Патент на изобретение №2285723
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(54) ШТАММ ВИРУСА ГРИППА А/17/ ВАЙОМИНГ/03/8(H3N2) ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ВЗРОСЛЫХ И ДЛЯ ДЕТЕЙ
(57) Реферат:
Изобретение относится к области вирусологии и медицины. Заявлен штамм вируса гриппа А/17/Вайоминг/03/8 (H3N2). Штамм получен методом генетической реассортации эпидемического вируса А/Вайоминг/3/03 (H3N2) с холодоадаптированным штаммом А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) – донором аттенуации – с последующей селекцией в присутствии сыворотки к вирусу А/Ленинград/134/17/57 (H2N2). Полученный штамм является температурочувствительным и холодоадаптированным. Реассортант унаследовал от эпидемического вируса два гена, кодирующих поверхностные белки гемагглютинин и нейраминидазу и шесть генов, кодирующих негликозилированные белки от донора аттенуации. Изобретение может быть использовано в медицине для производства гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей. 1 ил., 3 табл.
Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в здравоохранении для профилактики эпидемического гриппа среди взрослых и детей живой интраназальной гриппозной вакциной из штамма А/17/Вайоминг/03/8 (H3N2). Известный вакцинный штамм вируса гриппа А/17/Сидней/97/76 (H3N2) – прототип [Киселева И.В., Александрова Г.И., Руденко Л.Г., Науменко З.С., Климов А.И. Штамм вируса гриппа А/17/Сидней/97/76 (H3N2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых. Патент РФ №2159812 от 27.11.2000. Опубл. БИ 2000. – №33] – утратил антигенную актуальность и вследствие этого не сможет вызвать защитную реакцию во время эпидемии гриппа, вызванной штаммом вируса гриппа, аналогичным вирусу А/Вайоминг/3/03 (H3N2). Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение вакцинного штамма актуальной антигенной разновидности на основе эпидемического вируса А/Вайоминг/3/03 (H3N2). Вакцинный штамм А/17/Вайоминг/03/8 (H3N2) получен методом генетической реассортации эпидемического вируса А/Вайоминг/3/03 (H3N2) с холодоадаптированным штаммом А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) – донором аттенуации – с последующей селекцией в присутствии антисыворотки к вирусу А/Ленинград/134/17/57 (H2N2). Донор аттенуации – холодоадаптированный температурочувствительный штамм вируса гриппа А/Ленинград/134/17/57 (H2N2), разрешенный для получения безвредных живых интраназальных вакцин [Александрова Г.И., Климов А.И. Живая вакцина против гриппа. – СПб.: Наука. – 1994. – 151 с.]. Вакцинный штамм является температурочувствительным (разность в показателях инфекционной активности при температуре инкубации 33°С и 40°С составляет 8,5 lg ЭИД50/0,2 мл) и холодоадаптированным (разность в показателях инфекционной активности при температуре инкубации 33°С и 25°С равна 3,5 lg ЭИД50/0,2 мл). Один из двух поверхностных белков вакцинного штамма – гемагглютинин (НА) – в РТГА идентичен вирусу А/Вайоминг/3/03 (H3N2), антисывороткой к которому полностью нейтрализуется. На чертеже в качестве примера представлена рестрикция ДНК-копии фрагмента гена РА эндонуклеазой Asn I. 1-я дорожка – ДНК маркер молекулярного веса IX; 2-я, 5-я и 8-я дорожки – донор аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2); 3-я и 7-я дорожки – эпидемический вирус А/Вайоминг/3/03 (H3N2); 4-я и 6-я дорожки – кандидат в вакцинные штаммы А/17/Вайоминг/03/8 (H3N2). В РА гене донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) в позиции нуклеотида 1045 имеется замена G Результаты рестрикционного анализа всех генов вакцинного штамма А/17/Вайоминг/03/8 (H3N2) представлены в табл.1. Таким образом, представленный вакцинный штамм А/17/Вайоминг/03/8 (H3N2) характеризуется сочетанием полезных признаков, необходимых вакцинному штамму: антигенной специфичностью поверхностных белков эпидемического вируса А/Вайоминг/3/03 (H3N2), структурой генома, оптимальной для реассортантных вакцинных штаммов, температурочувствительностью и холодоадаптированностью, что коррелирует с аттенуацией для человека, характерной для донора аттенуации. Морфология штамма – полиморфная, типичная для вируса гриппа. ХАРАКТЕРИСТИКА ШТАММА Инфекционная активность при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах при 33-34°С в течение 48 часов – 8,5 lg ЭИД50/0,2 мл. Гемагглютинирующая активность – 1:1024. Штамм проявляет генетическую стабильность биологических признаков после 5 пассажей на куриных эмбрионах (при использовании больших заражающих доз). Пример получения вакцинного штамма А/17/Вайоминг/03/8 (H3N2) представлен в прилагаемом паспорте.
ПАСПОРТ ШТАММА 1. Название штамма-А/17/Вайоминг/03/8 (H3N2) 2. Серия – серия 2 3. Метод получения – реассортация; характеристика родительских вирусов: а). эпидемический вирус – А/Вайоминг/3/03 (H3N2) б). донор аттенуации – А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) 4. Количество пассажей – 6 в процессе реассортации 5. Характеристика штамма: а). оптимальные условия репродукции – 33°С, 48 часов; б). гемагглютинирующая активность – 1:1024; в). инфекционная активность – 8.5 lg ЭИД50/0,2 мл; г). чувствительность к ингибиторам – ингибиторорезистентный в РТГА с нормальной лошадиной сывороткой; д). разность в показателях инфекционной активности при 33°С и 40°С – 8.5 lg ЭИД50/0,2 мл; е). разность в показателях инфекционной активности при 33°С и 25°С – 3.5 lg ЭИД50/0,2 мл. ж). структура генома реассортанта: – гены от эпидемического вируса – НА, NA – гены от донора аттенуации – РВ2, РВ1, PA, NP, M, NS 6. Характеристика штамма после лиофилизации: а). дата лиофилизации – 26 февраля 2004 года; б). объем материала в ампуле – 1.0 мл; в). количество доз в серии – 4; г). инфекционная активность – 7.5 lg ЭИД50/0.2 мл; д). гемагглютинирующая активность – 1:256. 7. Рекомендуемое разведение при вакцинации – 1:2. 8. Антигенная специфичность а). гемагглютинина – идентичен вирусу А/Вайоминг/3/03 (H3N2) по данным РТГА с иммунной крысиной антисывороткой; б). нейраминидазы – идентична вирусу А/Вайоминг/3/03 (H3N2) по данным ПЦР-рестрикционного анализа ДНК-копий генов. 9. Безвредность для мышей при подкожном и внутрибрюшинном введении – безвреден. 10. Бактериологический контроль: дата проведения – 27 февраля 2004 года результат – стерилен. 11. Контроль на отсутствие посторонних вирусов – посторонние вирусы отсутствуют.
ШТАММ А/17/ВАЙОМИНГ/03/8 (H3N2) АРЕАКТОГЕНЕН ДЛЯ ВЗРОСЛЫХ ЛИЦ Пример 1. При вакцинации 49 взрослых человек интраназально реассортантным вакцинным штаммом А/17/Вайоминг/03/8 (H3N2) с инфекционной активностью 7,5 lg ЭИД50/0,2 мл в разведении 1:2 в объеме 0,5 мл сильных температурных реакций с повышением температуры свыше 38,5°С и средних температурных реакций с повышением температуры в диапозоне 37,6-38,5°С не наблюдалось. Слабые температурные реакции (до 37,5°С) наблюдались в 6,1% случаев. Результаты обследования приведены в таблице 2. В получившей плацебо группе из 42 лиц слабые реакции наблюдались у 2,4% лиц, средние температурные реакции – у 2,4% и сильные температурные реакции – у 2,4%. Показатель реактогенности (разница в проценте средних реакций у привитых вакциной и получивших плацебо) составил 0%. Таким образом, вакцинный штамм А/17/Вайоминг/03/8 (H3N2) по показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам Фармакопейной статьей ФСП 42-0417-4097-03 на живую сухую гриппозную аллантоисную вакцину для интраназального применения. ШТАММ А/17/ВАЙОМИНГ/03/8 (H3N2) АРЕАКТОГЕНЕН ДЛЯ ДЕТЕЙ 3-14 ЛЕТ До 2004 года реассортантные вакцинные штаммы живой гриппозной вакцины для детей и для взрослых готовили на двух разных донорах аттенуации. Вакцинные штаммы живой гриппозной вакцины для взрослых готовили на доноре аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) [Александрова Г.И., Климов А.И. Живая вакцина против гриппа. – СПб.: Наука. – 1994. – 151 с.], а вакцинные штаммы живой гриппозной вакцины для детей – на более аттенуированном доноре А/Ленинград/134/47/57 (H2N2) [Александрова Г.И., Климов А.И. Живая вакцина против гриппа. – СПб.: Наука. – 1994. – 151 с.]. В 2003 году Комитет медицинских иммунобиологических препаратов счел целесообразным рекомендовать «Вакцину гриппозную аллантоисную интраназальную живую сухую для взрослых» для иммунизации детей в возрасте 3-6 лет с внесением соответствующих изменений в «Инструкцию по применению» препарата [Инструкция по применению вакцины гриппозной аллантоисной интраназальной живой сухой. Утверждена Главным санитарным врачом РФ Г.Г.Онищенко 16.06.2004]. В этой связи нами была изучена реактогенность вакцинного штамма А/17/Вайоминг/03/8 (H3N2) на детях. Пример 2. Группу из 76 детей в возрасте 3-14 лет вакцинировали интраназално в объеме 0,5 мл реассортантным вакцинным штаммом А/17/Вайоминг/03/8 (H3N2) с инфекционной активностью 7,5 lg ЭИД50/мл в разведении 1:2. Группа детей того же возраста из 58 человек получила плацебо. Результаты исследований приведены в таблице 3. В группе вакцинированных детей сильные температурные реакции с повышением температуры свыше 38,5°С не наблюдались. Средние реакции в диапазоне 37,6-38,5°С наблюдались в 1,3% случаев. Слабые температурные реакции с кратковременным повышением температуры до 37,5°С были отмечены в 3,9% случаев. В группе детей, получивших плацебо, наблюдались сильные температурные реакции с повышением температуры свыше 38,5°С и средние температурные реакции в диапазоне 37,6-38,5°С в 1,7% и 5,2% случаев соответственно. Слабые температурные реакции отмечены в 5,2% случаев. Показатель реактогенности (разница в проценте средних реакций у привитых вакциной и получивших плацебо) составил 0%. Испытания на волонтерах подтвердили, что вакцинный штамм А/17/Вайоминг/03/8 (H3N2) по показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам Фармакопейной статьей ФСП 42-0417-4097-03 на живую сухую гриппозную аллантоисную вакцину для интраназального применения. На основе вышесказанного предлагаемый по изобретению вакцинный штамм вируса гриппа может быть использован для профилактики гриппа как у взрослых, так и у детей с трехлетнего возраста, что подтверждают результаты изучения его реактогенности для разных возрастных групп.
Формула изобретения
Штамм вируса гриппа, депонированный в Государственном институте стандартизации и контроля имени Л.А.Тарасевича под №144, используемый для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей.
РИСУНКИ
QB4A – Регистрация лицензионного договора на использование изобретения
Лицензиар(ы): Государственное учреждение “Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины” Российской академии медицинских наук
Вид лицензии*: ИЛ
Лицензиат(ы): Федеральное государственное унитарное предприятие “Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам “Микроген” Министерства здравоохранения Российской Федерации
Договор № РД0027211 зарегистрирован 01.10.2007
Извещение опубликовано: 10.11.2007 БИ: 31/2007
* ИЛ – исключительная лицензия НИЛ – неисключительная лицензия
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
T по сравнению с современными эпидемическими штаммами, приведшая к аминокислотной замене валина эпидемических вирусов на лейцин у донора аттенуации. Донор аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) имеет на этом участке сайт рестрикции для экзогенной рестриктазы Vsp I. У эпидемических вирусов этот рестрикционный сайт отсутствует. Таким образом, обработка всех исследуемых фрагментов ДНК данным ферментом приводит к разрезанию участка гена РА на два более мелких фрагмента, если он происходит от донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2). В случае РА гена от эпидемического вируса расщепления не происходит.
38,5°С)