Патент на изобретение №2286053
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ ГЛАДИОЛУСА IN VITRO
(57) Реферат:
Изобретение относится к области садоводства и может быть использовано для микроразмножения и оздоровления растений гладиолуса in vitro. Способ включает вычленение эксплантов, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, культивирование, разделение их на сегменты. После вычленения экспланты высаживают на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, с 1/4 концентрации макро- и микросолей при постоянном освещении люминесцентными лампами с интенсивностью 3000-3500 лк при температуре 22-24°С. Затем размноженные экспланты переносят на агаризованную питательную среду с 1/2 концентрации солей по прописи Мурасиге-Скуга, которую дополняют 30-40 г/л сахарозы и регуляторами роста 0,5-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5-1,0 мг/л
Изобретение относится к области цветоводства и может быть использовано для микроразмножения и оздоровления растений гладиолуса in vitro. Известен способ микроразмножения гладиолуса, включающий вычленение экспланта, посадку его на питательную среду, культивирование, разделение на сегменты (SU №1695854, МПК 7 А 01 Н 4/00, 07.12.1991 г.). Недостатком данного способа является невысокий коэффициент размножения на разных этапах культивирования. Технический результат заключается в повышении выхода размножаемого материала за счет увеличения интенсивности побегообразования, улучшения роста и развития эксплантов при положительном влиянии оптимальной концентрации минерального и органического питания регуляторов роста. Сущность изобретения заключается в том, что в способе размножения гладиолуса in vitro, включающем вычленение эксплантов, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, культивирование, разделение их на сегменты, после вычленения экспланты высаживают на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга с 1/4 концентрации макро – и микросолей при постоянном освещении люминесцентными лампами с интенсивностью 3000-3500 лк при температуре 22-24°С. Затем размноженные экспланты переносят на агаризованную питательную среду с 1/2 концентрации солей по прописи Мурасиге-Скуга, которую дополняют 30-40 г/л сахарозы и регуляторами роста 0,5-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5-1,0 мг/л Добавление сахарозы в питательную среду более 40 г/л снижает рост и развитие эксплантов. При 1/4 концентрации макро- и микросолей и интенсивности освещения 3000-3500 лк при температуре 22-24°С наблюдается наибольшее образование побегов эксплантов гладиолусов (табл.1). Добавление в питательную среду регуляторов роста с концентрациями 0,5-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5-1,0 мг/л Способ осуществляют следующим образом. В качестве эксплантов берут пазушные и апикальные почки гладиолуса, стерилизуют и в стерильных условиях высаживают в колбы на питательную среду Мурасиге-Скуга с рН 5,8-5,9, содержащую 7,0-7,5 г/л агара. Для экспериментальной проверки предлагаемого способа на этапе введения в культуру варьируют концентрацию макро- и микросолей в питательной среде (табл.1).
Культивирование проводят при постоянном освещении белыми люминесцентными лампами с интенсивностью 3000-3500 лк при температуре 22-24°С. В течение 3-4 недель культивирования на среде с 1/4 концентрации макро- и микросолей по прописи Мурасиге-Скуга образуется максимальное число побегов, которые отделяют от почки и пересаживают на питательную среду Мурасиге-Скуга для последующего микроразмножения. На этапе собственно микроразмножения субкультивирование побегов проводят на среде, содержащей 1/2 концентрации солей по прописи Мурасиге-Скуга, дополненной 30-40 г/л сахарозы и регуляторами роста: 0,5-1,5 мг/л 6-бензиламинопурином и 0,5-1,5 мг/л
Наряду с прямой регенерацией растений из первичного экспланта на данном этапе процесса клонального микроразмножения регенерацию растений проводят также через каллусогенез, для чего в питательную среду добавляют 0,5-1,5 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5-1,5 мг/л 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (табл.3).
Укоренение проводят на питательной среде Мурасиге-Скуга с 1/2 концентрации минеральных солей, дополненной 30-40 г/л сахарозы, 0,5-1,5 мг/л В результате использования данного способа клонального микроразмножения гладиолуса величина побегообразования на этапе введения в культуру in vitro составила 4,6 побега/эксплант, на этапе собственно микроразмножения – от 14,2 (через пассирование пазушных побегов) до 17,5 побегов/эксплант (через каллусогенез). Процент укоренения составил 100%, что приводит к высокой жизнеспособности растений-регенерантов при последующей высадке в почву.
Формула изобретения
Способ размножения гладиолуса in vitro, включающий вычленение эксплантов, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, культивирование, разделение их на сегменты, отличающийся тем, что после вычленения экспланты высаживают на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, с 1/4 концентрации макро- и микросолей при постоянном освещении люминесцентными лампами с интенсивностью 3000-3500 лк при температуре 22-24°С, затем размноженные экспланты переносят на агаризованную питательную среду с 1/2 концентрации солей по прописи Мурасиге-Скуга, которую дополняют 30-40 г/л сахарозы и регуляторами роста 0,5-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5-1,0 мг/л
MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 18.02.2008
Извещение опубликовано: 10.07.2009 БИ: 19/2009
NF4A – Восстановление действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение
Дата, с которой действие патента восстановлено: 27.11.2009
Извещение опубликовано: 27.11.2009 БИ: 33/2009
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
-нафтилуксусной кислоты. Кроме того, параллельно культивирование проводят также через каллусогенез на агаризованной питательной среде, дополненной 0,5-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 1,0-1,5 мг/л 2,4-дихлорфеноксиуксуной кислоты, с последующим укоренением на агаризованной питательной среде с половинной концентрацией солей по прописи Мурасиге-Скуга, дополненной 0,5-1,5 мг/л