Патент на изобретение №2271541

(54) СПОСОБ РАННЕГО ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ГЕСТОЗА

(57) Реферат:

Изобретение относится к клинической лабораторной диагностике и может быть использовано для раннего прогнозирования гестоза. Сущность изобретения состоит в том, что в периферической венозной крови на сроке 6-12 недель гестации определяют процентное содержание CD5+CD20+ лимфоцитов в популяции CD20+ клеток и при его значении более 30% прогнозируют развитие гестоза. Техническим результатом является прогнозирование развития гестоза с высокой точностью и на ранних сроках. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования развития гестоза.

Проблема гестоза остается одной из наиболее актуальных в современном акушерстве. Частота гестоза остается высокой и составляет по данным разных авторов от 3,5 до 20% (1, 2). Гестоз является фактором риска материнской (10.3%) и перинатальной смертности (44%) (1, 2). Прогнозирование гестоза, особенно доклинических форм и на ранних сроках беременности представляет сложную клиническую проблему.

Известен способ прогнозирования гестоза беременных путем определения уровня липидов и фосфолипидов в моче при сроке беременности 8-12 и 20-24 недели (3). При уровнях липидов 513,1+65,8 и 706,4+84,7 ед. оптической плотности и фосфолипидов 5,74+1,7 и 16,5+6,1 мг/л прогнозируется гестоз. Точность способа – 64.5%.

Способ имеет недостатки:

– необходимость двухкратного обследования беременной женщины в I и II триместре гестации;

– обследование проводится двумя различными методами с использованием высокотоксичных химических реактивов (метанол, хлороформ);

– неудачный выбор субстрата исследования, поскольку появление липидов и фосфолипидов в моче характерно для хронических воспалительных заболеваний, в том числе заболеваний мочевыделительной системы (нефритов и пиелонефритов), сердечно-сосудистой патологии, угрозе прерывания и привычном невынашивании беременности;

– невысокая точность.

Известен способ прогнозирования гестоза путем определения относительного содержания Т-супрессоров в периферической венозной крови и при величине показателя от 18% и менее прогнозируется развитие данного осложнения беременности (4).

Недостатками способа являются:

– отсутствует указание на срок беременности, в котором рекомендуется проводить обследование;

– лимфоциты, ранее носившие название Т-супрессоров, в настоящее время определяются как цитотоксические Т-лимфоциты, которые не обладают супрессорными функциями;

– уровень цитотоксических лимфоцитов снижается при инфекционно-воспалительных и некоторых соматических заболеваниях (5).

– не указана точность способа.

Наиболее близким по техническому решению является способ прогнозирования среднетяжелых и тяжелых форм гестоза по определению интерлейкина-6 (ИЛ-6) в периферической крови беременных женщин, начиная с 16 недель гестации (6). Однако данный способ имеет ряд существенных недостатков:

– способ позволяет прогнозировать лишь среднетяжелые и тяжелые формы гестоза, что ограничивает возможности его применения в прогнозировании легких форм гестоза;

– используемые коммерческие тест-системы для определения ИЛ-6 обладают различным порогом чувствительности, при этом в ряде случаев прогностически значимые значения показателя могут находиться вне зоны чувствительности тест-системы;

– предлагаемый способ недостаточно специфичен, так как значимые показатели ИЛ-6 отмечаются в периферической крови беременных женщин при угрозе прерывания с явлениями отслойки ветвистого хориона, при неразвивающейся беременности и преждевременных родах (7);

– содержание ИЛ-6 резко повышается не только при острых и хронических инфекционно-воспалительных заболеваниях, при наличии аллергических реакций, при аутоиммунных и опухолевых заболеваниях, но и при любом нарушении гомеостаза (8, 9).

– способ позволяет прогнозировать гестоз только с 16 недели гестации.

Указанные недостатки могут быть устранены в предлагаемом способе.

Заявляемый технический результат достигается тем, что в 6-12 недель гестации в периферической венозной крови беременных женщин определяют содержание CD20+ и CD5+CD20+ клеток и математически вычисляют процентное содержание CD5+CD20+ лимфоцитов в общей популяции CD20+ лимфоцитов по формуле:

и при значениях этого показателя более 30% прогнозируют развитие гестоза с точностью 86,67%.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать гестоз по определению процентного содержания CD5+CD20+ клеток в общей популяции CD20+-лимфоцитов в периферической венозной крови беременных женщин группы риска на развитие данной патологии в сроки гестации 6-12 недель.

Ранее исследования уровня CD5+CD20+ клеток в популяции CD20+ лимфоцитов у беременных женщин с целью прогнозирования гестоза не проводились. Известно, что CD5+CD20+ лимфоциты осуществляют синтез аутоантител, способствуя развитию аутоиммунного процесса. В ряде исследований было показано увеличение аутоантител при акушерских осложнениях в III триместре беременности (гестоза, преждевременных родов, СЗРП), при осложнениях послеродового периода (10). Однако взаимосвязи между уровнем CD5+CD20+ лимфоцитов в I триместре и развитием гестоза во второй половине беременности не отмечалось.

Способ осуществляется по стандартной методике следующим образом (11):

1) забор 2 мл периферической венозной крови;

2) выделение лимфоцитов из периферической венозной крови;

3) 100 мкл лимфоцитов в концентрации 1·10⁶ кл/мл инкубируют с 20 мкл моноклональных анти-СD5, меченных FITC, и с 20 мкл моноклональных анти-СD20, меченных РЕ, в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, после чего клетки отмывают 1 раз 1 мл физиологического раствора центрифугированием при 1500 об/мин в течение 2 минут. Клетки ресуспендируют в 500 мкл физиологического раствора. Учет реакции проводят на проточном цитометре, определяя в одной пробе содержание CD20+ и CD5+CD20+ клеток. Далее вычисляют процентное содержание CD5+CD20+ – лимфоцитов в общей популяции CD20+ лимфоцитов по формуле:

и при значениях этого показателя более 30% прогнозируют развитие гестоза с точностью 86,67%, чувствительностью 91,3% и специфичностью 71,4%.

Существенными отличиями заявленного способа являются:

– предложен новый прогностический параметр относительного содержания CD5+CD20+ лимфоцитов в популяции CD20+ клеток в периферической венозной крови в I триместре беременности у женщин группы риска развития гестоза, при значениях которого более 30% прогнозируется развитие гестоза во второй половине беременности.

Преимущества заявляемого способа:

1) исследование проводится в первом триместре беременности (6-12 нед.), что позволяет до клинического проявления заболевания прогнозировать гестоз и своевременно провести комплекс профилактических мероприятий;

2) прогнозирование гестоза любой степени тяжести;

3) исследование периферической венозной крови у женщины проводится однократно;

4) высокая точность 86,67%, чувствительность 91,3% и специфичность 71,4% способа.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами:

Пример 1. Беременная Ш., 24 лет. Данная беременность первая. На учет по беременности в женскую консультацию встала в сроке 6 недель. При обследовании заявляемым способом: относительное содержание CD5+CD20+ лимфоцитов в популяции CD20+ клеток – 43%, прогнозируется развитие гестоза. При обследовании в 33 недели беременности у беременной Ш. отмечено повышение АД до 150/100 мм рт.ст., появление отеков голеней, наличие патологической прибавки массы тела за неделю 1000 г, общая прибавка массы тела составила 12 кг, протеинурия 0,33 г/л. Беременная госпитализирована в стационар с диагнозом: беременность 34 недели. Гестоз средней степени тяжести. Проведено лечение гестоза. Беременность закончилась преждевременными родами в 37 недель гестации. Родился недоношенный новорожденный массой 2200 г, ростом 44 см, с оценкой по шкале Апгар 5/6 баллов. Заключение: прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 2: Беременная К., 30 лет. Первая беременность закончилась индуцированными преждевременными родами в срок 33 недели гестации по поводу тяжелой формы гестоза и рождением недоношенного ребенка с массой тела 1300 г, ростом 43 см, с оценкой по шкале Апгар 4-5 баллов. Настоящая беременность вторая. На учет по беременности в женскую консультацию встала в сроке 7 недель. При обследовании заявляемым способом: относительное содержание CD5+CD20+ лимфоцитов в популяции CD20+ клеток – 36%, прогнозируется развитие гестоза. При обследовании в 36 недель беременности у беременной К. выявлены отеки голеней, передней брюшной стенки, одутловатость лица, патологическая прибавка массы тела за неделю 550 г, общая прибавка массы 15 кг, отмечено повышение артериального давления до 180/100 мм рт.ст., протеинурия 3,3 г/л. Выставлен диагноз: беременность 36 недель. Гестоз тяжелой степени. Отягощенный акушерско-гинекологический анамнез. Беременность закончилась преждевременными родами и рождением недоношенного новорожденного массой 2500 г, ростом 46 см, с оценкой по шкале Апгар 6/7 баллов. Заключение: прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 3: Беременная К., 25 лет. Настоящая беременность первая. На учет по беременности в женскую консультацию встала в сроке 10 недель. Обследована терапевтом, заключение: здорова. При обследовании заявляемым способом: относительное содержание CD5+CD20+ лимфоцитов в популяции CD20+ клеток – 30%, не прогнозируется развитие гестоза. При дальнейшем наблюдении настоящая беременность протекала без осложнений. Признаков гестоза выявлено не было. Беременность закончилась своевременными родами и рождением доношенного новорожденного массой 3500 г, ростом 54 см, с оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов. Заключение: прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 4: Беременная Е., 25 лет. Настоящая беременность первая. На учет по беременности в женскую консультацию встала в сроке 10 недель. При обследовании заявляемым способом: относительное содержание CD5+CD20+ лимфоцитов в популяции CD20+ клеток – 33%, прогнозируется развитие гестоза. При обследовании в 38 недель беременности артериальное давление оставалось в пределах 100/60-110/70 мм рт.ст., анализы мочи – без патологии, общая прибавка массы тела за беременность составила 15 килограмм, отмечались отеки нижних конечностей, кистей рук, одутловатость лица. Выставлен диагноз: беременность 38 недель. Гестоз легкой степени тяжести. Беременность закончилась своевременными родами и рождением доношенного новорожденного массой 3400 г, ростом 51 см, с оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов. Заключение: прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Результаты исследований сведены в таблицу 1.

Таким образом, заявленный способ прост в исполнении и позволяет с высокой точностью прогнозировать развитие гестоза у женщин при обследовании в 6-12 недель беременности, что позволит выбрать правильную тактику ведения женщин и будет способствовать снижению частоты данного осложнения беременности, риска развития патологии плода и новорожденного и уменьшению экономических затрат на лечение.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

5. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология: Учебник. – М.: Медицина, 2000. – 432 с.

6. Нецеевская М.А. Клинико-иммунологические критерии прогнозирования гестоза: Автореф. дисс…. канд. мед. наук. – Москва, 2000. – 34 с.

7. Сидельникова В.М. Привычная потеря беременности, – М.: Триада-Х, 2000. – 304 с.

9. Назаров П.Г. Реактанты острой фазы воспаления, – СПб.: Наука, 2001. – 16 с.

Формула изобретения

Способ раннего прогнозирования гестоза путем определения иммунологических показателей в периферической венозной крови беременной женщины, отличающийся тем, что в 6-12 недель гестации определяют процентное содержание CD5+CD20+ лимфоцитов в популяции CD20+ клеток и при его значении более 30% прогнозируют развитие гестоза.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 07.08.2006

Извещение опубликовано: 20.08.2007 БИ: 23/2007