Патент на изобретение №2276364

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ИСХОДА ТРАВМАТИЧЕСКОГО СДАВЛЕНИЯ ГОЛОВНОГО МОЗГА

(57) Реферат:

Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использовано для прогнозирования исхода травматического сдавления головного мозга. Сущность изобретения состоит в том, что в гепаринизированной венозной периферической крови исследуют поверхностные рецепторы лимфоцитов методом непрямой иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител серии ИКО и при относительном содержании CD3⁺ клеток ниже 30%, CD4⁺ клеток ниже 12,5%, а CD95⁺ клеток ниже 7,7% прогноз оценивают как неблагоприятный. Техническим результатом является повышение точности прогноза и упрощение способа.

Предлагаемое изобретение относится к медицине, в частности к способам предсказания исхода травматического сдавления головного мозга внутричерепными супратенториальными гематомами.

Известен способ прогнозирования исходов тяжелой черепно-мозговой травмы со сдавлением головного мозга внутричерепными гематомами, основанный на анализе 11 клинических признаков с 3-6 градациями, описанный в статье Н.Б.Клименко “Прогноз исходов тяжелой черепно-мозговой травмы”, журнал “Нейрохирургия” 2001, №2, с.19-23. На основании подстановки значений в формулу, полученную в ходе регрессионного анализа, и соответствующего результата выносят суждение о благоприятном или неблагоприятном прогнозе исхода заболевания.

Однако вышеописанный метод имеет недостатки, так как часть анализируемых признаков является качественными, а не количественными параметрами, в связи с чем их оценка врачом-нейрохирургом может быть в достаточной степени субъективной, что влечет за собой неверное присвоение балла тому или иному признаку и в результате неадекватное суждение о возможном исходе патологического процесса.

Наиболее близким к предлагаемому техническому решению является способ прогнозирования исхода лечения черепно-мозговой травмы, описанный в патенте №2183834, кл. G 01 N 33/52, 33/68, 33/48, авторы: Базарный В.В., Ковалева А.В., Данилов Е.П., Беспалова В.В.

Этот способ осуществляют путем исследования ликвора, причем в первые 5-7 дней после травмы определяют число нейтрофилов, уровень мочевины, активность лактатдегидрогеназы, щелочной фосфатазы и, если число нейтрофилов более 10 в 1 мм³, уровень мочевины выше 10 ммоль/л, активность лактатдегидрогеназы выше 30 МЕ/л, а щелочной фосфатазы выше 5 МЕ/л, прогнозируют неблагоприятный исход лечения черепно-мозговой травмы.

Однако известный способ трудно применим в послеоперационном периоде тяжелой черепно-мозговой травмы, так как в условиях сохраняющегося отека головного мозга забор даже малого количества цереброспинальной жидкости (1-1,5 мл при поясничном проколе или из желудочкового дренажа) способен усугубить градиент внутричерепного давления и привести к вклинению ствола мозга и смерти пациента. Кроме того, при определении количества иммунокомпетентных клеток – нейтрофилов не учитывается их функциональное состояние и, соответственно, не может быть отражена реальная картина состояния иммунореактивности организма.

Задача предлагаемого изобретения – объективизация анализируемых признаков, уменьшение инвазивности исследования и упрощение оценки показателей, на основании которых выносят суждение о прогнозе.

Эта задача решается за счет того, что в качестве биологической жидкости используют гепаринизированную венозную периферическую кровь, которую центрифугируют, исследуют поверхностные рецепторы лимфоцитов методом непрямой иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител серии ИКО, и если относительное содержание CD3⁺ клеток ниже 30%, CD4⁺ клеток ниже 12,5%, а CD95⁺ клеток ниже 7,7%, то прогноз оценивают как неблагоприятный.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Забор венозной крови производят в течение первых трех суток после операции ежедневно, в дальнейшем не реже одного раза в неделю до момента выписки из стационара или смерти пациента.

Забор материала для исследования проводили в утренние часы, после завтрака. Гепаринизированную кровь – 5 ЕД/мл, взятую из периферической вены в количестве 5 мл, разводят забуференным физиологическим раствором рН=7,4 в соотношении 1:1 и наслаивают на 3 мл фиколл-тразографовой смеси плотностью 1,077 мг/мл. После этого проводят центрифугирование при 200 g в течение 40 минут. Лимфоциты, собранные в интерфазе, отбирают в чистую сухую пробирку, после чего их три раза отмывают в избытке забуференного физиологического раствора.

Поверхностные рецепторы лимфоцитов и количественное содержание клеток, относящихся к основным субпопуляциям лимфоцитов, определяют с помощью моноклональных антител (МКА) серии ИКО:

– ИКО-90 (против CD3 антигена),

– ИКО-86 (против CD4 антигена)

– ИКО-160 (против CD95 антигена).

Суспензию исследуемых клеток объемом 20-25 мкл (концентрация 2-3×10⁶ кл/мл) наносят в лунку-отверстие в парафине, предварительно наплавленном на предметное стекло, инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре во влажной камере. После отбора среды в лунки вносят по 20-50 мкл рабочего раствора моноклональных антител и инкубируют 30 минут при комнатной температуре во влажной камере. После инкубации клетки отмывают не менее пяти раз в гистологических стаканчиках в забуференном физиологическом растворе рН=7,4 или растворе Хенкса. В отмытые лунки наносят по 20-50 мкл рабочего раствора фрагментов антител против иммуноглобулинов мыши, меченных ФИТЦ, и инкубируют 30 минут в холодильнике при температуре +4°С с последующим отмыванием клеток 5 раз забуференным физиологическим раствором или раствором Хенкса. Далее вносят в лунки 50%-ный раствор глицерина в физиологическом растворе и сразу производят подсчет антиген-положительных клеток при длине волны излучения 495 нм и эмиссии 525 нм. Подсчитывают число светящихся по периферии лимфоцитов на 100 клеток. По степени снижения относительного количества CD3⁺, CD4⁺, CD95⁺ лимфоцитов судят о нарушениях в иммунной системе, характерных для различных исходов травматического сдавления головного мозга, и если относительное содержание СD3⁺ клеток ниже 30%, CD4⁺ клеток ниже 12,5%, а CD95⁺ клеток ниже 7,7%, то прогноз оценивают как неблагоприятный.

Клинические примеры

1. Больной Ж. 49 лет (история болезни №8061.01).

Диагноз: Тяжелая открытая черепно-мозговая травма. Ушиб головного мозга тяжелой степени. Сдавление головного мозга острой субдуральной гематомой лобно-теменно-височной области справа и острой внутримозговой гематомой левой височной доли. На вторые сутки после травмы и операции в венозной крови определяли концентрацию CD3⁺, CD4⁺, CD95⁺ лимфоцитов. СО3⁺ клеток – 15%, CD4⁺ клеток – 5%, а CD95⁺ клеток – 7%. Погиб на 3-и сутки после получения травмы и операции – двухсторонней трепанации черепа, удаления острых субдуральной и внутримозговой гематом. Причина смерти – дислокация мозга с грубыми циркуляторными нарушениями в стволовых отделах.

2. Больной С. 51 года (история болезни №51.02).

Диагноз: Закрытая черепно-мозговая травма. Ушиб головного мозга средней степени. Сдавление головного мозга под острой эписубдуральной гематомой лобно-теменно-височной области слева. На вторые сутки после операции в венозной крови определяли концентрацию CD3⁺, CD4⁺, CD95⁺ лимфоцитов. СD3⁺ клеток – 23%, CD4⁺ клеток – 18%, а CD95⁺ клеток – 9%. Больной выжил и выписан на 21-е сутки после получения операции – трепанации черепа слева, удаления острых эпидуральной и субдуральной гематом.

Ретроспективный анализ историй болезни пациентов с травматическим сдавлением головного мозга внутричерепными супратенториальными гематомами позволил апробировать предложенный тест раздельно в группе выживших и умерших больных. В группе умерших результаты тестов оказались ниже указанных значений у 28 пострадавших из 30 обследованных, что составило 93,4%. У 1 умершего (3,3%) значения оказались равны указанным, и только у одного пациента прогноз благоприятного исхода оказался ошибочным, что составило 3,3%. Таким образом, эффективность предлагаемого способа прогнозирования неблагоприятного исхода лечения травматического сдавления головного мозга составляет 0,93, что свидетельствует о его высокой надежности.

Апробирование способа на массиве историй болезни выживших пациентов показало, что в 79,4% случаев (у 27 больных из 34 обследованных пациентов) адекватно прогнозируется благоприятный исход патологического процесса, и лишь у одного пациента отмечено совпадение значений с указанными (2,9%). Ошибочная диагностика неблагоприятного исхода наблюдалась в 17,7 случаев (6 человек).

Таким образом, гипердиагностика летального исхода (17,7%), которая встречалась в 5,3 раза реже, чем правильное предсказание гибели пострадавших (93,4%), дает основание врачу-нейрохирургу отнести подобных пострадавших к группе риска неблагоприятного исхода, максимально усилить к ним внимание в плане своевременного, систематического и всестороннего обследования и оптимизации параметров интенсивной терапии.

Вышеизложенное подтверждает адекватность и полезность предложенного метода для прогнозирования неблагоприятного исхода травматического сдавления головного мозга внутричерепными супратенториальными гематомами. Разработанный способ является, с одной стороны, менее “агрессивным” в отношении пациента. Способ информативен, выполним в условиях научного медицинского учреждения и может использоваться в исследовательской и лечебной практике.

Формула изобретения

Способ прогнозирования исхода травматического сдавления головного мозга, включающий исследование биологической жидкости, отличающийся тем, что в качестве биологической жидкости используют гепаринизированную венозную периферическую кровь, которую центрифугируют, исследуют поверхностные рецепторы лимфоцитов методом непрямой иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител серии ИКО, и если относительное содержание CD3⁺ клеток ниже 30%, CD4⁺ клеток ниже 12,5%, a CD95⁺ клеток ниже 7,7%, то прогноз оценивают как неблагоприятный.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 02.11.2006

Извещение опубликовано: 20.06.2008 БИ: 17/2008