Патент на изобретение №2291709

(54) СПОСОБ ИММУНОПРОФИЛАКТИКИ ВИРУСНЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ТЕЛЯТ

(57) Реферат:

Изобретение относится к ветеринарной иммунологии. Клинически здоровых телят иммунизируют трехкратно с интервалом в 10 дней путем подкожной инъекции иммунной сыворотки животных-доноров с титрами гемагглютининов к вирусу инфекционного ринотрахеита 1:256, к вирусу парагриппа-3 1:1280 и к вирусу вирусной диареи-болезни слизистых 1:1024. После первой инъекции дополнительно тремя курсами продолжительностью в 10 дней применяют пробиотический препарат лактобифадол из расчета 16×10⁸ микробных клеток бифидо- и 2×10⁷ лактобактерий. Обеспечивается активизация защитных механизмов организма по всем регистрируемым параметрам и их сбалансированность, что приводит к снижению заболеваемости на фоне естественного вирусоносительства. 5 табл.

Изобретение относится к ветеринарной иммунологии, касается способа иммунопрофилактики и может быть использовано для профилактики вирусных респираторных болезней телят, протекающих как ассоциированная вирусная инфекция парагриппа-3 (ПГ-3), инфекционного ринотрахеита (ИРТ) и вирусной диареи-болезни слизистых оболочек (ВД-БС).

Разрыв инфекционной цепи и при возможности предотвращение перехода эпизоотического процесса в скрытое состояние рассматривается как основной принцип борьбы с энзоотиями, одним из основным инструментов которой является иммунопрофилактика. Иммунопрофилактика предполагает создание искусственной невосприимчивости организма введением биологических препаратов против соответствующего возбудителя, при этом различают активную (с использованием вакцин и анатоксинов) и пассивную (с использованием антител в виде сывороток или глобулина) иммунизацию.

Известны способы иммунопрофилактики вирусных респираторных болезней телят с применением моновалентных (живых и инактивированных) или поливалентных вакцин [1]. Известные способы иммунопрофилактики основаны на комплексных мероприятиях, включающих интраназальную прививку телят в первые недели жизни, их ревакцинацию (парентерально) через 3-4 месяца, а также вакцинацию коров [2]. Но при сложности осуществления известные способы малоэффективны, что обусловлено наличием у телят колостральных антител, которые блокируют антигены вводимых вакцин, тем самым блокируя формирование иммунитета и усугубляя инфекционный процесс. Живые вакцины, кроме того, обладают иммунодепрессивным действием и могут вызывать поствакцинальную болезнь.

Известен также способ иммунопрофилактики респираторных болезней телят с применением иммунной сыворотки крови животных-реконвалесцентов. Сыворотка крови животных-реконвалесцентов представляет собой препарат, содержащий антитела к возбудителям, формирующим вирусно-бактериальный фон животноводческого комплекса, однако набор антител сыворотки крови животных-реконвалесцентов и их титр не всегда соответствуют полному набору антигенной структуры “местной микрофлоры”, а при изготовлении препарата и сложности контроля не обеспечиваются стабильность и высокое качество готовых форм, что снижает эффективность терапевтического вмешательства с применением сыворотки крови животных-реконвалесцентов. Кроме того, невысокая варьирующая активность сыворотки крови животных-реконвалесцентов требует смешивания сывороток различных доноров с применением максимально высоких доз (не менее 1,0 мл на 1 кг живой массы), что усложняет осуществление известного способа.

В качестве предпочтительного аналога рассматривается способ иммунопрофилактики вирусных респираторных болезней телят с применением иммунной сыворотки животных-доноров [3]. Лечебно-профилактические иммунные сыворотки получают в результате неоднократных массивных инъекций специфического антигена для обеспечения уровня антител, во много раз превышающего этот уровень в реконвалесцентных сыворотках, они быстро обеспечивают формирование пассивного иммунитета. Однако в силу распада и исчезновения антител пассивный иммунитет длится максимум 2-3 недели, что снижает эффективность применения лечебно-профилактических сывороток.

Цель изобретения – повышение эффективности профилактики респираторных болезней телят вирусно-бактериальной этиологии.

Поставленная цель достигается применением пробиотика лактобифадол в дополнение к пассивной иммунизации иммунной сывороткой животных-доноров.

Иммунную сыворотку готовят по методу Н.И.Горбань (1981) из крови животных-доноров из хозяйства, для которого она предназначается, предварительно обследованных на вирус лейкоза крупного рогатого скота в РИД с отрицательными результатами. Животных иммунизируют двух- или трехвалентной вакциной. Эффективная сыворотка должна содержать антитела к этиологическим агентам респираторных болезней телят в следующих титрах: к вирусу ПГ-3 – 1:1280, к вирусу ИРТ – 1:256, к вирусу ВД-БС 1:1024.

Пробиотик лактобифадол изготовлен из живых бактерий видов В.adolescentis и L.acidophilum методом контактно-сорбционной сушки биомассы, обеспечивающей минимальное изменение ее биологических свойств [4]. Оба вида бактерий относятся к доминирующим по численности и физиологической значимости родам резидентной микрофлоры кишечника животного организма, обладают выраженной антагонистической активностью в отношении гнилостной, патогенной и условно-патогенной микрофлоры, что обеспечивает помимо синтеза антибиотических веществ, перекиси водорода, лизоцима, интерферона, интерлейкина, конкурентоспособную адгезию на эритроцитах и иммуномодулирующее действие.

Способ осуществляется следующим образом.

Телят 15-20-дневного возраста трехкратно с интервалом 10 дней иммунизируют подкожной инъекцией сыворотки животных-доноров, содержащей антигемагглютинины в титрах к вирусу ИРТ 1:256, к вирусу ПГ-3 1:1280, к вирусу ВД-БС 1:1024, и дополнительно трехкратно после первой инъекции сыворотки животных-доноров в течение 10 дней применяют внутрь лактобифадол в дозе 16×10⁸ микробных клеток бифидо- и 2×10⁷ микробных клеток лактобактерий.

Эффективность способа иммунопрофилактики вирусных респираторных болезней телят комбинацией подкожной инъекции сыворотки животных-доноров с титрами гемагглютининов к вирусу ИРТ 1:256, к вирусу ПГ-3 1:1280 и к вирусу ВД-БС 1:1024 и применения внутрь лактобифадола определяли в хозяйствах Нижегородской области, стационарно неблагополучных по респираторным болезням телят вирусно-бактериальной этиологии с заболеваемостью до 60%. Этиологическую роль вирусов ИРТ, ПГ-3 и ВД-БС подтвердили их выделением в сыворотках телят вируснейтрализующих антител к этим вирусам в 77,5, 87,5 и 85,7% случаев соответственно. Бактериальная микрофлора была представлена стрептококками, сальмонеллами и протеями.

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1. Дозозависимое действие лактобифадола изучали на 4 группах клинически здоровых телят 15-20-дневного возраста, сформированных по принципу аналогов, содержавшихся в одинаковых условиях и на одинаковых рационах. Телят всех групп трехкратно с интервалом в 10 дней иммунизировали подкожной инъекцией сыворотки животных-доноров с титрами гемагглютининов к вирусу ИРТ 1:256, к вирусу ПГ-3 1:1280 и к вирусу ВД-БС 1:1024 в дозе 1 мл/кг живой массы, а телятам первых трех групп после первой инъекции сыворотки дополнительно применяли внутрь лактобифадол тремя курсами длительностью в 10 дней из расчета микробных клеток: 12×10⁸ и 15×10⁶, 16×10⁸ и 2×10⁷, 2×10⁹ и 25×10⁶ бифидо- и лактобактерий соответственно. За телятами вели наблюдения в течение 60 дней. Ежедневно учитывали клиническое состояние животных. До начала и по окончании опыта телят взвешивали, брали кровь для иммунологических исследований. Иммунный статус оценивали по показателям лизоцимной активности сыворотки крови (определяли по В.Г.Дорофейчук), бактерицидной активности сыворотки крови (определяли по О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой), фагоцитарной активности нейтрофилов крови (определяли по А.Н.Маянскому) и -лизинной активности сыворотки крови (определяли по О.В.Бухарину). Результаты представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 2
Дозозависимое влияние лактобифадола на иммунологические показатели
ПОКАЗАТЕЛИ	Группы телят
	1-ая опытная n=10	2-ая опытная n=10	3-я опытная n=10	4-ая контрольная n=10
Бактерицидная активность сыворотки крови, %
Доза лактобифадола, микробных клеток				–
бифидобактерий	12×108	16×108	2×109
лактобактерий	15×106	2×107	25×106
Лизоцимная активность сыворотки крови, %
-лизинная активность сыворотки крови, %
Функциональная активность нейтрофилов крови, %
– спонтанный тест
– индуцированный тест
Примечание: числитель – показатели до начала опыта, знаменатель – показатели через 5 дней после окончания опыта

Как видно из таблиц 1 и 2, при испытанных дозах получены стабильные результаты. В качестве оптимальной дозы для применения на практике можно рекомендовать дозу из расчета 16×10⁸ микробных клеток бифидо- и 2×10⁷ микробных клеток лактобактерий на голову, обеспечившую максимальные показатели относительно контроля и граничных доз. Граничные дозы обеспечивают повышение показателей относительно контроля, но являются экономически нецелесообразными.

Пример 2. Профилактическую эффективность в зависимости длительности курса применения лактобифадола определяли на 4 группах клинически здоровых телят 15-20-дневного возраста, сформированных по принципу аналогов, содержавшихся в одинаковых условиях и на одинаковых рационах. Телят всех групп трехкратно с интервалом в 10 дней иммунизировали подкожной инъекцией сыворотки животных-доноров с титрами гемагглютининов к вирусу ИРТ 1:256, к вирусу ПГ-3 1:1280 и к вирусу ВД-БС 1:1024 в дозе 1 мл/кг живой массы, а телятам первых трех групп после первой инъекции сыворотки дополнительно применяли внутрь лактобифадол в дозе из расчета 16×10⁸ микробных клеток бифидо- и 2×10⁷ лактобактерий на голову тремя курсами длительностью в 5, 10 и 15 дней соответственно. Клинические наблюдения за животными вели в течение 60 дней после окончания опытов. Учет результатов опыта, как в примере 1. Результаты представлены в таблицах 3 и 4.

Как видно из таблиц 3 и 4, экономически обоснованным являлся курс применения лактобифадола длительностью в 10 дней, обеспечивавший максимальные показатели относительно минимальной длительности курса (в 5 дней) и контроля. Увеличение длительности курса применения лактобифадола до 15 дней не приводило к значительному повышению показателей относительно выбранной длительности курса применения лактобифадола в 10 дней.

Таблица 4
Иммунологические показатели в зависимости от длительности курса применения лактобифадола
ПОКАЗАТЕЛИ	Группы телят
	1-ая опытная n=10	2-ая опытная n=10	3-я опытная n=10	4-ая контрольная n=10
Бактерицидная активность сыворотки крови, %
Лизоцимная активность сыворотки крови, %
-лизинная активность сыворотки крови, %
Функциональная активность нейтрофилов крови, %
– спонтанный тест
– индуцированный тест
Примечание: числитель – показатели до начала опыта, знаменатель – показатели через 5 дней после окончания опыта

Пример 3. Сравнительную эффективность заявленного и известных способов профилактики вирусных респираторных болезней телят определяли в условиях хозяйства, длительно неблагополучного по вирусным респираторным болезням, на 4 группах здоровых телят 20-30-дневного возраста, подобранных по принципу аналогов. Иммунизацию телят проводили 4 способами: 1-ый способ (заявленный) – сыворотка животных-доноров с титрами гемагглютининов к вирусу ИРТ 1:256, к вирусу ПГ-3 1:1280 и к вирусу ВД-БС 1:1024 + лактобифадол в дозе из расчета 16×10⁷ микробных клеток бифидо- и 2×10⁷ лактобактерий, 2-ой способ(базовый) – вакцина “ТРИВАК”, 3-ий способ (базовый) – вакцина “БИВАК”, 4-ый способ (прототип) – сыворотка животных-доноров с титрами гемагтлютининов к вирусу ИРТ 1:256, к вирусу ПГ-3 1:1280 и к вирусу ВД-БС 1:1024. За телятами вели наблюдения с учетом течения болезни и ее исхода. Учет результатов, как в примере 1. Результаты представлены в таблице 5.

Как видно из таблицы 5, заявленный способ обеспечивал оптимальный профилактический эффект по сравнению с известными способами, который выражался в снижении числа заболевших телят и более легкой форме переболевания.

Снижение заболеваемости свидетельствовало об усилении резистентности, что указывало на повышение адаптационного уровня. После выздоровления телята опытных групп хорошо развивались.

Полученные в условиях длительного вирусоносительства, т.е. иммунологического прессинга, клинические данные подтвердили достижение заявленного технического результата – повышение профилактической эффективности активацией защитных механизмов по всем регистрируемым параметрам. Предложенная комбинация позволяет существенно снижать побочные эффекты, обеспечивает иммунокоррекцию ключевых нарушенных звеньев иммунитета и повышение естественной резистентности организма.

Источники информации

1. Урбан В.П., Найманов И.Л. Болезни молодняка в промышленном животноводстве. – М.: Колос, 1984. – С.192-196.

2. Инфекционные болезни животных. Справочник / Сост. Ю.Ф.Борисович, Л.В.Кириллов; под ред. Д.Ф.Осидзе. – М.: Агропромиздат, 1987 – С.99.

3. Иммунопрофилактика болезней животных Пер. с нем. Н.Б.Черных – М.: Колос, 1981. – С.274-277.

Формула изобретения

Способ иммунопрофилактики вирусных респираторных болезней телят, включающий иммунизацию поливалентной иммунной сывороткой против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3 и вирусной диареи – болезни слизистых, отличающийся тем, что телят иммунизируют иммунной сывороткой с титрами гемагглютининов к вирусу инфекционного ринотрахеита 1:256, к вирусу парагриппа-3 – 1:1280 и к вирусу вирусной диареи – болезни слизистых – 1:1024, которую инъецируют подкожно трехкратно с интервалом в 10 дней, а после первой инъекции тремя курсами длительностью в 10 дней применяют пробиотический препарат лактобифадол из расчета 16×10⁸ микробных клеток бифидо- и 2×10⁷ лактобактерий.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 19.07.2007

Извещение опубликовано: 27.02.2009 БИ: 06/2009