Патент на изобретение №2155589

(54) ПРИМЕНЕНИЕ 4′-ЙОДО-4′-ДЕОКСИДОКСОРУБИЦИНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АМИЛОИДОЗА, СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ АМИЛОИДОЗА

(57) Реферат:

Предложены новые средство для лечения амилоидоза и способ на его основе. В качестве такого средства предложен 4′-йод-4′-деоксидоксорубицин и его фармацевтически приемлемые соли. Показано, что средство замедляет или предотвращает отложение амилоида и облегчает действие существующих протеолитических механизмов по разложению и резорбции амилоида. Это приводит к продолжительному, в среднем до 6 месяцев, клиническому улучшению состояния пациентов после введения средства. 2 с. и 1 з.п.ф-лы.

Данное изобретение относится к новому применению известного антрациклина с противоопухолевой активностью.

Более конкретно – изобретение относится к новому применению 4′-йод-4′-деоксидоксорубицина и его фармацевтически приемлемых солей при лечении амилоидоза.

4′-Йод-4′-деоксидоксорубицин (IDX) формулы

описан в Патенте США 4 438 105 Suarato и др. вместе со способом его получения.

Указанный антрациклин, который отличается от доксорубицина тем, что гидроксил сахара замещен в положении 4 одним атомом йода, обладает высокой противоопухолевой активностью.

Термин “амилоидоз” относится к различным болезненным состояниям, обладающим в качестве общей характерной черты тенденцией определенных белков к полимеризации и осаждению во внеклеточном пространстве в виде нерастворимых фибрилл, вызывая структурные и функциональные повреждения органов и тканей.

Хотя они содержат огромное разнообразие белковых субъединиц, тем не менее различные типы амилоидов имеют одинаковое ультраструктурное строение в виде переплетающихся -пластов.

Фибриллы образуются из отдельных легких цепей моноклональных иммуноглобулинов многочисленных других амилоидогенных белков, таких как протеин AA, транстиретин, -2-микроглобулин, бета-протеин, которые вызывают амилоидоз.

Итак, неожиданно было установлено, что IDX и, в частности, его гидрохлорид, является активным в том смысле, что он вызывает разложение амилоидных фибрилл.

Взаимодействие лекарственный препарат/фибрилла является основой успешного клинического результата, наблюдаемого у пациентов, больных амилоидозом. В связи с тем, что известна структура их в виде бета-пластов, общая для всех видов амилоидоза, 4′-йод-4′-деоксидоксорубицин представляется перспективным для лечения всех видов амилоидоза.

Экспериментальные данные, относящиеся к соединению IDX с амилоидными фибриллами различных биохимических композиций
Предварительно определенное количество амилоидных фибрилл (1 мг/мл) термостатировалось с различными концентрациями гидрохлорида IDX.

Инкубирование осуществлялось в физиологическом растворе в течение 2 часов, при этом система подвергалась постоянному спокойному перемешиванию.

Затем фибриллы центрифугировались при 5000 об/мин и проводилось определение оптической плотности всплывшей части при 478 нм.

Процедура промывания повторялась три раза.

После окончательного этапа центрифугирования осуществлялся количественный и качественный анализ связи с фибриллами с использованием таблетирования.

Количественный анализ:
Таблетка суспендировалась в фосфатном буферном растворе (ФБР) и затем термостатировалась в течение ночи с ферментом протеазы. Такая обработка вызывает полный гидролиз белков.

Количество связанного фибриллами IDX может быть измерено в всплывшем слое жидкости спектрофотометрированием при 478 нм.

Испытания показали связывание 41 мг IDX на 1 мг фибрилл.

Приведенные данные были получены при исследовании амилоидных фибрилл двух пациентов (ND и CAT), страдающих амилоидозом.

Качественный анализ:
Качественный анализ, проведенный с использованием иммунофлюоресцентного микроскопа, был осуществлен с применением спектрофлюориметрических свойств IDX. Был определен состав из следующих фибрилл:
легкие иммуноглобулиновые цепочки (AL)
амилоид A (AA)
₂ -микроглобулин (ABZM)
-протеин (AB)
транстиретин (Вар. Met 30) (ATTR).

Фибриллы инкубировались с 10^-7 MIDX и с DOX в 0,15 М растворе NaCl в течение 1 часа и экстенсивно промывались 0,15 М раствором NaCl. Характерная антрациклиновая флуоресценция оценивалась возбуждением при 484 нм и отсчетом при 610 нм.

Все фибриллы, инкубированные с IDX, показали интенсивную флуоресценцию, в то время как соответствующие фибриллы, термостатированные с DOX, не обнаружили заметной флуоресценции.

Ингибирование образования инсулиновой фибриллы “in vitro”
10 мг коммерческого бычьего инсулина, суспендированного в 1 мл (1.7410^-3 М) 5% уксусной кислоты, инкубировались в течение двух часов при 85^oC до образования прозрачного геля. После замораживания при -80^oC, нагревания до 37^oC и повторения этой процедуры 5 раз фибриллы подвергались центрифугированию в микроцентрифуге.

Производилось добавление IDX и DX в различных молярных отношениях к фибриллярному белковому предшествующему соединению (инсулину). (IDX-DX: инсулин; 1:1, 1:2, 1:4, 1:8).

IDX, а не DX, полностью ингибировал образование амилоидных фибрилл при молярных соотношениях 1:1 и 1:2 и частично при молярном отношении 1: 4.

Испытания показывают, что IDX ингибирует фибриллогенез “in vitro”.

Экстракция гликоламиногликанов (GaGs) из амилоидных фибрилл и оценка их связывания применением IDX
GAGs выделялись из амилоидных фибрилл с применением ионообменной хроматографии в присутствии 6М мочевины. Метод осуществлялся с использованием жидкостной хроматографии быстрого разрешения с колонкой Mono Q (Pharcmacia).

Фибриллы растворялись в 50 мМ фосфатного буфера с pH 5, содержащего СМ мочевины и 0,2% CHAPS.

Выделение производилось при 0 – 5 молярном градиенте NaCl. При использовании этого метода белковые фибрилльные компоненты выделялись из гликозаминогликанов (дерматан и гепаран сульфат) без какой-либо необратимой денатурации.

Выделенный белковый компонент подтверждает высокое сродство для IDX, наблюдаемое в природных фибриллах.

Результаты этих испытаний показывают, что гликозаминогликаны, хотя и являются наиболее распространенными компонентами амилоидных фибрилл, не являются необходимыми для связывания с IDX.

На основе полученных результатов можно сделать заключение, что IDX и его фармацевтически приемлемые соли могут успешно использоваться для лечения пациентов, страдающих от амилоидоза.

Прием осуществляется парентерально в виде соответствующих инъецируемых водных растворов.

Названные растворы могут быть получены с применением стандартного метода в присутствии обычных носителей и/или разбавителей (см., например, публикацию L. Guanni и др. “Активность и токсичность 4′-йод-4′- деоксидоксорубицина у пациентов с прогрессирующим раком грудной железы” Annals of Oncology 2:719-725, 1991).

Дозы могут варьироваться от 5 до 150 мг/м² площади тела в неделю при внутривенном введении. Предпочтительными вариантами дозировок являются от 15 до 30 мг/м² площади тела в неделю при внутривенном введении в течение двух-четырех недель.

Ниже даются основные клинические данные, касающиеся 5 пациентов.

ПАЦИЕНТ N 1
Этот случай относится к пациенту мужского пола (DEP) 45 лет, страдающему множественной миеломой (IgA) и амилоидозом AL с широко распространенным кожным и мышечным разложением.

В июле 1991 г. он перенес аутогенную пересадку костного мозга.

Ему была назначена внутривенная дозировка IDX в 190 мг в течение 4 часов.

Уже на следующее утро у пациента наблюдалось значительное улучшение кожи и подвижности конечностей. В течение следующих дней наблюдалось большое количество выделяемых с мочой амилоидозных белковых фрагментов наряду со значительным снижением амилоидных отложений в коже и отложений на уровне межжелудочковой сердечной перегородки (с 13 до 10 мм).

Ячеистое улучшение в подвижности конечностей и в амилоидных отложениях сохранялoсь в течение следующих шести месяцев без дальнейшего лечения.

ПАЦИЕНТ N 2
Этот случай касается пациента мужского пола (MAN) 57 лет, страдающего от амилоидоза AL(IgA) с обширным поражением желудочно-кишечного тракта (8-10 диарейных опорожнений в день), подвергшемуся значительной потере веса в 15 кг за шесть месяцев (вес 64 кг) и с признаками нефротического симптомокомплекса (протеинурия 7 г/день).

Он подвергался лечению шестью циклами мельфалана и преднизона, закончившемуся в январе 1991 г. без какого-либо результата. В феврале 1992 г. его пролечили двумя дозами (80 и 100 мг/м²) IDX.

Непосредственно после лечения наблюдались ячеичное ухудшение диареи, частично регулируемое соматоститином (зарегистрированный товарный знак), и протеинурии (41 г/день), однако в течение последующих месяцев состояние внутренних органов брюшной полости постепенно улучшалось с ячеистым снижением в кишечных опорожнениях (3-4 раза/день).

Пациент вновь восстановил вес (68 кг) и протеинурия восстановилась приблизительно до 4 г/день.

Общее состояние пациента значительно улучшилось до такой степени, что он имел возможность вернуться к работе.

ПАЦИЕНТ N 3
Этот случай относится к пациенту женского пола (GAB), страдающему от амилоидоза (IgA), главным образом, почечного расположения [нефротический симптомокомплекс с протеинурией (7 г/день)] и с селезеночным расположением, диагносцированным в 1991 г.

С декабря 1991 г. по май 1992 г. пациент подвергался лечению алкилирующими агентами без какого-либо улучшения. В июне пациенту было сделано сцинтиграфическое исследование на амилоидные отложения с применением ¹³¹I-SAP, которое подтвердило их почечное и селезеночное расположение. В июле 1992 г. пациент подвергся лечению IDX при внутривенной дозе 30 мг/м² в неделю в течение двух недель и 15 и 20 мг/м² в последующие два приема.

После первоначального повышения протеинурия снизилась до 6 г/день, и эта величина сохранялась в течение последующих шести месяцев.

ПАЦИЕНТ N 4
Этот случай относится к пациенту мужского пола (GRO) в возрасте 70 лет, страдающему плазмацитомой и амилоидозом AL (Ig GK).

Диагноз был поставлен в июле 1991 г., когда пациент начал жаловаться на интенсивную боль в крестцовой области, распространяющуюся на левую нижнюю конечность, такую, что создавалась трудность при хождении. Инструментальное исследование показало присутствие твердой массы диаметром около 10 см, определяющей разрушение одной стороны крестца и левой подвздошной области, обладающей распространяющимся действием в тазовой полости, проникающей в позвоночный канал и пропитывающей ягодичные мышцы.

Исследование биопсии показало наличие амилоидомы.

Между октябрем 1991 и январем 1992 г. пациент подвергался лечению кобальтом в количестве 75 сеансов с общим облучением 50 Грей, а в марте 1992 г. был начат цикл химиотерапевтического лечения циклофосфамидом при 500 мг/день в течение 5 дней в месяц с общим количеством в 6 циклов, однако без какого-нибудь радиографически очевидного снижения размера амилоидомы или уменьшения болевой симптоматологии. В ноябре 1992 г. было проведено сцинтиграфическое исследование амилоидных отложений с применением ¹³¹I-SAP, которое подтвердило нахождение радиоизотопа в крестцовом отделе.

Затем пациент был подвергнут лечению с использованием IDX при внутривенной дозировке 30 мг/м² в течение двух недель и 20 мг/м² в течение следующих двух недель, что привело к почти немедленному снижению в болевой симптоматологии, так, что это побудило его к отказу от приема анальгетиков.

Ультразвуковое диагностическое исследование, проведенное в январе 1993 г. , показало снижение массы ягодичного инфильтрата (с 12 см до 5 см), в то время как магнитный резонанс тазовой области показал снижение диаметра амилоидомы приблизительно с 10 см до 8 см.

Улучшение в болевой симптоматологии сохранялось в течение 14 месяцев после лечения IDX. Сцинтиграфическое исследование амилоидных отложений, проведенное с использованием ¹³¹I-SAP через месяц после лечения IDX и спустя 14 месяцев после него, показало постепенное, но полное рассасывание амилоидных отложений.

ПАЦИЕНТ N 5
Этот случай относится к пациенту мужского пола (LUS) в возрасте 48 лет, страдающему амилоидозом AL(CLL), размещенным, в основном, в почечной и селезеночной области. Нарушения начались в сентябре 1992 г. с появления опускающихся отеков. Биологическое исследование анализа тканевой жидкости показало присутствие большой протеинурии (12,6 г/день), дислипемии и электрофоретические серопротеиновые симптомы, совместимые с нефротическим синдромом.

В течение сентября пациент подвергся исследованию с применением ультразвуковой почечной биопсии, которая показала присутствие амилоидных скоплений на уровне клубочковых и интерстициальных сосудов. Было начато лечение кортикостероидными препаратами, но вскоре оно было прервано из-за неэффективности. В январе 1993 г. пациент подвергся сцинтиграфическому обследованию на амилоидные отложения с применением ¹³¹I-SAP, которое выявило значительное скопление радиоизотопа на селезеночном и почечном уровнях.

В течение февраля пациент подвергся лечению IDX посредством внутривенных вливаний при дозировке в 30 мг/м² при общем назначении 4-х приемов.

К марту 1993 г. спускающиеся отеки явно уменьшились, измерения ежедневной протеинурии составили приблизительно 6 г/день, а ультразвуковой контроль показал, что размеры селезенки снизились с 12,3 см (продольный диаметр) до 11,3 см.

Формула изобретения

1. Применение 4′-йод-4′-деоксидоксорубицина и его фармацевтически приемлемых солей в качестве средства индукции распада фибрилл амилоида и ингибирования фибриллогенеза при лечении амилоидоза.

2. Способ лечения амилоидоза за счет индукции распада фибрил амилоида и ингибирования фибриллогенеза, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества 4′-йод-4′-деоксидоксорубицина или его фармацевтически приемлемых солей.

3. Способ лечения по п.2, отличающийся тем, что 4′-йод-4′-деоксидоксорубицин вводят пациенту внутривенно при еженедельной дозировке, варьирующейся от 15 до 30 мг/м² площади тела в виде раствора, приготовленного стандартным способом, содержащего фармацевтически приемлемые носители или разбавители, в течение периода времени в интервале от 2 до 4 недель.

Приоритет по пунктам:
06.08.93 по п.1;
31.03.94 по пп.2, 3.