Патент на изобретение №2271008

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МИКСОМЫ СЕРДЦА

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии – кардиоонкологии, и может быть использовано в патологоанатомических отделениях лечебных и научных учреждений при проведении дифференциальной диагностики опухолей сердца неясного гистогенеза. Способ состоит в том, что определяют иммунофенотип опухоли по фосфолипазе А2 группы 2А и при положительном иммунофенотипе опухоль диагностируют как миксому сердца. Изобретение обеспечивает повышение точности способа.

Изобретение относится к новой главе современной хирургии – кардиоонкологии, в частности к способу диагностики миксом сердца, и может быть использовано в патологоанатомических отделениях лечебных и научных учреждений при проведении дифференциальной диагностики опухолей сердца неясного гистогенеза.

Первичные опухоли сердца – заболевание с чрезвычайно полиморфной клинической картиной и неблагоприятным прогнозом. Среди них миксомы сердца – доброкачественные опухоли – составляют в клинической практике кардиохирургических центров 70-90%. Выявление опухолей сердца затруднено в связи с отсутствием патогномоничных признаков и возможностью бессимптомного течения болезни. Ведущую роль в выявлении опухолей сердца играет эхокардиография, которая позволяет определить размер, форму, локализацию новообразования и тактику хирургического лечения. Однако эхокардиография не позволяет идентифицировать вид новообразования. Идентификация опухоли требует гистологического анализа. Гистологическая идентификация опухоли необходима для определения тактики лечения оперированных больных. Вместе с тем, дифференциальная диагностика миксомы сердца нередко вызывает определенные затруднения, так как до настоящего времени нет четких диагностических критериев, позволяющих отличить миксомы сердца от других образований аналогичной локализации, сходной структуры с миксоматозом стромы.

Прототипом иммуногистохимической диагностики миксомы сердца является способ распознавания с использованием моноклональных антител против клеток мезенхимы (антивиментин), эндотелиоцитов всех типов (антиСD31 и антиСD34) и ангиотензин-конвертирующего фермента (антиСD143), который используют как дискриминатор сосудистого и эндокардиального эндотелия [Руденко Е.В., Захарова В.П., Витовский P.M., Кнышов Г.В. Способ распознавания миксомы сердца. Патент UA 46684 А, А 61 В 10/00, 2002].

Недостатки этого способа.

1. Предложенный набор антигенов не является специфическим для миксомы. Иммуноположительными по набору vim+CD31+CD34+CD143+ будут все опухоли, содержащие сосуды.

2. Требуется одновременное выявление четырех антигенов в одной и той же клетке опухоли, что технически очень сложно.

Задачей предлагаемого изобретения является повышение точности диагностики миксом сердца.

Решение поставленной задачи достигается тем, что в способе диагностики миксомы сердца, включающем патологогистологический анализ и иммуногистохимический анализ опухоли с использованием антител к белку, определяют иммунофенотип опухоли по фосфолипазе А2 группы 2А и при положительном иммунофенотипе опухоль диагностируют как миксому сердца.

Предложенный способ и признаки, отличающие его от известных, в медицинской и патентной литературе не обнаружены. Это позволяет сделать вывод о соответствии его критерию “новизна”.

Сущность предлагаемого изобретения состоите том, что определяют иммунофенотип опухоли по фосфолипазе А2 группы 2А и при положительном иммунофенотипе опухоль диагностируют как миксому сердца.

Способ осуществляют следующим образом. Для иммуногистохимического анализа используют гистологические срезы опухоли, удаленной в ходе хирургической операции. Срезы толщиной 10 мкм изготавливают на криомикротоме. Для выявления фосфолипазы А2 группы 2А в опухоли применяют метод непрямого иммуномечения. В качестве первых антител используют моноклональные антитела к фосфолипазе А2 группы 2А (Anti-sPLA₂, Cat. No 05-143, Upstate Biotechnology, США) в концентрации, рекомендованной фирмой-производителем (5 мкг/мл). Комплексы антиген-антитело выявляют меченными биотином поликлональными антителами к первым антителам (Biotinylated Anti Mose Ig, Cat. No BA-2000, Vector Laboratories, США). Биотиновая метка визуализируется при помощи преформированного комплекса авидин-биотин-пероксидаза хрена по окрашиванию в реакции с колориметрическим субстратом 3,3′-диаминобензидинтетрахлоридом (Vectastain Elite ABC Kit Standard, Cat. No PK-6100, Vector Laboratories, США). Пероксидаза выявляется в местах локализации фосфолипазы А2 группы 2А в виде гранул коричневого цвета. Выявление мест локализации фосфолипазы А2 группы 2А свидетельствует о положительном иммунофенотипе и опухоль диагностируют как миксому сердца.

Предлагаемый способ реализован в следующих клинических наблюдениях.

Пример 1. Больная М., 59 лет, история болезни № 554030, биопсия № 9197-12/03, поступила в отдел хирургии сердца РНЦХ РАМН 11.05.2003 с диагнозом миксома правого предсердия. 15.05.2003 успешно выполнено удаление выявленной опухоли. Опухоль представляла собой студенистое образование, с гладкой поверхностью в несколько утолщенной капсуле, на разрезе однородного вида желеобразной консистенции, желтоватого цвета. При микроскопическом исследовании установлено, что ткань опухоли представлена преимущественно рыхлым межклеточным веществом, в котором располагаются клетки округлой, вытянутой или отростчатой формы, нередко образующие тяжи, окруженные базофильным матриксом. Имеются участки кровоизлияний, скопления коллагеновых волокон, очаговая и диффузная лимфоидная и лейкоцитарная инфильтрация. В основании – крупные толстостенные сосуды, участки склероза.

Патологогистологический диагноз – миксома сердца.

При иммуногистохимическом анализе с использованием моноклональных антител к фосфолипазе А2 группы 2А в срезах опухоли выявлены места локализации фосфолипазы А2 группы 2А в виде гранул коричневого цвета, что свидетельствует о положительном иммунофенотипе, и опухоль диагностируют как миксому сердца.

Пример 2. Больной З., 10 лет, и/б № 552666, биопсия № 8231-37/03. Поступил в отдел хирургии сердца 16.04.03 с предположительным диагнозом миксома левого желудочка. 12.15.03 успешно выполнено удаление новообразования овальной формы, размером 6×4×3 см. Поверхность его местами гладкая, местами с обрывками спаек, на разрезе ткань неоднородная: плотные белесоватые участки чередуются с кремовыми, напоминающими жировую клетчатку, и желеобразными. При микроскопическом исследовании опухоль состоит из беспорядочно перемешанных жировой, фиброзной, рыхлой соединительной, сосудистой ткани, мелких островков кроветворения, недифференцированной ткани типа мезенхимы – аморфной миксоматозной субстанции с полиморфными клетками звездчатой, овальной, веретенообразной формы и небольшим количеством коллагеновых волокон, сосудов синусоидного типа. В липоматозном и фиброзном компоненте отмечается клеточный и ядерный полиморфизм. Патологогистологический диагноз: мезенхимома.

При иммуногистохимическом анализе с использованием моноклональных антител к фосфолипазе А2 группы 2А в срезах опухоли не выявлены места локализации фосфолипазы А2 группы 2А в виде гранул коричневого цвета, что свидетельствует о строго отрицательном иммунофенотипе опухоли по фосфолипазе А2 группы 2А, и опухоль диагностирована как не миксома сердца. Это заключение определяет повышенную угрозу возникновения рецидива в будущем. В данном случае рецидив опухоли зарегистрирован через 6 месяцев.

Использование предлагаемого способа позволяет повысить точность диагностики миксомы сердца. Способ апробирован в отделе хирургии сердца РНЦХ РАМН у 14 больных. Он дал положительные результаты и найдет широкое применение в медицинской практике.

Формула изобретения

Способ диагностики миксомы сердца, включающий патологогистологический анализ и иммуногистохимический анализ опухоли с использованием антител к белку, отличающийся тем, что иммунофенотип опухоли определяют по фосфолипазе А2 группы 2А и при положительном иммунофенотипе опухоль диагностируют как миксому сердца.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 30.06.2006

Извещение опубликовано: 20.08.2007 БИ: 23/2007