Патент на изобретение №2286173

(54) АССОЦИИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ И ЧУМЫ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

(57) Реферат:

Изобретение относится к области биотехнологии. Вакцина содержит суспензию жизнеспособных спор сибиреязвенного вакцинного штамма «55-ВНИИВВиМ» в исходной концентрации 500-700 млн.спор/см³, культуральное вируссодержащее сырье вакцинного вируса чумы крупного рогатого скота штамма «ЛТ» с активностью не менее 7,0 lg ТЦД₅₀/см³, лактозопептонный стабилизатор и дистиллированную воду при следующем содержании компонентов, %: споры сибиреязвенного штамма «55-ВНИИВВиМ» – 6,2-10,0; культуральное сырье вируса чумы КРС штамма «ЛТ» – 25,0-30,0; лактозопептонный стабилизатор – 48,0-50,0; дистиллированная вода – остальное. В одной прививной дозе вакцины содержится 20-25 млн. сибиреязвенных спор и 4,5-5,5 lg ТЦД₅₀ вируса чумы крупного рогатого скота. Вакцина обладает высокой иммуногенностью, создает у однократно привитого крупного рогатого скота напряженный иммунитет продолжительностью не менее 12 месяцев, ареактогенна, безвредна и стабильна при хранении. 3 табл.

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к применению биологических препаратов для одновременной специфической профилактики сибирской язвы и чумы крупного рогатого скота.

В настоящее время известна вакцина против сибирской язвы, представляющая собой суспензию живых спор бескапсульного авирулентного вакцинного штамма «55-ВНИИВВиМ» [1].

Известна также культуральная вирусвакцина против чумы крупного рогатого скота, изготовленная из вакцинного штамма «ЛТ» [2, 3].

За рубежом для профилактики этих болезней применяются вакцины, изготовленные из штаммов 34F₂ (Sterne) и Вейбридж возбудителя сибирской язвы, а также из штамма TCRV и Plowright W. вируса чумы крупного рогатого скота [4, 5].

Существующие вакцины используются независимо друг от друга и их применение не может создать иммунитет у животных одновременно против сибирской язвы и чумы КРС. Использование этих вакцин в отдельности требует удвоенного количества трудозатрат и оказывает дополнительное стрессовое воздействие на организм животных.

В литературе описаны результаты исследований по разработке ассоциированных вакцин на основе антигенов бактериальной и вирусной природы: против сибирской язвы и оспы овец с использованием сибиреязвенного вакцинного штамма «ГНКИ» и вакцинного штамма «К» вируса оспы овец [6]: ассоциированной вакцины против сибирской язвы и оспы овец с использованием вакцинного штамма «55-ВНИИВВиМ» сибирской язвы и штамма «НИСХИ» оспы овец [7]; ассоциированной вакцины против сибирской язвы и ящура [8]; инактивированной ассоциированной поливалентной вакцины против ящура и чумы КРС [9].

Материалов по созданию ассоциированной вакцины против сибирской язвы и чумы крупного рогатого скота в доступной литературе не обнаружено.

Цель изобретения – создание ассоциированной вакцины против сибирской язвы и чумы крупного рогатого скота, обладающей высокой иммуно-генностью, ареактогенностью, безвредностью, стабильностью при хранении и индуцирующей формирование равноценного напряженного иммунитета, обеспечивающего защиту животных от заражения культурами вирулентных штаммов возбудителей сибирской язвы и вируса чумы КРС. Применение ее в животноводстве позволит существенно снизить трудозатраты ветеринарных специалистов, уменьшить стрессовое воздействие на организм животных при проведении прививок, в более короткие сроки создавать стойкое благополучие по отношению к инфекционным болезням микробной и вирусной этиологии.

Указанная цель достигается смешиванием суспензии спор вакцинного сибиреязвенного штамма «55-ВНИИВВиМ» с культуральным вируссодержащим сырьем вакцинного вируса чумы крупного рогатого скота штамма «ЛТ» и стабилизатором с последующей лиофилизацией со следующим содержанием компонентов в вакцине (объемных %): споры сибиреязвенного штамма – 6,2-10,0; культуральное сырье вируса чумы КРС – 25,0-30,0; лактозопелтонный стабилизатор – 48,0-50,0; дистиллированная вода – остальное.

Биологическая активность приготовленной таким образом вакцины составляет: по сибиреязвенному компоненту 500-700 млн.спор/см³, по вирусному компоненту не ниже 7,0 lg ТЦД₅₀/см³, что соответствует 20-30 прививным дозам. В одной прививной дозе вакцины содержится 20-25 млн. сибиреязвенных спор и 4,5-5,5 lg ТЦД₅₀ вируса чумы крупного рогатого скота.

В результате проведенных экспериментов установлено, что предлагаемая ассоциированная вакцина против сибирской язвы и чумы крупного рогатого скота, изготовленная из сибиреязвенного штамма «55-ВНИИВВиМ» и культурального штамма «ЛТ» вируса чумы крупного рогатого скота создает иммунитет у однократно привитых животных через 10-12 суток одновременно против сибирской язвы и чумы КРС длительностью не менее 12 месяцев (срок наблюдения). По иммуногенности она не уступает моновакцинам, применяемым при этих болезнях, и стабильна при хранении. Примеры конкретного выполнения:

Пример 1.

К 25,0 мл культурального вируссодержащего сырья вируса чумы крупного рогатого скота штамм «ЛТ», с активностью 7,0 lg ТЦД₅₀/мл, добавляют 6,2 мл суспензии спор штамма «55 ВНИИВВиМ» возбудителя сибирской язвы, 48,0 мл лактозопептонного стабилизатора (пептон – 20%, лактоза – 4%) и 20,8 мл дистиллированной воды. Исходная концентрация сибиреязвенного компонента в готовой смеси составляет 500-700 млн.спор/см³. Смесь перемешивают и лиофильно высушивают до содержания массовой влаги в пределах 1-4%.

Вакцина представляет собой гомогенную пористую таблетку от светло-коричневого до коричневого цвета.

Результаты испытания биологических свойств и физико-химических показателей приготовленных таким образом 4-х серий ассоциированной вакцины приведены в таблице 1.

Пример 2.

В экспериментах на морских свинках, кроликах и телятах показано, что ассоциированная вакцина не уступает по иммуногенности моновакцинам против сибирской язвы и чумы крупного рогатого скота, изготовленных из этих штаммов.

Результаты проверки иммуногенности 3-х серий ассоциированной вакцины приведены в таблице 2.

Процент защиты морских свинок, зараженных референсзаражающей культурой возбудителя сибирской язвы штамм М-71 через 10-12 суток после вакцинации, составил для ассоциированного препарата 92,6%, а для сибиреязвенной моновакцины 86,7%. Вакцина предохраняла от заболевания 100% привитых телят, зараженных вирулентным штаммом №76 сибирской язвы и вирулентным штаммом «О» вируса чумы крупного рогатого скота. Аналогичные результаты были получены при контрольном заражении животных через 8 месяцев после иммунизации.

У вакцинированных животных проводили гематологический анализ (общая картина крови и лейкоформула) и получали сыворотку крови для исследования на наличие соответствующих антител. Пробы крови отбирали до вакцинации и через 5, 7, 14 и 21 сутки после нее. Через 21 сутки после введения вакцины у телят титр противосибиреязвенных антител в РНГА составил 1:320, а титр противовирусных антител в РН на культуре клеток ПС равнялся 1:32; у кроликов титр противовирусных антител составлял 1:32-1:64 (на 14-28 сутки).

В результате проведенных экспериментов установлено, что предлагаемая ассоциированная вакцина против сибирской язвы и чумы КРС создает у однократно привитого крупного рогатого скота напряженный иммунитет к этим инфекциям продолжительностью не менее 12 месяцев и не уступает выпускаемым в настоящее время моновакцинам против этих болезней.

Пример 3.

Изучена сохраняемость сухой ассоциированной вакцины при температурах 4±2°С (рекомендуемая температура хранения), 18±2°С и 37±2°С. Результаты приведены в таблице 3.

Как видно из таблицы, при рекомендуемой температуре хранения (4±2°С) компоненты вакцины сохраняют исходную активность в течение 12 месяцев (срок наблюдения). Активность ассоциированного препарата при 18±2°С хранения в течение 4 месяцев остается на исходном уровне, что важно при использовании вакцины в южных регионах России.

Литература

1. Патент № 2095409, 1997, Бакулов И.А., Гаврилов В.А., Селиверстов В.В. и др. “Способ изготовления вакцины против сибирской язвы жи вотных”.

2. ТУ 10-07-081-92 “Вирусвакцина из штамма “ЛТ” против чумы крупного рогатого скота лиофинизированная”.

3. Митин Н.И., Петров Ю.И. Лиофилизированная вирусвакцина из штамма «ЛТ» против чумы крупного рогатого скота. Материалы научно-практической конф., Покров, 1992, с.146-147.

4. Г.Г.Онищенко и др. «Сибирская язва: актуальные аспекты микробиологии, эпидемиологии, клиники, диагностики, лечения и профилактики», 1999 – 448 с. “Ветеринария” 1989. – №3. – С.71-72.

5. Plowright W., Ferris R. Cytopathogeniutu of rinder pest virus in tissues culture. Nature, 1957, v.179, N7, p.708-712.

6. Лихачев Н.В., Колосов С.Г., Борисович Ю.Ф., Преснов И.И. “Ассоциированная вакцинация овец против сибирской язвы и оспы”. Тр. ГНКИ ветпрепаратов, 1967. – Т.14. – С.35-44.

7. Патент №2181296, 2002, Балышев В.М., Селянинов Ю.О., Бакулов И.А. и др. Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и оспы овец.

8. Патент №2056861, 1996, Бакулов И.А., Гаврилов В.А., Собакин А.С. и др. Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и ящура и способ профилактики сибирской язвы и ящура.

9. ТУ 9384-102-0049552-94 “Инактивированная ассоциированная поливалентная вакцина против ящура и чумы КРС”.

Формула изобретения

Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и чумы крупного рогатого скота, содержащая суспензию жизнеспособных спор сибиреязвенного вакцинного штамма «55-ВНИИВВиМ» в исходной концентрации 500-700 млн спор/см³, культуральное вируссодержащее сырье вакцинного вируса чумы крупного рогатого скота штамма «ЛТ» с активностью не менее 7,0 lg ТЦД₅₀/см³, лактозопептонный стабилизатор и дистиллированную воду при следующем содержании компонентов в вакцине, об.%:

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 25.03.2007

Извещение опубликовано: 10.05.2008 БИ: 13/2008

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 25.03.2009

Извещение опубликовано: 20.02.2010 БИ: 05/2010

NF4A – Восстановление действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение

Дата, с которой действие патента восстановлено: 10.06.2010

Извещение опубликовано: 10.06.2010 БИ: 16/2010