Патент на изобретение №2283087

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МАЗИ НА ОСНОВЕ ЛИПОФИЛЬНОЙ И ГИДРОФИЛЬНОЙ ФРАКЦИЙ ИЗ КОСТОЧЕК КИЗИЛА

(57) Реферат:

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения мази, обладающей противовоспалительной и противомикробной активностью. Способ получения мази, обладающей противовоспалительной и противомикробной активностью, путем экстракции измельченных косточек кизила хлороформом в течение определенного времени с последующим удалением растворителя и выделением липофильной фракции, далее высушенный шрот из косточек кизила экстрагируют кипящей очищенной водой, удаляют растворитель и выделяют гидрофильную фазу, затем при определенной температуре сплавляют эмульгатор Т-2, вазелин и липофильную фракцию, взятые в определенном соотношении, смесь охлаждают и смешивают с очищенной подогретой до определенной температуры водой, полученную смесь смешивают с раствором, состоящим из гидрофильной фракции, глицерина и воды очищенной, взятых в определенном соотношении. Способ позволяет получить мазь с повышенной противовоспалительной и противомикробной активностью. 2 табл.

Изобретение относится к медицине и касается способов получения препаратов из растительного сырья, которое может быть использовано в качестве наружного противовоспалительного и противомикробного средства, на основе которого может быть получена мазь для наружного лечения ран, трещин прямой кишки и т.п.

Известны противовоспалительные мази, в состав которых входят растительные препараты, применяемые для лечения ран: мазь календулы, линимент алоэ и другие [РЛС-Аптекарь / Под ред. Крылова Ю.Ф. – М., 2001. – 1584 с.; Соколов С.Я. Фитотерапия и фитофармакология – М., 2000. – С.224-228.].

Наиболее близким прототипом является мазь календулы, характеризующаяся противовоспалительным, противомикробным (по отношению к стафилококкам, стрептококкам) действием.

Способ получения мази календулы заключается в смешивании 90 г эмульсии консистентной с 20 г настойки календулы. [Машковский М.Д. Лекарственные средства: В 2-х т. – М.: Медицина, 1988. – Т.2. – С.424.]. Эмульсия консистентная состоит из воды, вазелина, эмульгатора Т-2, взятых в соотношении 30:60:10. [Муравьев И.А. Технология лекарств: В 2-х т. – М.: Медицина, 1980. – Т.2. – С.497.]. Настойку календулы (1:10) получают спиртовой (70% этанол) экстракцией цветков и цветочных корзинок ноготков [Машковский М.Д. Лекарственные средства: В 2-х т. – М.: Медицина, 1988. – Т.2. – С.423.].

Недостатком мази календулы является низкая антибактериальная активность. По этой причине, при инфицированных поражениях кожи обычно практикуют комбинированное применение мази «Календула» и мазей с антибиотиками. Использование мазей с антибиотиками часто сопровождается дерматитом, аллергией, кандидамикозами [Машковский М.Д. Лекарственные средства: В 2-х т. – М.: Медицина, 1988. – Т.2. – С.199-222.].

Вместе с тем, перечень вытяжек, получаемых из растительного сырья и обладающих противовоспалительным действием, и мазей на их основе ограничен [РЛС-Аптекарь / Под ред. Крылова Ю.Ф. – М., 2001. – 1584 с.]. Следовательно, расширение арсенала препаратов растительного происхождения для наружного применения, характеризующихся противовоспалительным действием, является актуальной задачей.

Целью предлагаемого изобретения является разработка способов получения мази для наружного применения, состоящей из липофильной фракции и гидрофильной фракций косточек кизила (Cornus mas), вазелина, эмульгатора Т-2, воды очищенной, глицерина, характеризующейся противовоспалительным и противомикробным действием.

Поставленная задача достигается тем, что для получения целевого продукта липофильную фракцию из косточек кизила выделяют циркуляционной экстракцией хлороформом в течение 7-10 часов, с последующим удалением растворителя. Гидрофильную фракцию получают из шрота косточек, который высушивают, экстрагируют кипящей водой очищенной, с последующим удалением растворителя. В дальнейшем, для получения мази смешивают липофильную и гидрофильную фракции косточек кизила, вазелин, эмульгатор Т-2, воду очищенную, глицерин в соотношении 7:5:51,5:8:27:1,5.

В литературе отсутствуют данные о возможности применения липофильной и гидрофильной фракций из косточек кизила, как в качестве противовоспалительного и противомикробного средства, так и в составе мази, оказывающей противовоспалительное и противомикробное действие. Липофильную и гидрофильную фракцию из косточек кизила в составе мягкой лекарственной формы можно использовать в медицинской практике для лечения ран, трещин прямой кишки, сопровождающихся инфицированием кожи. Данные свойства явным образом не вытекают для специалиста из уровня техники. Таким образом, предлагаемые решения соответствуют критериям изобретения – «новизна», «изобретательский уровень», «промышленно применимо».

Применение в качестве экстрагентов хлороформа (этап получения липофильной фракции) и воды очищенной (этап получения гидрофильной фракции) гарантирует максимальную экстракцию липофильной и гидрофильной фракций из косточек кизила. Температурный режим, продолжительность экстракции выявлены экспериментально и гарантируют оптимальность технологического процесса.

Для выделения липофильной фракции косточек кизила измельченное сырье экстрагируют хлороформом в аппарате типа «Сокслет» в течение 7-10 часов до полного истощения сырья. После чего хлороформ удаляют путем испарения под вакуумом при температуре 30-35°С.

Шрот косточек экстрагируют водой при температуре 100°С. Воду удаляют путем испарения под вакуумом при температуре 45°С.

В фарфоровой или эмалированной емкости при температуре 70-75°С сплавляют 8,0 частей эмульгатора Т-2; 51,5 частей вазелина, 7,0 частей липофильной фракции из косточек кизила. Смесь охлаждают до температуры 50-55°С и смешивают с 25,5 частями воды очищенной, подогретой до температуры 50-55°С. Полученную смесь смешивают с раствором, состоящим из 5 частей гидрофильной фракции косточек кизила, 1,5 частей глицерина и 1,5 частей воды очищенной.

Пример конкретного выполнения способа.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц не более 0,25 мм. Около 100 г косточек кизила (точная навеска) взвешивают (точная навеска). Сырье экстрагируют в аппарате типа «Сокслет» в течение 7-10 часов до полного извлечения липидов и отрицательной реакции с 0,1% раствором Судана III или отсутствия сине-голубой флуоресценции в УФ-свете.

Параллельно определяют влажность сырья. Все измерения проводят с точностью до 0,0002 г.

Извлечение упаривают под вакуумом до полного удаления хлороформа. Выход липофильной фракции составляет 7,1% от массы воздушно-сухого сырья.

Шрот косточек заливают 1395 мл воды очищенной и экстрагируют при температуре 100°С в течение 60 минут. Полученное извлечение фильтруют через фильтровальную бумагу. Шрот на фильтре промывают водой, нагретой до 100°С, до отрицательной реакции с раствором железа (III) хлорида. Извлечение высушивают под вакуумом при температуре 40-45°С. Выход гидрофильной фракции составляет 10,2% от массы воздушно-сухого сырья.

В фарфоровой или эмалированной емкости при температуре 70-75°С сплавляют 8,0 частей эмульгатора Т-2; 51,5 частей вазелина, 7,0 частей липофильной фракции из косточек кизила. Смесь охлаждают до температуры 50-55°С и смешивают с 25,5 частями воды очищенной, подогретой до температуры 50-55°С. Полученную смесь смешивают с раствором, состоящим из 5 частей гидрофильной фракции косточек кизила, 1,5 частей глицерина и 1,5 частей воды очищенной.

При изучении противовоспалительных, ранозаживляющих, противомикробных свойств целевого продукта для сравнения изучали: мазь на основе липофильной и гидрофильной фракций из косточек кизила (состав: липофильной фракции косточек кизила 7 ч, гидрофильной фракции косточек кизила 5 ч, вазелина 51,5 ч, эмульгатора Т-2 8 ч, воды очищенной 27 ч, глицерина 1,5. ч), основу Кутумовой (состав: вазелина 60 ч, эмульгатора Т-2 10 ч, воды очищенной 30 ч), мазь «Календула» 10% промышленного производства и проводили 2 серии эксперимента.

Противовоспалительную активность целевого продукта изучали на модели каолинового отека у крыс [Гацура В.В. Методы первичного фармакологического исследования М.: Медицина, 1974. – С.125.]. Эксперимент проводили на белых беспородных крысах обоего пола, содержащихся в общевиварийном режиме, массой 200-220 г. В качестве флогогенного агента использовали 10%-ную взвесь каолина и вводили ее субплантарно. Исследуемые мази (мазь на основе липофильной и гидрофильной фракций из косточек кизила, основу Кутумовой, мазь «Календула» 10% промышленного производства) наносили, не втирая, до введения каолина, перед каждым измерением, а также после измерения объема лапки. Контрольная группа оставалась нелеченой. Объем конечности крыс измеряли с помощью прибора «Онкометра» до и после введения каолина через 5, 24, 48 часов. Противовоспалительный эффект мазей оценивали по объему жидкости вытесненной при погружении в нее лапки крысы.

Статистическую обработку результатов всех серий опытов проводили с использованием коэффициента Стьюдента. Результаты исследований представлены в примерах 1-3 и таблице 1.

Пример 1.

На фоне лечения мазью на основе липофильной и гидрофильной фракций косточек кизила величина отека лапок крыс через 5 часов наблюдений уменьшилась в 1,8 раза, через 24 часа в 2,7 раза по сравнению с контрольной группой. В последующие часы проведения опыта сравнительная картина сохранялась (таблица 1).

Пример 2.

На фоне лечения основой Кутумовой величина отека лапок крыс через 5 часов и 24 часа наблюдений практически не уменьшилась. Через 48 часов наблюдений величина отека превышала в 1,6 раза отек, по сравнению с контрольной группой (таблица 1).

Пример 3.

На фоне лечения мазью «Календула» величина отека лапок крыс через 5 часов наблюдений увеличилась в 1,1 раза, затем отек начал снижаться, но и через 24 часа он превышал таковой в 1,1 раза по сравнению с контрольной группой. В последующие часы проведения опыта сравнительная картина сохранялась (таблица 2).

При исследовании антимикробной активности целевого продукта использовали метод, основанный на способности лекарственных веществ диффундировать в агар, зараженный тест-культурами микроорганизмов, и подавлять рост последних [Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О.Биргера. – М.: Медицина, 1982. – С.172-177.]. Определение активности изучаемых составов мазей проводили в чашках Петри одинакового диаметра с ровным и плоским дном. В чашки, устанавливаемые горизонтально, наливали по 15 мл расплавленного питательного агара. Слой агара в чашке Петри заливали 1-2 мл взвеси испытуемого микроба в физиологическом растворе. Затем излишек взвеси полностью удаляли, подсушивали поверхность агара в течение 30 минут. Затем сверлом (6 мм диметром) пробуравливали 4-6 отверстий («колодцев») на расстоянии 2,5 см от центра и на одинаковом расстоянии друг от друга, «колодцы» заполняли образцами мазей. Чашки оставляли при комнатной температуре на 30 минут, после чего чашки ставили в термостат при температуре 37°С, не переворачивая, строго горизонтально, чтобы получить круглые зоны. Через 16 часов измеряли зоны угнетения. Результаты эксперимента представлены в таблице 2 и примерах 4-6.

Пример 4.

Мазь на основе липофильной и гидрофильной фракций косточек кизила вызывает угнетение роста микроорганизмов Staphylococcus abony ГИСК 103/39 – 15,0 ± 2,0 мм; Staphylococcus aureus ATTC 6538 – Р – 15,0 ± 1,0 мм; Staphylococcus epidermidis Wood-46 – 16,0 ± 2,0 мм; Esherichia coli ATCC 25922 – 18,0 ± 3,0 мм; Shigella flexneri 266 – 19,0 ± 2,0 мм; Bacillus subtilis L₂ – 19,0 ± 2,0 мм; Bacillus anthracoides 1 – 16,0 ± 2,0 мм (таблица 2).

Пример 5.

Основа Кутумовой не вызывает угнетения роста микроорганизмов Staphylococcus abony ГИСК 103/39; Staphylococcus aureus ATTC 653 8-P; Staphylococcus epidermidis Wood-46; Esherichia coli ATCC 25922; Shigella flexneri 266; Bacillus subtilis L₂; Bacillus anthracoides 1 (таблица 2).

Пример 6.

Мазь «Календула» не вызывает угнетения роста микроорганизмов Staphylococcus abony ГИСК 103/39; Staphylococcus aureus ATTC 6538-P; Staphylococcus epidermidis Wood-46; Esherichia coli ATCC 25922; Shigella flexneri 266; Bacillus subtilis L₂; Bacillus anthracoides 1 (таблица 2).

Таблица 1.
Динамика изменения величины отека лапок крыс на фоне исследуемых мазей
Объект исследования	Объем лапок крыс (М±m, %)
	Исходный	Через 5 часов	Через 24 часа	Через 48 часов
1	2	3	4	5
Контроль	0,94+0,05*	+90,87±15,10*	+82,78±5,37*	+46,12±3,85*
Основа Кутумовой	1,02±0,07*	+90,39±6,90*	+73,86±10,13	+74,86±4,25*
Мазь на основе липофильной и гидрофильной фракций из косточек кизила	1,00±0,05*	+50,43±8,30*	+29,80±7,40*	+20,10±3,99*
Мазь «Календула»	0,88±0,03*	+103,47±13,81*	+87,58±20,45*	+69,89±15,06*
Примечание: *-результаты достоверны (р0,05).

Формула изобретения

Способ получения мази, обладающей противовоспалительной и противомикробной активностью, путем экстракции растительного сырья и последующего смешивания экстракта с эмульгатором-Т2, вазелином и водой, отличающийся тем, что растительное сырье-косточки кизила измельчают до размера частиц не более 0,25 мм, экстрагируют хлороформом в течении 7-10 ч с последующим удалением растворителя и выделением липофильной фракции, далее высушенный шрот из косточек кизила экстрагируют кипящей очищенной водой, удаляют растворитель и выделяют гидрофильную фазу, затем при температуре 70-75°С сплавляют эмульгатор Т-2, вазелин и липофильную фракцию в соотношении 8:51,5:7, смесь охлаждают до температуры 50-55°С и смешивают с 25,2 частями очищенной воды, подогретой до температуры 50-55°С, полученную смесь смешивают с раствором, состоящим из гидрофильной фракции, глицерина и воды очищенной, взятых в соотношении 5:1,5:1,5.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 13.07.2007

Извещение опубликовано: 27.02.2009 БИ: 06/2009