Патент на изобретение №2272294

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО АБАКТЕРИАЛЬНОГО ПРОСТАТИТА

(57) Реферат:

Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использовано для дифференциальной диагностики форм хронического абактериального простатита. Сущность изобретения состоит в том, что в сыворотке крови определяют активность калликреина и при значениях от 18 до 39 МЕ/мл диагностируют хронический абактериальный простатит воспалительной формы, а при значениях 39 МЕ/мл и выше диагностируют хронический абактериальный простатит невоспалительной формы. Техническим результатом является разработка способа, позволяющего проводить дифференциальную диагностику форм хронического абактериального простатита.

Изобретение относится к области медицины и найдет применение в урологии, в частности при диагностике форм хронического абактериального простатита.

Хронический простатит остается в настоящее время весьма распространенным, недостаточно изученным и плохо поддающимся лечению заболеванием. Он поражает мужчин преимущественно молодого и среднего возраста, то есть наиболее сексуально активных, нередко осложняется нарушением копулятивной и генеративной функций.

Очевидным является не только медицинское, но и социальное значение проблемы повышения эффективности диагностики и лечения хронического простатита.

Современная медицина не располагает углубленными и достоверными сведениями относительно причинных факторов и механизмов развития хронического простатита, особенно абактериального. В большинстве случаев хронического простатита его этиология, патогенез и патофизиология остаются неизвестными (Nickel JC: Простатит: инфекционное заболевание? Infect Urol 2000a; 13:31-38).

Наиболее распространенной на сегодняшний день в мире является предложенная Национальным Институтом Здоровья США (1995 г.) классификация, в которой особенно выделяется категория III – хронический абактериальный простатит с воспалительным компонентом и без оного (Лоран О.Б., Сегал А.С. Хронический простатит. В кн.: Х Российский съезд урологов. Материалы: Простатит. Москва, 1-3 октября 2002 г. М.; 2004. 209-222).

В настоящее время основными методами диагностики хронического простатита являются микроскопические, бактериологические и иммунологические методы исследования мочи, секрета предстательной железы эякулята, крови.

При изучении доступной медицинской и патентной литературы выявлены различные способы диагностики хронического простатита.

Так, в патенте РФ №2103691. Бюл. №3, 1998 г. МПК G 01 N 33/53, 33/48 описан «Способ диагностики хронического простатита», предусматривающий определение уровня растворимого антигена лейкоцитов – 2 (РАЛ-2) в сперме и при его содержании 20 мкг/мл и выше диагностируют хронический простатит.

В патенте РФ №2210779. Бюл. №23, 2003 г. МПК G 01 N 33/92 описан «Способ диагностики активности течения хронического простатита», при котором проводят исследование секрета предстательной железы, при этом в нем определяют концентрацию диеновых коньюгатов и шиффовых оснований, рассчитывают коэффициент активности воспаления. При уменьшении его значения активность течения хронического простатита увеличивается.

Недостатками указанных способов является неточность диагностики различных форм хронического простатита.

В качестве прототипа предлагается статья Mcnaughton Collins M. «Diagnosis and treatment of chronic abacterial prostatitis: a systematic review», Ann Intern Med. 2000 Sep. 5; 133(5):367-381, в которой приведен обзор различных тестов для диагностики хронического абактериального простатита, оценивающих инфекционные, воспалительные, иммунологические, биохимические и физиологические параметры.

Недостатком данного способа диагностики хронического простатита является его сложность, невозможность определения различных форм хронического простатита.

Целью настоящего изобретения является дифференциальная диагностика форм хронического абактериального простатита. Эта цель достигается путем определения в сыворотке крови уровня активности калликреина по методу Пасхиной и Кринской (1974).

Клинические обследования добровольцев – здоровых мужчин позволили установить, что уровень активности калликреина в сыворотке крови составляет в среднем 17 мед/мл и ниже.

Способ осуществляют следующим образом. Исследуемые компоненты отделяются от остальных ферментов сыворотки крови путем кратковременного контакта разведенной в три раза сыворотки крови с суспензией сефадекса А-50 в присутствии 0,02М К-Na-фосфатного буфера, рН 7,0. После отделения анионита фильтрованием активность калликреина определяют в фильтрате спектрофотометрическим методом по скорости гидролиза этилового эфира N-бензоил-аргинина (БАЭЭ).

Ход определения.

0,25 мл сыворотки крови помещают в силиконированную пробирку и приливали 0,5 мл 0,02 М фосфатного буфера, рН 7,0. Затем добавляют 2,5 мл густой суспензии сефадекса А-50. Смесь осторожно перемешивают стеклянной палочкой, стараясь не касаться стенок пробирки и оставляют на 10 минут (время засекали по первой пробе). Затем добавляют 3 мл 0,02 М фосфатного буфера, рН 7,0, тщательно перемешивают стеклянной палочкой и пробу оставляют на 2 минуты для разделения фракций, фильтруют в мерные пробирки через полиэтиленовые вороночки с бумажным фильтром, обильно смоченным 0,02 М К-Na – фосфатным буфером, рН 7,0. Объем фильтрата доводят до объема 5 мл 0,02 М К-Na – фосфатным буфером, рН 7,0. Фильтрат после перемешивания помещают по 1 мл в 2 чистые пробирки.

К 1 мл уже полученной фракции добавляют 1 мл 0,05 М трис – HCl буфера, рН 8,0. Непосредственно перед измерением оптической плотности в пробу вносят 1 мл 1,5×10³ М раствор N-бензоил-L-аргинина этилового эфира в 0,05 М трис – HCl буфера, рН 8,0 и сразу измеряют оптическую плотность на спектрофотометре СФ-26 при длине волны 253 нм, второе показание прибора снимают через 15 минут.

При повышении активности калликреина в сыворотке крови от 18 до 39 мед/мл диагностируют хронический абактериальный простатит (ХАП) воспалительной формы, а при 39 мед/мл и выше – ХАП невоспалительной формы.

Пример №1.

Больной С., 28 лет

Жалобы: на частое мочеиспускание, боли в нижней части живота и промежности.

Анамнез: считает себя больным в течение одного года, не лечился.

Физикальное исследование: при пальцевом ректальном исследовании – железа уплотнена, симметрична, обычной формы, болезненна.

Индекс простатических симптомов (ИПС)-30

Лабораторная диагностика:

Простато-специфический антиген (ПСА) – 0,22 нг/мл.

Оценка мочи и секрета простаты по Meares and Stamey.

1-порция мочи (ПМ) – 1-2 лейк. В поле зрения. S.Epidermidis – менее 10³ в 1 мл.

2-ПМ – S.Epidermidis – менее 10³ в 1 мл.

Секрет простаты (СП) – лейк-ты до 100. S.Epidermidis – менее 10³ в 1 мл.

3-ПМ – S.Epidermidis – менее 10³ в 1 мл.

Анализ секрета простаты – микрофлора не обнаружена.

Уровень активности калликреина в сыворотке крови – 26,21 мед/мл.

Поставлен диагноз: Хронический абактериальный простатит, воспалительная форма.

Пример №2. Больной У., возраст: 35 лет.

Жалобы: на ноющие боли в промежности, внутренних поверхностях бедер, слабую струю мочи, учащенное болезненное мочеиспускание, ослабленная эякуляция.

Клиническое течение: рецидивирующее течение 1-3 клинических эпизода в год.

Анамнез: считает себя больным около 3 лет; инфекций мочеполовой системы не было; один раз в год проводил курсы санаторно-курортного лечения.

Физикальное исследование: при пальцевом ректальном исследовании – железа шаровидной формы, контуры четкие, размеры нормальные, плотноватая, безболезненная.

ИПС-17.

Лабораторная диагностика:

ПСА – 3.26 нг/мл.

Оценка мочи и секрета простаты по Meares and Stamey.

1-ПМ – 1-2 лейк. в поле зрения, микрофлора не обнаружена.

2-ПМ – 0-1 лейк. В поле зрения, микрофлора не обнаружена.

СП – S.Epidermidis – менее 10² в 1 мл.

3-ПМ 7-8 лейк. В поле зрения, микрофлора не обнаружена.

Уровень активности калликреина в сыворотке крови – 44,87 мед/мл.

На основании полученных данных поставлен диагноз хронический абактериальный простатит, невоспалительная форма.

Преимущества предлагаемого способа по сравнению с прототипом состоят в том, что он позволяет проводить дифференциальную диагностику между формами хронического абактериального простатита и в зависимости от этого определять тактику лечения.

Калликреины – семейство ферментов, которые содержатся в крови и различных тканях. Они являются высокоспецифическими ферментами: расщепляют лишь один белковый субстрат – кининоген.

В нормальных физиологических условиях взаимодействие всех компонентов калликреин-кининовой системы строго согласовано и обеспечивает локальное или генерализованное образование кининов в строго определенных и притом очень малых количествах.

Основное действие кининов состоит в расширении мелких артериальных сосудов. Кинины оказываются сильными факторами изменения проницаемости микрососудов. При попытках раскрытия этого механизма было показано, что под влиянием брадикинина происходит активное сокращение эндотелиальных клеток венул с образованием между ними диффузионных щелей. Изменение проницаемости сосудов, возникающее при участии кининов, может быть причиной возникновения отеков и воспалительных реакций при ряде заболеваний.

Среди гуморальных систем организма кининовая привлекает особое внимание, поскольку кинины являются наиболее эффективными медиаторами проницаемости микрососудов.

Предлагаемый способ апробирован на 28 больных и показал высокую информативность.

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики хронического абактериального простатита воспалительной и невоспалительной формы, предусматривающий клиническое обследование, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют активность калликреина и при значениях от 18 до 39 МЕ/мл диагностируют хронический абактериальный простатит воспалительной формы, а при значениях 39 МЕ/мл и выше диагностируют хронический абактериальный простатит невоспалительной формы.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 28.12.2006

Извещение опубликовано: 20.06.2008 БИ: 17/2008