови, определяют в сыворотке титр антител. При титре 1:320 и выше производится забор крови, готовят сыворотку, которую прогревают при 37°С, разливают в стерильные ампулы, хранят при 4°С до употребления.

3. Подготовка сывороток обследованных лиц

Сыворотки крови больных инактивируют 30 минут при 56°С и истощают отмытыми эритроцитами барана: 0,5 мл сыворотки, 0,5 осадка эритроцитов, отмытых физиологическим раствором, содержащим 1% кроличьей сыворотки. Инкубация 2 часа при 37°С и 18-20 часов при 4°С. Надосадочную жидкость используют для постановки реакции.

4. Реакция пассивной гемагглютинации. Приготовление эритроцитов

Свежие, отмытые 3 раза физиологическим раствором эритроциты барана в концентрации 50% смешивают с равным объемом хлористого хрома (3,8×10 М, 1 мг/мл), приготовленного ex tempore, с добавлением 100 мкг/мл белка.

После 5-минутной инкубации при комнатной температуре взаимодействие останавливают, добавляя 20-50 объемов забуферного физиологического раствора и отмывают при центрифугировании 4 раза. После этого эритроциты ресуспендируют в физиологическом растворе, содержащем 1% нормальной кроличьей сыворотки, получая 0,5% взвеси эритроцитов.

5. Постановка реакции пассивной гемагглютинации (РПГА)

Реакцию ставят в планшетах. Испытуемые сыворотки больных разводят с коэффициентом 2 в лунках, содержащих по 0,05 мл 1% кроличьей сыворотки. Далее в лунки добавляют по 0,025 мл взвеси, нагруженных антигеном эритроцитов, инкубируют при 4°С 18-20 часов. Учитывают реакцию по агглютинации эритроцитов при отрицательных контролях: 1% кроличьей сыворотки или 1% кроличьей сыворотки + нормальной сыворотки человека.

6. Постановка реакции торможения пассивной гемагглютинации (РТПГА)

0,05 мл цельной испытуемой сыворотки крови человека добавляют в лунку, содержащую 0,05 мл антимиокардиальной тест-сыворотки, разведенной 1:10. Смесь выдерживают в течение 2-х часов при температуре 37°С, а затем 18-20 часов при 4°С. После этого сыворотку разводят коэффициентом 2, добавляют в каждую лунку нагруженные антигеном эритроциты, определяют конечное разведение, при котором произошла агглютинация, в сравнении с разведениями антимиокардиальной тест-сыворотки сыворотки, куда испытуемый материал не добавляли. Снижение титра антимиокардиальной тест-сыворотки на одну ступень (например, с 1:160 до 1:80) оценивают как вероятный показатель присутствия антигена поврежденного миокарда, снижение на 2-4 ступени – как показатели высокого содержания антигена миокарда, что говорит о наличии стрессорной кардиомиопатии.

В контрольных исследованиях снижение титра агглютинации на 1 ступень обеспечивало обнаружение 3 мкг белка антигена, на 2 ступени – 6 мкг, на 4 ступени – 12 мкг белка антигена.

Клинический пример.

Пациент К. История болезни №_____.

Профессиональный спортсмен, мастер спорта международного класса, 18 лет. Обратился в центр спортивной медицины с жалобой на снижение толерантности к физической нагрузке, уменьшились спортивные результаты, других жалоб нет.

По данным клинического осмотра объективные признаки заболевания отсутствовали. Сердечные тона ритмичные, правильные, шумов нет, ритм ЧСС = 62 уд./мин, АД = 120/70. В легких дыхание везикулярное, хрипов нет. Периферических отеков нет. На ЭКГ вариант нормы. Патологических изменений нет. Биохимический и клинический анализ крови без патологических изменений. При ультразвуковом исследовании сердца патологии не обнаружено.

Наличие кардиального антигена проведено путем постановки реакции торможения пассивной гемагглютинации. Результаты – снижение титра антимиокардиальной тест-сыворотки на 1 ступень (со 1:160 до 1:80), что соответствует присутствию в крови антигена поврежденного миокарда.

Установлен диагноз: стрессорная кардиомиопатия

Больному назначена терапия: неотон 4 грамма в сутки, милдронат 10% – 10 мл/сут, папангин 10 мл/сут. Проводимая терапия осуществлялась в течение семи дней.

После окончания лечения пациент приступил к интенсивным тренировкам. Толерантность к физической нагрузке полностью восстановилась. Значительно повысились спортивные результаты.

Приведенный пример говорит, что у пациента имела место стрессорная кардиомиопатия, доклиническая стадия. В этот период не было выявлено клинических проявлений и диагностика осуществлена только при помощи серологического исследования крови.

Проведенные исследования позволяют утверждать, что предлагаемый способ имеет существенную значимость и может быть использован для диагностики доклинической стадии стрессорной кардиомиопатии. Предлагаемый способ может быть использован в практическом здравоохранении для диагностики стрессорной кардиомиопатии – ее доклинической стадии.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет своевременно диагностировать стрессорную кардиомиопатию и принять срочные меры для последующего медикаментозного лечения, что позволит предупредить развитие заболевания и сохранить здоровье и высокую работоспособность. Преимуществом способа является его чувствительность, высокая информативность и специфичность.

Источники информации

1. Бутченко Л.А., Кушаковский М.С. Дистрофия миокарда у спортсменов. – М.: Медицина. – 1980.

2. Дембо А.Г. Врачебный контроль в спорте. – М.: Медицина. – 1988.

5. Гаврилова Е.А. Стрессорная кардиомиопатия у спортсменов: (дистрофия миокарда физического перенапряжения), Автореф. Докт. дисс., СПб,. 2001.

Формула изобретения

Способ диагностики стрессорной кардиомиопатии путем серологического исследования сыворотки крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют наличие кардиального антигена с помощью реакции торможения пассивной гемагглютинации и при снижении титра антимиокардиальной тест-сыворотки в присутствии сыворотки исследуемого лица в два и более раза диагностируют стрессорную кардиомиопатию.