Патент на изобретение №2270450

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии, и касается способа диагностики сифилиса. Сущность изобретения: перед постановкой раздельного ИФА для определения антитрепонемных антител сыворотку крови больного дополнительно обрабатывают магнитным сорбентом с иммобилизированным белком А стафилококка, который сорбирует IgG₁ и IgG₄. Преимущество изобретения заключается в повышении специфичности и упрощении способа. 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике инфекций, передающихся половым путем (ИППП).

Известен способ диагностики сифилиса методом иммуноферментного анализа на твердофазном носителе, в качестве которого используют модифицированный полиглюкином композиционный алюмосиликатный магноиммуносорбент (RU 2200327 С2, 10.03.2003)

Недостатки прототипа: сложный, трудоемкий, требует много времени, не высоко специфичный, не позволяет дифференцировать различные формы заболевания.

Изобретение направлено на решение задачи: упрощение при высокой точности, повышение специфичности.

Технический результат: повышение специфичности способа за счет оценки класс-принадлежности иммуноглобулинов (IgM и IgG) и подклассов IgG.

Указанные задачи достигаются путем определения в сыворотке крови методом ИФА антитрепонемных антител IgM, IgGs после обработки ее магнитным сорбентом на основе белка А золотистого стафилококка штамма Cowan I. Магнитный сорбент входит в комплект препарата «Сангвидет» – диагностикума иммуноглобулинового для определения скрытой крови в фекалиях человека в реакции коагглютинации (ФСП №42-0028338002). Магнитный сорбент на основе белка А позволяет проводить аффинное выделение иммуноглобулина G, преимущественно подклассов IgG₁, Ig G₂ и Ig G₄ за счет Fc-рецепторных свойств лиганда (Е.В.Григорьева, В.Н.Сперанская, Н.М.Болдачева. Изучение возможности определения скрытой крови серологическими экспресс-методами. Журн. микробиологии, 1988, №2, с.26-28, Патент на изобретение №2147130 «Способ определения кровопотери из желудочно-кишечного тракта», 27.03.2000. Бюл. №9).

Данный реагент для диагностики сифилиса ранее не использовался.

Способ осуществляется следующим образом. У больного определяют класс-принадлежность иммуноглобулинов в ИФА в нативной сыворотке и после ее обработки магнитным сорбентом. На первом этапе определяют класс-принадлежность иммуноглобулинов в ИФА с использованием стандартных тест-систем (предварительный диагноз). Далее “истощают” нативную сыворотку с помощью магнитного сорбента. Для этого к небольшому количеству магнитного сорбента добавляют сыворотку, тщательно перемешивают осторожным встряхиванием при комнатной температуре в течение 30-40 мин и затем с помощью магнита проводят разделение суспензии на жидкую и твердую фазы. На втором этапе исследуют жидкую фазу для определения класс-принадлежности оставшихся в ней иммуноглобулинов в ИФА. При этом количество IgM остается неизменным, но может существенно снижаться содержание IgG за счет удаления подклассов IgG₁, IgG₂ и IgG₄. Возможные пять вариантов интерпретации получаемых результатов приведены в таблице.

Если на I и II этапах исследования получают результаты, соответствующие 1 варианту, то диагностируют первичный серонегативный сифилис; если 2 варианту – то диагностируют первичный серопозитивный сифилис; если 3 варианту – вторичный свежий сифилис; если 4 варианту – вторичный рецидивный сифилис; если 5 варианту – поздний сифилис.

Примеры конкретного выполнения

Пример 1

Больной К., 35 лет. Диагноз: Вторичный рецидивный сифилис.

Эпидемиологический анамнез: заболевание выявлено случайно при прохождении профилактического осмотра.

При осмотре выявлена мелкая диффузная розеолезная сыпь на коже туловища, папулезный сифилис, полисклераденит.

Обследование: RW с кардиолипиновым антигеном 3+ в титре 1:10, RW со спирохетным антигеном 4+ в титре 1:20, РИФ 4+, ИФА без сорбции выявил IgG (+), IgM не определялись (-). После обработки сыворотки реагентом в ИФА обнаружены IgM – (+) и IgG – (+). На этом основании поставлен диагноз: Сифилис вторичный свежий. Назначена специфическая антибактериальная терапия.

Пример 2

Больная А., 27 лет. Диагноз: Вторичный рецидивный сифилис. Беременность 10 недель.

Эпидемиологический анамнез: при постановке на учет по беременности проведено комплексное обследование, в том числе RW с кардиолипиновым антигеном – 4+ в титре 1:10. Больная направлена на консультацию к венерологу с диагнозом: Сифилис?

При осмотре обнаружены: диффузное поредение волос, незначительные проявления розеолезной сыпи, широкие кондиломы, полисклераденит. Проведено обследование: ИФА – IgM не обнаружены (-), IgG – определяются (+). После обработки реагентом: IgM – не обнаружены (-), IgG₃ – определяются (+). На основании комплексного обследования подтвержден диагноз: Вторичный рецидивный сифилис. Рекомендовано специфическое антибактериальное лечение, во второй половине беременности – профилактическая антибактериальная терапия с целью предупреждения врожденного сифилиса.

Пример 3

Больной М., 45 лет. Предварительный диагноз: Вторичный сифилис.

Анамнез: Обратился к дерматовенерологу в связи с появлением высыпаний на половых органах.

При осмотре в области половых органов обнаружено единичное плотное по виду папулезное образование с эрозией на поверхности, полисклераденит с преобладанием регионарного, диффузное поредение волос.

Обследование: RW с кардиолипиновым антигеном 4+ в титре 1:160, в отделяемом эрозии обнаружена Treponema pallidum, в ИФА до сорбции определяются IgM (+) и IgG (+), после обработки сорбентом: IgM определяются (+), IgG – не обнаружены (-). Проведенное комплексное обследование позволило провести дифференциальный диагноз между вторичным свежим и первичным серопозитивным сифилисом. Окончательный диагноз: Первичный серопозитивный сифилис. Назначена специфическая антибактериальная терапия.

Положительный эффект от использования предлагаемого способа состоит в следующем: способ высоко специфичен и информативен, экономически целесообразен, позволяет дифференцировать различные формы сифилиса за счет выявления минимальных количеств IgM, которые маскируются (не определяются) при избытке IgG, и обнаружения IgG₃ – маркеров вторичного рецидивного сифилиса.

Формула изобретения

Способ диагностики сифилиса с помощью иммуноферментного метода (ИФА), включающий истощение сывороток с помощью магнитного сорбента и определение оставшихся в ней иммуноглобулинов, отличающийся тем, что перед обработкой сыворотки магнитным сорбентом в ней определяют класс-принадлежность иммуноглобулинов в ИФА с помощью стандартных тест-систем, а затем истощение сыворотки осуществляют магнитным сорбентом на основе белка А золотистого стафилококка штамма Cowan I, с помощью магнита проводят разделение суспензии на жидкую и твердую фазы и в жидкой фазе проводят повторное определение класс-принадлежности оставшихся иммуноглобулинов.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 21.08.2006

Извещение опубликовано: 10.04.2008 БИ: 10/2008