Патент на изобретение №2284582

(54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ТОКСИЧЕСКОЙ РЕТИНОПАТИИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной офтальмологии, и может быть использовано для моделирования токсической ретинопатии. Для этого в стекловидное тело глаза кролика однократно вводят 0,04 мг каиновой кислоты в 0,1 мл физиологического раствора. Способ обеспечивает получение устойчивой, легко воспроизводимой модели ретинопатии. 1 табл., 2 ил.

(56) (продолжение):

CLASS=”b560m”ГАСАНОВ Т.Т. и др. Влияние повреждения гиппокампа каиновой кислотой на длительность стадий сна у кошек. Физиологический журнал им. И.М.Сеченова. – М., 1995, №5, с.40-45. TUNG N.N., MORGAN I. G. et al. Intravitreal kainic acid severely reduces the size of the developing optic tectum in newly hatched chickens. Brain. Res. 1987, Dec. 1; 435(1-2):153-9. CHENG L., HOSTETLER K. Y. et al. Treatment or prevention of herpes simplex virus retinitis with intravitreally injectable crystalline 1-(O)-hexadecylpropanediol-3-phospho-ganciclovir. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2002, Feb;4 3(2):515-21. FRIEDLE N. M. et al. Regional brain atrophy and reductions in glutamate release and uptake after intrastriatal kainic acid. Br. J. Pharmacol. 1978, May; 63(1):151-8.). VAEGAN et al. Selective reduction of oscillatory potentials and pattern electroretinograms after retinal ganglion cell damage by disease in humans or by kainic acid toxicity in cats. Doc. Ophthalmol. 1991; 77(3):237-53. PAYET O., D’ALDIN C. et al. Muller A.Anti-excitotoxic activity of trimetazidine in the retina. J. Ocul. Pharmacol. Ther. 2004, Feb; 20(1):85-92. SHIN D. H., LEE H. Y. et al., Activation of microglia in kainic acid induced rat retinal apoptosis. Neurosci. Lett. 2000, Oct, 13; 292(3):159-62.

Предлагаемое изобретение относится к офтальмологии и предназначено для экспериментального моделирования токсической ретинопатиии.

Патогенез ретинальных дистрофических процессов, относящихся к распространенным и весьма тяжелым видам офтальмопатологии, остается малоизученным. Недостаточно разработаны и экспериментальные модели дистрофических поражений сетчатки. Между тем, экспериментальное моделирование дегенерации сетчатки с использованием различных повреждающих факторов расширяет возможности исследования патогенетических механизмов заболеваний сетчатой оболочки у человека, а следовательно, и возможности экспериментальной терапии.

В связи с этим нами проявлен интерес к поиску новых видов экспериментальной ретинопатии. В нейрофизиологии известно использование каиновой кислоты и ее солей при моделировании нейродегенеративных состояний в центральной и периферической нервной системе. Каиновая кислота относится к возбуждающим аминокислотам и, являясь прямым агонистом глутаматного рецептора, обладает в 100 раз большей активностью чем -глутамат (Johnston GAR., Curtis DR., Davies J., Mc Culloch RN. Spinal interneurone excitation by conformationally restricted analogues of

Техническим результатом предлагаемого изобретения является получение устойчивой, легко воспроизводимой модели ретинопатии.

Технический результат достигается за счет однократного введения в стекловидное тело раствора каиновой кислоты в определенной дозе.

Первоначальным этапом данного эксперимента явилась отработка дозы каиновой кислоты. Всего было проведено 3 серии эксперимента на 12 животных (кролики). Глаз кролика, как известно, является наиболее частым объектом моделирования в офтальмологии. Оптимальной как для клинического исследования, так и для изучения функциональной активности сетчатки оказалась доза 0,04 мг (в примерах отражен процесс подбора доз). При введении в полость стекловидного тела указанной дозы каиновой кислоты в 0,1 мл физиологического раствора на глазном дне к 7-м суткам наблюдения появляется легкое облаковидное преретинальное помутнение. На 20-е сутки развиваются выраженные фиброзные изменения сетчатки по типу витреоретинальной решетчатой дистрофии. На 30-е сутки отмечается прогрессирование пролиферации: выраженный фиброз сетчатки с развитием глиоза.

Степень повреждения сетчатки оценивали по показателям функционального состояния, а именно по уровню ее биоэлектрической активности, определяемой методом электроретинографии: регистрировали ганц-фельд ЭРГ и ритмическую ЭРГ (РЭРГ) на низкую (12 Гц) и высокую (32 Гц) частоту мельканий. Токсический эффект каината проявляется в дегенерации нейронов 2 и 3 порядка и не затрагивает структуру и функцию фоторецепторов (в ганц-фельд ЭРГ выявлялась грубая редукция амплитуды b-волны на фоне сохранной a-волны, генерируемой фоторецепторами). Учитывая, что в образовании b-волны принимают участие и МК, ее полное исчезновение на фоне некоторой сохранности РЭРГ позволяет предполагать, что первичной мишенью воздействия каината скорее являются МК. Отсутствие b-волны ЭРГ отмечалось в течение всего срока наблюдения – 30 дней.

При регистрации РЭРГ выявлено уменьшение ее амплитуды, что также можно связать со снижением функции биполярных клеток. Поскольку в генерацию РЭРГ вносят вклад не только биполярные клетки, но и фоторецепторы, то, возможно, именно их доля регистрируется в остаточной РЭРГ после блокады синаптической передачи между фоторецепторами и ON-биполярными клетками.

Параметром для определения функции МК является глиальный индекс: отношение b-волны ЭРГ к амплитуде РЭРГ на мелькания 8-12 Гц. Поскольку у большинства животных в контроле наблюдалось полное отсутствие b-волны ЭРГ, то значение Кг следует рассматривать близкими к нулю, что является признаком значительного угнетения активности МК и развитием глиоза сетчатки, что коррелирует с клиническими данными, В таблице представлены значения К_г для тех случаев, когда его можно было рассчитать. Через 1 нед. обнаруживалась резкая активизация метаболизма мюллеровской глии с возрастанием К_г до 8-10 ед. Подобное увеличение К_г отражает напряженность компенсаторно-приспособительных механизмов в сетчатке и является свидетельством развития ишемии и гипоксии в сетчатке.

Способ осуществляют следующим образом: животное наркотизируют в/м введением 2 мл тиопентала, инсталлируют в конъюнктивальную полость 0,5% раствор дикаина, после чего разрезают и отсепаровывают конъюнктиву в верхнем квадранте. Методом инъекции в стекловидное тело в 10 мм от лимба вводят 0,04 мг каиновой кислоты в 0,1 мл физиологического раствора с помощью инсулинового шприца с ограничителем на глубину 5 мм.

Пример 1. Каиновую кислоту вводили в стекловидное тело глаз кроликов в дозе 0,1 мг на 0,1 мл физиологического раствора. Указанная доза яда вызывает тяжелую степень повреждения сетчатки. На следующие сутки волна “b” ЭРГ полностью исчезала. На 5-6-е сутки животные погибали.

Пример 2. Каиновую кислоту вводили в стекловидное тело глаз кроликов в дозе 0,01 мг на 0,1 мл физиологического раствора. Указанная доза яда вызывает менее значительную степень повреждения сетчатки. На следующие сутки амплитуда волны “b” ЭРГ составляла в среднем 25-30% от исходного уровня и в течение 1-го месяца наблюдения повышалась до 40-50-ти % от исходного уровня без каких-либо вмешательств.

Пример 3. Каиновую кислоту вводили в стекловидное тело глаз кроликов в дозе 0,04 мг на 0,1 мл физиологического раствора. Указанная доза оказалась оптимальной для моделирования ретинопатии. В электроретинографических исследованиях выявлялась грубая редукция амплитуды низкочастотной ритмической ЭРГ, объективно отражающей суммарную функцию преимущественно ON-биполяров, и b-волны ЭРГ на фоне сохранной а-волны, генерируемой фоторецепторами сетчатки. У некоторых кроликов регистрировалась негативная ЭРГ: b-волна ниже изолинии при сохранной а-волне. Подобные изменения сохранялись в течение всего срока наблюдения. Результаты электроретинографических исследований суммированы в таблице 1. На фиг. 1 и 2 приведены записи ЭРГ и РЭРГ.

Таким образом, предложенный способ позволяет осуществить экспериментальное моделирование токсической ретинопатии с характерными изменениями на глазном дне и показательным снижением амплитуды b-волны ЭРГ, по динамике которой можно судить о эффекте различных нейропротекторных препаратов. Учитывая простую методику и отработанную дозу каиновой кислоты, данная модель ретинопатии представляется перспективной для экспериментальной офтальмологии.

Формула изобретения

Способ моделирования токсической ретинопатии, отличающийся тем, что в стекловидное тело глаза кролика однократно вводят 0,04 мг каиновой кислоты в 0,1 мл физиологического раствора.

РИСУНКИ

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 11.06.2006

Извещение опубликовано: 10.12.2007 БИ: 34/2007