Патент на изобретение №2286790
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ СТРЕССОВОГО НЕДЕРЖАНИЯ МОЧИ
(57) Реферат:
Изобретение относится к области медицины и касается лечения стрессового недержания мочи у женщин путем введения фетальных стволовых клеток. В рабдосфинктер парауретрально вводят 40 млн. стволовых миобластов и фибробластов, полученных от плодов 8-12 недель гестации, при соотношении клеток 5-4:3-2. Способ расширяет арсенал средств лечения стрессового недержания мочи у женщин, позволяет исключить хирургическое вмешательство.
(56) (продолжение): Настоящее изобретение относится к терапии, в частности к способам лечения стрессового недержания мочи. Урогенитальные расстройства в климактерии – комплекс вагинальных и мочевых симптомов, развитие которых является осложнением атрофических и дистрофических процессов в эстрогензависимых тканях и структурах нижней трети мочеполового тракта: мочевом пузыре, уретре, влагалище, связочном аппарате и мышцах тазового дна. В настоящее время единственным способом лечения стрессового недержания мочи является хирургический, который насчитывает более 200 модификаций (Х.Хирш, О.Кезер, Ф.Икле “Оперативная гинекология” Изд-во ГЭОТАР Медицина, М., 1999, стр.407). Недостатком способа являются высокая частота рецидивов и осложнения, обусловленные хирургическим вмешательством. Описана попытка лечения недержания мочи у 8 пациентов путем трансуретральной инъекции в рабдосфинктер и уретру комбинации аутологичных стволовых клеток, производных мышечной ткани и клеток соединительной ткани (Shiomo Pas MD “Stem cell offer exciting approach to urinary incontinence treatment” Urology Times 1 July, 2004). Хотя популяция плюрипотентных клеток была получена из скелетных мышц, однако авторы публикации не приводят данных, подтверждающих, что используемые клетки на самом деле были стволовыми, равно как и об успехе лечения во временном интервале. Недостатком способа является его длительность, связанная с необходимостью забора клеточного материала и выращиванием стволовых клеток на его основе. Задача изобретения – упрощение способа лечения стрессового недержания мочи у женщин за счет использования более доступного аллогенного клеточного материала. Поставленная задача решается способом лечения недержания мочи, заключающимся в том, что вводят аллогенные эмбриональные или фетальные соматические стволовые клетки человека – миобласты и фибробласты при их соотношении 5-4:3-2 парауретрально в рабдосфинктер. Получение культуры клеток, обогащенной миобластами человека для последующей трансплантации. Трупный абортивный материал доставляли в аутопсийный блок в термоконтейнере (+4°С) не позднее, чем через 4 часа после искусственного прерывания беременности. Плоды отмывали стерильным физиологическим раствором с антибиотиками. Поперечно-полосатые мышцы выделяли из плодов человека 8-12 недель гестации, отмывали забуференным физиологическим раствором (PBS) рН 7,3 с добавлением антибиотиков. Фрагменты мышечной ткани подвергали механической диссекции в стерильных чашках Петри (35 мм) до размеров не более 1,0 мм × 1,0 мм. Дважды отмывали PBS, центрифугируя при 800 g в течение 3-х минут. Кусочки мышечной ткани диссициировали на отдельные клетки инкубацией при 37°С с 0,2% коллагеназой в течение 15 минут. Затем отмывали дважды PBS. Популяцию клеток, обогащенную миобластами, помещали в культуральные флаконы в концентрации 500000 кл/мл в среде для культуры клеток: F12 и DMEM в соотношении 1:1, с добавлением фетальной эмбриональной сыворотки, L-глютамина, хепеса, бикарбоната натрия, антибиотиков. Клетки культивировали при 37°С в атмосфере с 5% СО2 до получения монослоя, фибробласты удаляли при пассировании. Смену среды проводили каждые 3 дня на 50-75%. Суспензию, обогащенную миобластами, культивировали по вышеописанной схеме до 3 пассажа, затем использовали для трансплантации или замораживали по стандартной программе с переносом в жидкий азот. Получение культуры клеток фибробластов человека для последующей трансплантации. Трупный абортивный материал доставляли в аутопсийный блок в термоконтейнере (+4°С) не позднее, чем через 4 часа после искусственного прерывания беременности. Плоды отмывали стерильным физиологическим раствором с антибиотиками. Ткань кожи выделяли из плодов человека 8-12 недель гестации, отмывали забуференным физиологическим раствором (PBS) рН=7,3 с добавлением антибиотиков. Фрагменты кожи подвергали механической диссекции в стерильных чашках Петри (35 мм) до размеров не более 1,0 мм × 1,0 мм. Дважды отмывали PBS, центрифугируя при 800 g в течение 3-х минут. Кусочки мышечной ткани диссициировали на отдельные клетки инкубацией при 37°С с 0,2% коллагеназой в течение 25 минут. Затем отмывали дважды PBS. Популяцию клеток, обогащенную фибробластами, помещали в культуральные флаконы в концентрации 500000 кл/мл в среде для культуры клеток: F12 и DMEM в соотношении 1:1, с добавлением 10% фетальной сыворотки теленка, L-глютамина, хепеса, бикарбоната натрия, антибиотиков. Клетки культивировали при 37°С в атмосфере с 5% СО2 до получения монослоя. Смену среды проводили каждые 3 дня на 50-75%. Фибробласты культивировали по вышеописанной схеме до 3 пассажа, затем использовали для трансплантации или замораживали по стандартной программе с переносом в жидкий азот. Нижеследующий пример иллюстрирует способ по изобретению. Больная Л.К., 55 лет, страдает стрессовым недержанием мочи в течение 5 лет. Кашлевая проба положительна, проба Вальсалвы положительна, комплексное уродинамическое исследование – недостаточность замыкательного аппарата мочевого пузыря, снижение максимального внутриуретрального давления на 50%, лечение заместительной гормональной терапией без эффекта. Пациентке парауретрально в рабдосфинктер ввели 40 млн. эмбриональных стволовых миобластов и фибробластов при соотношении клеток 4:2. Наблюдение за больной уже через две недели показало клиническое улучшение: 1. Удерживает мочу при нагрузке (кашель, смех). 2. Проба Вальсалвы отрицательна. Дальнейшее наблюдение за пациенткой (в течение 5 месяцев) показало сохранение лечебного эффекта.
Формула изобретения
Способ лечения стрессового недержания мочи у женщин путем введения клеточного материала в рабдосфинктер, отличающийся тем, что в рабдосфинктер парауретрально вводят 40 млн. стволовых миобластов и фибробластов, полученных от плодов 8-12 недель гестации, при соотношении клеток 5-4:3-2.
MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 17.03.2007
Извещение опубликовано: 27.06.2008 БИ: 18/2008
|
||||||||||||||||||||||||||
