Патент на изобретение №2287812
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ Н-БУТИЛОВОГО ЭФИРА 2-[4-(5-ТРИФТОРМЕТИЛПИРИДИЛ-2-ОКСИ)ФЕНОКСИ]ПРОПИОНОВОЙ КИСЛОТЫ В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ
(57) Реферат:
Использование: в практике санэпидемстанций, химико-токсикологических, ветеринарных и экологических лабораторий. Сущность: анализируемую пробу измельчают, настаивают с ацетоном, ацетоновое извлечение фильтруют, концентрируют, подвергают хроматографической очистке. Очищают на колонке с использованием нормальнофазного сорбента силикагеля L 40/100
Изобретение относится к биологии, экологии, токсикологической и санитарной химии, а именно к способам определения н-бутилового эфира 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидемстанций, химико-токсикологических, ветеринарных и экологических лабораторий. Способ относится к числу массовых. Известен способ определения органических веществ в биологическом материале путем измельчения биологического объекта, неоднократного настаивания с этанолом (каждый раз в течение суток), объединения вытяжек, сгущения объединенного извлечения, осаждения в нем белков абсолютным этанолом, фильтрования, упаривания фильтрата до густоты сиропа и разбавления его водой с последующей экстракцией анализируемых соединений сначала из кислого, а затем из щелочного раствора (Швайкова М.Д. Токсикологическая химия. – М.: Медицина, 1975. – С.119-123). Способ трудоемок, требует значительных затрат времени на его осуществление, характеризуется низкой степенью извлечения н-бутилового эфира 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты. Известен способ определения н-бутилового эфира 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты в биологическом материале, заключающийся в том, что биологическую пробу измельчают, настаивают 3-4 часа с 36% раствором хлороводородной кислоты, а затем 24 часа с 36% раствором хлороводородной кислоты и гексаном, фильтруют смесь через бумажный фильтр, фильтрат концентрируют при температуре не выше 40°С до полного испарения гексана, водный остаток обрабатывают 36% раствором хлороводородной кислоты в условиях нагревания при 60°С в течение часа, реакционный раствор охлаждают, доводят до рН 1, экстрагируют диэтиловым эфиром, экстракт отделяют, экстрагент испаряют, остаток растворяют в ацетоне, к полученному раствору прибавляют растворы хлорида аммония и ортофосфорной кислоты, а также силикагель АСК, смесь встряхивают, выдерживают 10 минут, фильтруют, рН фильтрата доводят до 1, после чего фильтрат экстрагируют тетрахлорметаном, органический слой отделяют, экстрагируют 1% раствором гидрокарбоната натрия, водный экстракт отделяют, подкисляют концентрированным раствором хлороводородной кислоты до рН 1, экстрагируют тетрахлорметаном, полученный экстракт отделяют, экстрагент испаряют, сухой остаток растворяют в гексане, хроматографируют на пластинах «Силуфол» UV-254 с использованием подвижной фазы диэтиловый эфир н-гексан муравьиная кислота (60:40:2), хроматограммы проявляют в УФ-свете и определяют анализируемое соединение в виде 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты визуально по интенсивности окраски и площади пятна на хроматограмме (Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде / Т.1 – М.: Колос, 1992. – С.360-361). Способ характеризуется недостаточно высокими точностью и чувствительностью, длителен и относительно сложен по выполнению. Он не позволяет определять н-бутиловый эфир 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты непосредственно, а предусматривает косвенное определение этого вещества по одному из продуктов его гидролиза. Задачей настоящего изобретения является повышение чувствительности определения. Поставленная задача достигается с помощью предлагаемого способа, который заключается в том, что анализируемую пробу измельчают, двукратно настаивают с ацетоном, полученное извлечение фильтруют, испаряют растворитель из фильтрата, остаток растворяют в смеси растворителей гексан – ацетон (8:2), очищают на колонке с силикагелем L 40/100 Способ осуществляется следующим образом: биологическую ткань, содержащую н-бутиловый эфир 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты, измельчают, настаивают с ацетоном дважды по 45 минут, извлечения отделяют от твердых частиц биоматериала, объединяют, объединенное извлечение фильтруют, испаряют растворитель из фильтрата, остаток растворяют в смеси растворителей гексан – ацетон (8:2), вносят в колонку с силикагелем L 40/100 Пример 1 Определение: н-бутилового эфира 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты в ткани печени К 10 г мелкоизмельченной ткани печени прибавляют 5 мг н-бутилового эфира 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты, тщательно перемешивают биологическую ткань с веществом и оставляют на сутки при температуре 18-20°С. По истечении указанного времени биологический объект, содержащий анализируемое вещество, заливают 20 мл ацетона и выдерживают 45 минут при периодическом перемешивании. Извлечение отделяют, операцию настаивания повторяют в указанных условиях. Отдельные вытяжки объединяют, фильтруют через бумажный фильтр, экстрагент и извлеченную из биологической ткани воду испаряют из фильтрата в токе воздуха. Остаток растворяют в 10 мл смеси растворителей гексан – ацетон (8:2). 2 мл полученного раствора вносят в колонку размером 490×11 мм, заполненную 10 г силикагеля типа L 40/100 Процесс хроматографирования осуществляют на колонке размерами 150×3,9 мм, заполненной обращеннофазным сорбентом «Nova-Pak С-18», используя подвижную фазу ацетонитрил – вода (7:3) и детектор на основе фотодиодной матрицы. Скорость подачи элюента составляет 1 мл/мин при температуре колонки 20°С. Оптическую плотность регистрируют при длине волны 269 нм. Пик на хроматограмме с временем удерживания 5,17 мин (объем удерживания 5170 мкл) соответствует н-бутиловому эфиру 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты. Количественное содержание н-бутилового эфира 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты определяют, исходя из площади хроматографического пика, по уравнению калибровочного графика и пересчитывают на навеску анализируемого вещества, внесенную в ткань печени. Построение калибровочного графика В ряд мерных колб вместимостью 50 мл вносят 1,25; 2,5; 5,0; 10,0; 20,0 мл 0,0025% раствора и 1,25; 2,5; 5,0; 10,0; 20,0 мл 0,08% раствора н-бутилового эфира 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты в ацетонитриле, прибавляют 33,75; 32,5; 30,0; 25,0; 15,0 и 33,75; 32,5; 30,0; 25,0; 15,0 мл ацетонитрила соответственно и доводят объем содержимого в каждой колбе до метки водой. 8 мкл каждого из полученных растворов вводят в хроматограф. Хроматографирование осуществляют в колонке размером 150×3,9 мм с сорбентом «Nova-Pak С-18», используя подвижную фазу ацетонитрил – вода (7:3) и детектор на основе фотодиодной матрицы. Скорость подачи элюента составляет 1 мл/мин при температуре колонки 20°С. Оптическую плотность регистрируют при длине волны 269 нм. По результатам измерений на хроматографе строят график зависимости площади пика от концентрации определяемого вещества. График линеен в интервале концентраций 0,005-2,56 мкг. Методом наименьших квадратов рассчитывают уравнение калибровочного графика, которое в данном случае имеет вид: S=933771·С-358, где S – площадь хроматографического пика; С – концентрация определяемого вещества в хроматографируемой пробе, мкг. Результаты количественного определения н-бутилового эфира 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты представлены в таблице 1. Пример 2 Определение н-бутилового эфира 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты в ткани семян подсолнечника К 10 г мелкоизмельченной ткани семян подсолнечника прибавляют 5 мг н-бутилового эфира 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты, тщательно перемешивают биологическую ткань с веществом и оставляют на сутки при температуре 18-20°С. По истечении указанного времени биологический объект, содержащий анализируемое вещество, заливают 20 мл ацетона и выдерживают 45 минут при периодическом перемешивании. Извлечение отделяют, операцию настаивания повторяют в указанных условиях. Отдельные вытяжки объединяют, фильтруют через бумажный фильтр, экстрагент и извлеченную из биологической ткани воду испаряют из фильтрата в токе воздуха. Остаток растворяют в 10 мл смеси растворителей гексан – ацетон (8:2). 2 мл полученного раствора вносят в колонку размером 490×11 мм, заполненную 10 г силикагеля типа L 40/100 Процесс хроматографирования осуществляют на колонке размерами 150×3,9 мм, заполненной обращеннофазным сорбентом «Nova-Pak С-18», используя подвижную фазу ацетонитрил – вода (7:3) и детектор на основе фотодиодной матрицы. Скорость подачи элюента составляет 1 мл/мин при температуре колонки 20°С. Оптическую плотность регистрируют при длине волны 269 нм. Пик на хроматограмме с временем удерживания 5,17 мин (объем удерживания 5170 мкл) соответствует н-бутиловому эфиру 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты. Количественное содержание н-бутилового эфира 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты определяют, исходя из площади хроматографического пика, по уравнению калибровочного графика и пересчитывают на навеску анализируемого вещества, внесенную в ткань семян подсолнечника. Построение калибровочного графика и его уравнение приводятся в примере 1. Результаты количественного определения н-бутилового эфира 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты в семенах подсолнечника представлены в таблице 2. Предлагаемыми способ по сравнению с прототипом в 200 раз повышает чувствительность определения в хроматографируемой пробе и более чем в 100 раз – в биологическом материале. Сравнительные характеристики предлагаемого и известного способов представлены в таблице 3.
Формула изобретения
Способ определения н-бутилового эфира 2-[4-(5-трифторметилпиридил-2-окси)фенокси]пропионовой кислоты в биологическом материале, заключающийся в том, что анализируемую пробу измельчают, настаивают с ацетоном, ацетоновое извлечение фильтруют, концентрируют, подвергают хроматографической очистке при использовании нормальнофазного сорбента и подвижной фазы гексан – ацетон (8:2) с последующим определением анализируемого вещества, отличающийся тем, что хроматографическую очистку проводят в колонке с силикагелем L 40/100
MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 29.06.2007
Извещение опубликовано: 20.02.2009 БИ: 05/2009
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
с применением подвижной фазы гексан – ацетон (8:2). Последующее хроматографическое определение осуществляют методом ВЭЖХ в колонке, заполненной сорбентом “Nova-Pak С-18”, с применением подвижной фазы ацетонитрил – вода (7:3) и детектора на основе фотодиодной матрицы. Технический результат изобретения заключается в повышении чувствительности. 3 табл.
