Патент на изобретение №2270451

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ФИБРОЗНОГО ПРОЦЕССА В ПЕЧЕНИ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ВИРУСНОМ ГЕПАТИТЕ

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, а именно к гепатологии. Для осуществления способа диагностики фиброзного процесса в печени при хроническом вирусном гепатите в сыворотке крови определяют показатели уровня супероксиддисмутазы и активности фосфолипазы Д. При содержании супероксиддисмутазы менее 1,2 ммоль/мин мг белка, а уровня фосфолипазы Д более 0,05 ммоль/мин мг белка диагностируют фиброзный процесс в печени. Способ позволяет точно и информативно диагностировать фиброзный процесс в печени при хроническом гепатите на основании исследования только сыворотки крови больного.

(56) (продолжение):

CLASS=”b560m”Selective induction of phospholipase Dl in pathogen-activated human monocytes. Biochem J. 2001, Aug. 15, 358(Pt 1), p.119-125. Raymond FD et al. Inostinol-specific phospholipase D activity in health and disease. Clin. Sci. (Lond). 1994, Apr. 86(4), p.447-451. Конусова В.Г. и др. Изменение показателей оксидантного и цитокинового статуса больных хроническим вирусным гепатитом С и В при лечении препаратом рекомбинантного интерлейкина 1в человека. Цитокины и воспаление. №1, 2003, с.25-27.

Изобретение относится к медицине, к инфекционным болезням, гепатологии и касается способов диагностики фиброзного процесса в печени при хроническом вирусном гепатите.

Известен способ диагностики стадии фиброзного процесса в печени у пациентов с хроническим гепатитом по данным пункционной биопсии, где по V.Desmetet [1] all. (1994) выделяют стадию хронизации с оценкой характера и выраженности фиброза в гистологических препаратах. В.В.Серовым и Л.О.Севергиной (1996) [2] для оценки выраженности фиброза предложен гистологический индекс стадии хронизации (ХИСХ), где в отличие от вышеизложенного способа авторы на гистологических препаратах печени предлагают учитывать не только наличие признаков портального и септального фиброза, но и «синусоидальный» (перигепатоцеллюлярный) фиброз. Описанные способы являются инвазивными и дают хороший результат при исследовании достаточного объема печеночной ткани.

Известен способ прогнозирования возникновения цирроза при ХГ, заключающийся в определении концентрации фосфолипидов в мембране эритроцитов в расчете на гемоглобин, согласно которому и при значении 0,45-1,47 ммоль прогнозируют цирроз печени [3]. Однако известный способ обладает недостаточной точностью ввиду того, что определяется концентрация только общих фосфолипидов в крови и способ улавливает только грубые изменения, т.к. определяется сумма фракций фосфолипидного спектра. В то время как относительное содержание фракций внутри фосфолипидного спектра разных категорий больных и в разный период болезни может сильно отличаться и имеет важное значение для оценки степени изменений биохимических процессов, а значит, и для диагностики [4].

Кроме того, определение фосфолипидов в эритроцитах, которые не относятся к иммунокомпетентным клеткам и крови, малоинформативно, т.к. у больных хроническим гепатитом развивается инфильтрация печени иммунокомпетентными клетками [5], а хронические гепатиты и цирроз печени вообще являются аутоиммунными заболеваниями [6].

Известен также способ прогнозирования цирроза печени путем определения относительного содержания фракций лизофосфатидилхолина (ЛФЗХ), относительного содержания сфингомиелина (СМ), расчета коэффициента, определяемого по формуле ФХ2/см ЛФХ, где ФХ – относительное содержание фосфатидилхолина, СМ – относительное содержание сфингомиелина, ЛФХ – относительно содержание лизофосфатидилхолина, и при его значениях 50-96 прогнозируют цирроз печени [7].

Однако данный способ недостаточно точен, т.к. исследования фосфолипидного спектра проводится в крови, первичное и наиболее выраженное изменение липидного обмена происходит в гепатоцитах печени, а уровень перекисного окисления липидов зависит от состояния его антиоксидантной системы [9].

Наиболее близким к предлагаемому является способ диагностики хронических поражений в печени (8), в котором определяют активность антиоксидантных ферментов в гепатобиоптате: супероксиддисмутазы (СОД), каталазы и НАДФ Н-пероксидазы, рассчитывают отношение каталаза /НАДФ Н-пероксидаза и при значении 0,04·10³ – диагностируют жировую дистрофию печени, 0,311·10³ – хронический активный гепатит, 0,222·10³ – цирроз печени и при 0,196·10³ – первичный биллиарный цирроз, а фиброз печени диагностируют при отношении 0,303·10³ – и одновременном снижении активности СОД.

Новая техническая задача – расширение арсенала критериев для точного, информативного и неинвазивного прогнозирования процесса в печени при хроническом гепатите.

Поставленную задачу решают новым способом диагностики фиброзного процесса в печени при хроническом вирусном гепатите, включающим определение показателей уровня супероксиддисмутазы, причем уровень супероксиддисмутазы определяют в сыворотке крови и дополнительно определяют показатель активности фосфолипазы Д, и при содержании супероксиддисмутазы менее 1,2 ммоль/мин мг белка, а уровня фосфолипазы Д более 0,05 ммоль/мин мг белка диагностируют фиброзный процесс в печени.

Предлагаемые критерии для прогнозирования хронизации процесса при хроническом гепатите подобраны на основании интерпретации данных клинических наблюдений за 110 больными хроническим вирусным гепатитом В,С,В+С. Всем больным проводились общеклинические методы обследования, а также пункционная биопсия печени по Менгини с получением биоптата, с последующим морфологическим исследованием и определением гистологического индекса активности и индекса стадии хронизации (индекс фиброза), причем одновременно определяли показатель антиоксидантной защиты – активности супероксиддисмутазы в сыворотке крови [10], а также определяли активность фосфолипазы Д в сыворотке крови [10], те же показатели определяли в гепатоцитах биоптатов печени. В результате обследования 110 больных у 32 больных был гистологически диагностирован хронический гепатит В или С с отсутствием фиброза, у 26 – фиброз 1 стадии, у 38 больных диагностирована стадия фиброза 2, у 15 – стадия фиброза 3.

В группе больных с отсутствием фиброза содержание супероксиддисмутазы в сыворотке крови было не ниже 1,2 ммоль/мин мг белка, при наличии фиброзных изменений (стадия фиброз 1 или 2) – ниже 1,2 ммоль/мин мг белка, а стадия фиброз 3 ниже 1,0 ммоль/мин мг белка. Соответственно, уровень фосфолипазы Д в сыворотке крови без фиброзных признаков не повышался более 0,05 ммоль/мин мг белка, а при стадии фиброза 1-2 – выше 0,05 (и составлял 0,07-0,08) ммоль/мг белка, а стадия фиброза 3 – колебания фосфолипазы Д были 0,09-0,1 ммоль/мин мг белка.

Пример 1. Больной В., хронический гепатит В, 28 лет, в анамнезе в крови в течение 5 лет определяются HBcorAg IgG, HBsAg, повышение трансаминаз в 2 раза, отмечалась гепатомегалия, жалобы на общую слабость, периодически субфебрилитет. При обследовании выявлена ПЦР к ДНК HBV, повышение активности трансаминаз в 3 раза, после исследования согласно предлагаемому способу было выявлено то, что в сыворотке крови содержание супероксиддисмутазы было ниже 1 ммоль/мин мг белка и составляло 0,6 ммоль/мин мг белка уровень фосфолипазы Д в сыворотке крови – выше 0,05-0,1 ммоль/мин мг белка и составляло 0,1 ммоль/мин мг белка, что давало основание диагностировать стадию фиброза, что впоследствии было подтверждено результатами гистологического исследования печени, согласно которым был диагностирован хронический гепатит В, умеренной стадии активности, стадия фиброза 3 (степень фиброза тяжелая – с наличием портоцентральных септ).

Пример 2. Больной А. В анамнезе – гемотрансфузии по поводу кровопотери при травме конечности (8 лет назад). Периодически повышался уровень трансаминаз в течение 5 лет. Предъявляет жалобы на общую слабость, раздражительность, тяжесть в правом подреберье. При обследовании в условиях гепатологического отделения отмечена положительная ПЦР к РНК HCV, трансаминазы повышены в 2 раза, на УЗИ печени гепато- и спленомегалия. Проведены исследования согласно предлагаемому способу. В сыворотке крови определено содержание супероксиддисмутазы, которое оказалось выше 1,2 ммоль/мин мг белка и составило 1 ммоль/мин мг белка, уровень фосфолипазы Д в сыворотке крови выше 0,05 ммоль/мин мг белка и составил 0,08 ммоль/мин мг белка. Это давало основание диагностировать стадию фиброза, что в дальнейшем было подтверждено результатами гистологического исследования печени, согласно которым был диагностирован хронический гепатит С умеренной активности, стадия фиброза 2 (степень фиброза умеренная, перипортальный фиброз).

Пример 3. Больной И. В анамнезе эпизод внутривенного приема наркотиков 3 года назад, в крови положительная ПЦР к РНК HCV, повышение трансаминаз не более чем в 2 раза. Проведена пункционная биопсия печени – при гистологическом исследовании выявлен хронический гепатит С слабой активности с отсутствием фиброза. При биохимическом исследовании крови согласно предлагаемому способу содержание супероксиддисмутазы составило 1,5 ммоль/мин мг белка, содержание фосфолипазы Д в сыворотке крови – 0,02 ммоль/мин мг белка, что давало основание диагностировать отсутствие хронизации процесса в печени, это было подтверждено результатами гистологического исследования, согласно которому выявлен хронический гепатит С слабой активности с отсутствием фиброза.

Таким образом, для диагностики фиброзного процесса в печени при хронических вирусных гепатитах оказалось достаточно проводить исследование сыворотки крови на содержание супероксиддисмутазы и уровня фосфолипазы Д.

Таким образом, применение предлагаемого способа позволяет расширить аресенал критериев, которые можно успешно использовать для точного и неинвазивного исследования с целью прогнозирования хронизации процесса в печени при ХВГ, что необходимо для оценки состояния структуры печени при решении вопроса о наиболее адекватной лечебной тактике.

Литература

3. Дунаева А.Н., Волкова А.А., Шабунина Е.И. Авторское свидетельство №1142105. Способ диагностики хронических заболеваний печени.

4. Никитин Ю.П., Курилович С.А., Давидик Г.С. Печень и липидный обмен. – Новосибирск. – 1985.

5. Кошиль О.И. Руководство по инфекционным болезням. – СПб, 1996. – 268 с.

6. Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты в клинической практике. – СПб., 1996. – 306 с.

7. Макаров В.К. Патент №2167424. Способ диагностики хронических заболеваний печени.

8. Патент SU 1809384 A1 “Способ диагностики хронических поражений печени” (прототип)

9. Дунаевский О.А. Вирусные гепатиты и дифференциальная диагностика заболеваний печени. – Тверь, 1993. – 263 с.

11. Бурлакова Е.Б. Мембранные липиды как переносчики информации в регуляции метаболизма в норме и патологии. – М.: Наука, 1982. С.22-37.

Формула изобретения

Способ диагностики фиброзного процесса в печени при хроническом вирусном гепатите, включающий определение показателей уровня супероксиддисмутазы, отличающийся тем, что уровень супероксиддисмутазы определяют в сыворотке крови и дополнительно определяют показатель активности фосфолипазы Д и при содержании супероксиддисмутазы менее 1,2 ммоль/мин мг белка, а уровня фосфолипазы Д более 0,05 ммоль/мин мг белка диагностируют фиброзный процесс в печени.