Патент на изобретение №2273855

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТЯЖЕЛОЙ ЦЕРВИКАЛЬНОЙ ДИСПЛАЗИИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области клинической лабораторной диагностики и может быть использовано для диагностики тяжелой дисплазии шейки матки. Сущность способа состоит в том, что в слизи цервикального канала определяют концентрацию -трансформирующего фактора роста и при значении от 240 пг/мл диагностируют тяжелую дисплазию шейки матки. Техническим результатом является повышение степени достоверности диагностики диспластических процессов шейки матки. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики тяжелой цервикальной дисплазии.

Проблема рака шейки матки на протяжении двух десятилетий остается достаточно актуальной [1]. Это связано не только с устойчиво высокой заболеваемостью раком, но и с трудностями диагностики предраковых состояний шейки матки, которые имеют прямое отношение к возникновению опухолей. По данным ВОЗ (Сидней, 1996) рак шейки матки – полностью предотвратимое заболевание, если оно выявлено на стадии предрака. В то же время следует отметить, что четкие морфологические критерии, позволяющие определить потенцию диспластического поражения шейки матки, в настоящее время отсутствуют [2]. Новым этапом в развитии современных методов диагностики патологии шейки матки является поиск маркеров развития предраковых процессов цервикального эпителия.

Известен способ цитологической диагностики дисплазии шейки матки [3], основанный на морфологическом исследовании эпителиальных клеток слизистой оболочки шейки матки. Дисплазия характеризуется интенсивной пролиферацией клеток с появлением в них атипии без вовлечения в процесс базальной мембраны и поверхностного эпителия. Достоверность этого метода составляет не более 50-70%, что связано с отсутствием возможности прицельного цитологического исследования именно пораженного участка слизистой [4].

Известен способ кольпоскопической диагностики предрака шейки матки, основанный на визуализации цервикального эпителия при увеличении микроскопом в 7-28 и более раз [5]. Однако кольпоскопия не всегда является специфичным методом исследования, поскольку в зоне атипичного эпителия может одновременно присутствовать и эктопия, и дисплазия различной степени выраженности, и преинвазивный рак, что закономерно сопровождается трудностями дифференциальной диагностики [6]. Кроме того, одним из основных недостатков этого метода является отсутствие непосредственного морфологического контроля. Точность этого способа диагностики составляет 50-70% [7].

Известен метод гистологической диагностики дисплазии шейки матки [8]. Метод связан с необходимостью проведения биопсии. Для получения биоптата применяют скальпель, диатермоэлектро- или СО₂-конизатор. Биоптированные участки исследуются с использованием ступенчатых или серийных срезов, которые обрабатываются различными методами окраски (по Папаниколау, полихромным метиленовым синим и пр.). Этот способ, во-первых, вследствие инвазивности не может применяться при воспалительных процессах шейки матки. Во-вторых, информативность гистологического исследования зависит от точности выбора участка для биопсии и правильности техники взятия материала. В-третьих, этот метод исследования не может использоваться динамически при текущей работе с пациентками [9].

Известен способ диагностики предракового поражения шейки матки, основанный на увеличении митотической активности клеток при эпителиальной дисплазии [1]. Диагностическая информативность этого метода ограничена необходимостью проведения биопсии. Кроме того, митотическая активность эпителия шейки матки может значительно варьировать при вирусном ее инфицировании [2].

Известен способ диагностики дисплазии шейки матки по определению иммуноглобулинов в цервикальной слизи, взятый в качестве прототипа. Иммуноанализ проводится в две стадии. На первой стадии калибровочные пробы с известной концентрацией иммуноглобулина и исследуемые образцы цервикальной слизи инкубируются в лунках стрипированного планшета с иммобилизированными моноклональными антителами (МКАТ) к иммуноглобулину. Затем планшет отмывают. На второй стадии связавшийся в лунках иммуноглобулин обрабатывают конъюгатом МКАТ к иммуноглобулину с пероксидазой. После отмывания конъюгата образовавшиеся иммунные комплексы «иммобилизированные МКАТ-иммуноглобулин-конъюгат» выявляют ферментативной реакцией пероксидазы с перекисью водорода в присутствии хромогена. Интенсивность окраски хромогена пропорциональна концентрации иммуноглобулина в анализируемом образце. После остановки пероксидазной реакции стоп-реагентом результаты учитываются фотометрически [10]. Снижение уровня Ig_A и Ig_G в цервикальной слизи связано со степенью диспластических изменений эпителия шейки матки: чем выше степень дисплазии, тем ниже уровень иммуноглобулинов [11]. Однако подобные изменения гуморальных факторов локальной защиты слизистой оболочки шейки матки не отражают истинного состояния цервикального эпителия. Известно, что факторы местного иммунитета тесно взаимосвязаны с постоянством цервико-вагинального биоценоза. Любой шеечно-влагалищный дисбиоз сопровождается дефицитом локальных факторов защиты, который еще более усугубляет вагинальную экопатологию [4].

Наиболее близким по технической сущности является способ диагностики цервикальной дисплазии по величине экспрессии -трансформирующего фактора роста в эпителии шейки матки, взятый в качестве прототипа [12].

Однако способ не позволяет определить тяжесть заболевания.

Для повышения степени достоверности диагностики диспластических процессов шейки матки проводят определение концентрации -трансформирующего фактора роста (ТФР-) в цервикальной слизи пациентки и по возрастанию содержания ростового фактора судят о тяжести предракового поражения шейки матки.

Способ осуществляют следующим образом. Цервикальную слизь пациентки забирают стерильным шприцем в фолликулиновую фазу овариального цикла с последующим исследованием ТФР-. Для этого моноклональные антитела против ТФР- иммобилизируют на внутренних поверхностях ячеек планшетов для микротитрования и вносят исследуемые образцы. После стандартного режима инкубации образцов с первыми антителами лунки планшета промывают и вносят вторые моноклональные антитела к ростовому фактору в виде конъюгата с биотином. После инкубации и последующей отмывки в лунки вносят конъюгат пероксидазы со стрептавидином и добавляют реагент цветной реакции (3-диметиламинобензоат). После развития окраски измеряют активность связанной пероксидазы с использованием фотометра для микропланшета с длиной волны 450 нм [13]. В качестве стандарта для сравнения служит ТФР- с известной концентрацией. По данным титрования стандартных образов строят калибровочные графики для ростового фактора и определяют концентрацию ТФР- в опытных образцах цервикальной слизи. По увеличению содержания ТФР- от 150 до 240 пг/мл судят о наличии слабой и умеренной цервикальной дисплазии и при значениях этого показателя от 240 до 500 пг/мл диагностируют тяжелую дисплазию шейки матки.

Результаты наблюдения больных приведены в таблице. Установлено, что у пациенток с эктопией шейки матки, осложненной бактериально-вирусным цервицитом, уровень ТФР- повышается по сравнению со здоровыми женщинами в 1,5 раза (p₁>0,05) (таблица). У больных слабой и умеренной дисплазией цервикального эпителия концентрация исследуемого ростового фактора увеличивается по сравнению с контролем в 2,6 и 2,8 раза соответственно (p₁<0,001) и по сравнению с эктопией – в 1,8 и 1,9 раза соответственно (р₂<0,05; р₃<0,01). При тяжелой дисплазии шейки матки содержание ТФР- в цервикальной слизи по сравнению с контрольной группой возрастает в 6,3 раза, по сравнению с эктопией – 4,3 раза, слабой дисплазией – 2,4 раза, умеренной дисплазией – 2,2 раза (p_1,5,6,7<0,001) (таблица).

Таким образом, при тяжелой дисплазии содержание -трансформирующего фактора роста составляет более 240 пг/мл.

Использование способа в медицинской практике позволяет осуществлять адекватную диагностику тяжести диспластических поражений шейки матки.

Пример 1. Пациентка Г., 36 лет. Неоднократно в течение последних двух лет получала медикаментозное лечение по поводу эктопии шейки матки, отмечала временное улучшение. При профилактическом осмотре обнаружен незначительных размеров участок эктопии вокруг цервикального канала. При бимануальном исследовании – без особенностей. Цитологическое и кольпоскопическое заключение: картина локального воспаления. При бактериоскопическом исследовании цервикальной слизи обнаружено хламидийно-стафилококковое поражение. После проведенной локальной этиотропной санации взята биопсия – эпидермизирующийся эндоцервикоз.

Выставлен диагноз: Осложненная эктопия шейки матки на фоне хламидийного цервицита.

При исследовании ТФР- его содержание составило 603 пг/мл.

Клинический диагноз: Тяжелая дисплазия шейки матки.

Произведена диатермоэксцизия шейки матки с последующим гистологическим исследованием биоптата и заключительным диагнозом – цервикальная дисплазия тяжелой степени.

Пациентка консультирована в условиях специализированного онкологического диспансера. В последующие 2 года снята с диспансерного учета при отрицательных результатах цитологического и кольпоскопического исследований, содержание ТФР- составило 70,0 пг/мл.

Пример 2. Пациентка З., 46 лет. Обратилась в женскую консультацию по поводу контактных кровотечений. При осмотре в зеркалах на шейке матки обнаружен лишь незначительный участок гиперемии, уходящий в цервикальный канал. При влагалищном исследовании – внутренние гениталии без патологии. Кольпоскопическая картина – ацетобелый эпителий, патологический участок полностью не визуализируется. Цитологически обнаружены единичные клетки с явлениями атипии. При выскабливании цервикального канала – элементы цилиндрического эпителия с явлениями воспаления. Бактериоскопически обнаружена условно-патогенная флора. Содержание ТФР- 157 пг/мл.

Предварительный диагноз – Тяжелая дисплазия шейки матки?

Пациентке проведена высокая диатермоэксцизия шейки матки в условиях специализированного онкологического стационара. Патоморфологическое заключение удаленного участка шейки – слабая дисплазия шейки матки с преимущественной локализацией в цервикальном канале.

Окончательный диагноз – слабая дисплазия шейки матки.

Диспансерное наблюдение в течение 2 лет с последующим снятием с учета при отрицательных результатах цитологического и кольпоскопического исследований, уровень ТФР- составил 56 пг/мл.

Пример 3. Пациентка Ж., 32 лет. При профилактическом медицинском осмотре гинекологом обнаружена рубцовая деформация шейки матки с зиянием слизистой цервикального канала. Кольпоскопически – деформация наружного зева с зоной эктопии. Цитологическое заключение – цитограмма без особенностей. При культуральном исследовании цервикального содержимого выявлен возбудитель Ch. Trachomatis.

Диагноз – Эрозированный эктропион, хламидийный цервицит.

Концентрация ТФР- в цервикальной слизи составила 560 пг/мл.

Клинический диагноз – Тяжелая дисплазия, рубцовая деформация шейки матки, хламидийный цервицит.

Пациентке выполнена диатермоконизация шейки матки. При морфологическом исследовании операционного материала – дисплазия тяжелой степени в сочетании с деформацией шейки матки. Консультирована в онкологическом диспансере. При динамическом контроле в течение 2 лет, отрицательных результатах цитологии и кольпоскопии, содержании ТФР- на уровне 72 пг/мл снята с диспансерного наблюдения.

Пример 4. Пациентка Н., 32 лет. Обратилась в женскую консультацию по поводу беременности 13-14 недель. Беременность желанная. Последних 2 года к гинекологу не обращалась. При осмотре обнаружена цианотичная шейка матки с участком красного цвета вокруг наружного зева с легко кровоточащей поверхностью, патологический процесс занимает 2/3 влагалищной порции шейки матки. Бимануальное исследование – без особенностей. Цитологическое заключение – единичные атипичные клетки на фоне картины воспаления, окончательный диагноз установить не представляется возможным. При кольпоскопическом исследовании обнаружены пунктация, мозаика, йод-негативные участки, избыточная продукция слизи, участок эктопии легко травмируется при дотрагивании. Бактериологически обнаружено кандидозное поражение шейки матки, при ПЦР-исследовании – вирус простого герпеса.

Диагноз – Дисплазия шейки матки?

Исследовано содержание ТФР- в цервикальной слизи пациентки, – 90 пг/мл.

Клинический диагноз – Осложненная эктопия шейки матки на фоне кандидозного цервицита.

После проведения санации влагалища и шейки матки взята биопсия – папиллярная псевдоэрозия шейки матки.

Заключительный диагноз – Осложненная эктопия шейки матки на фоне вирусно-кандидозного цервицита. Динамически наблюдалась в течение всей беременности – цитологическая, кольпоскопическая картина без отрицательной динамики, уровень ТФР- в пределах 100 пг/мл. После родов проведено деструктивное лечение шейки матки, снята с диспансерного наблюдения.

Способ дифференциальной диагностики тяжелой цервикальной дисплазии применен у 113 женщин, точность метода составила 85,7%, специфичность 81,0% и чувствительность 85,0%.

ЛИТЕРАТУРА

2. Прилепская В.Н., Кондриков Н.И., Бебнева Т.Н. Значение вируса папилломы человека в развитии диспластических процессов шейки матки. – Гинекология. – 2000. – Т.3. – №3. – С.80-83.

4. Минкина Г.Н., Манухин И.Б., Франк Г.А. Предрак шейки матки. – М.: Аэрограф-медиа, 2001, – 112 с.

5. Прилепская В.Н., Роговская С.И., Межевитинова Е.А. Кольпоскопия (практическое руководство). – М., 1997, – 108 с.

6. Бохман Я.В. Руководство по онкогинекологии. – Л.: Медицина, 1989, – 463 с.

7. Кулаков В.И., Тохиян А.А. Проблемы злокачественных новообразований репродуктивной системы в практике гинеколога. – Журнал женских и акушерских болезней. – 2002. – Т. LI – B.1. – С.9-12.

8. Хмельницкий O.K. Патоморфологическая диагностика гинекологических заболеваний. – СПб.: СОТИС, 1994, – 479 с.

9. Кустаров В.Н., Линде В.А. Патология шейки матки. – СПб.: Гиппократ, 2002, – 144 с.

10. Иммунологические методы. /Под ред. Фримеля Г. (Friemel Н.). – М.: Медицина, 1987, – 472 с.

11. Сапрыкина О.А. Состояние местного иммунитета и его коррекция у больных фоновыми и предраковыми заболеваниями шейки матки в сочетании с папилломавирусной инфекцией: Автореф. дис. … канд. мед. наук. – М., 1994, – 21 с.

12. COMERCI JT Jr et al. Altered expression of transforming growth factor-beta 1 in cervical neoplasia as an early biomarker in carcinogenesis of the uterine cervix. – Cancer, 1996, Mar 15; 77(6): 1107-1114 (прототип).

13. Иммуноферментный анализ. /Под ред. Нго Т.Т., Ленхофф Г.М. (Ngo Т.Т., Lenhoff H.M.) – М.: Мир, – 1988, – 444 с.

Формула изобретения

Способ диагностики тяжелой цервикальной дисплазии путем определения -трансформирующего фактора роста, отличающийся тем, что в слизи цервикального канала определяют концентрацию -трансформирующего фактора роста и при значении от 240 пг/мл диагностируют тяжелую дисплазию шейки матки.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 16.06.2006

Извещение опубликовано: 10.04.2008 БИ: 10/2008