Патент на изобретение №2267530

(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ НАКОПЛЕНИЯ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ

(57) Реферат:

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для бактериологического обнаружения шигелл, сальмонелл, кишечной палочки и других энтеробактерий в воде, пищевых продуктах, а также различном инфекционном материале. Питательная среда в качестве источника азотистого питания содержит панкреатический гидролизат рыбы, в качестве ингибитора посторонней микрофлоры – желчь очищенную сухую и бриллиантовый зеленый, буферные соли – гидрофосфат натрия и дигидрофосфат калия, глюкозу и дополнительно хлорид натрия, придающий среде изотонические свойства, и экстракт кормовых дрожжей в качестве стимулятора роста и источника витаминов группы В. Питательная среда за счет сбалансированности азотистого питания позволяет повысить эффективность накопления шигелл при сохранении высоких ингибиторных свойств среды. 1 табл.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологического обнаружения шигелл, сальмонелл, кишечной палочки и других энтеробактерий в воде, пищевых продуктах, а также различном инфекционном материале.

В настоящее время для данного целевого назначения используется питательная среда №3 для контроля микробной загрязненности (1). Недостатком данной среды являются слабые ингибиторные свойства в отношении грамположительных кокков (S.aureus) и спорообразующих почвенных сапрофитов (B.cereus).

Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявляемому изобретению по совокупности признаков является ЕЕ-бульон, для накопления энтеробактерий (ЕЕ Broth, Mossel), содержащий в качестве азотистого питания пептический перевар животной ткани, триптозу, а также глюкозу, натрий гидрофосфат, калий дигидрофосфат, селективные агенты – желчь очищенную и бриллиантовый зеленый (2).

Отечественный вариант ЕЕ-бульона для накопления энтеробактерий – среда обогащения ЕЕ, готовится на 1% пептонной воде с добавлением также ингредиентов, а вместо сухой желчи вводится нативная бычья желчь или желчные соли (3).

К причинам, препятствующим достижению нижеуказанного технического результата при использовании известной среды, принятой за прототип, является то, что среда обогащения ЕЕ обладает слабой эффективностью накопления шигелл.

Задача предлагаемого изобретения – повышение эффективности накопления шигелл.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что в качестве источника азотистого питания среда содержит панкреатический гидролизат рыбы, в качестве буферных солей – натрий гидрофосфат и калий дигидрофосфат, глюкозу, селективные агенты – желчь очищенную сухую и бриллиантовый зеленый, дополнительно содержит хлорид натрия, придающий среде изотонические свойства, и экстракт кормовых дрожжей – в качестве стимулятора роста и источника витаминов группы В, при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:

Содержание в данной среде сухой желчи и бриллиантового зеленого полностью подавляет рост сопутствующей флоры (грамположительные кокки, спорообразующие почвенные сапрофиты). Среда обладает высокой чувствительностью, отмечается рост и накопление культур – энтеробактерий при посеве из разведения 10^-7, эффективность накопления в среде составляет 2,0-10⁶ раз. Среда сконструирована из отечественных гостированных ингредиентов на основе сухого питательного бульона, имеющего промышленный выпуск на предприятии НПО «Питательные среды» (4).

Среду получают следующим образом.

Пример 1. В колбе с 1 л дистиллированной воды растворяют 9,9 г панкреатического гидролизата рыбы, 4,9 г хлорида натрия, 4,9 г глюкозы, 1,9 г экстракта кормовых дрожжей, 3,7 г натрия гидрофосфата, 0,9 г калия дигидрофосфата, 19,0 г желчи очищенной сухой, 0,014 г бриллиантового зеленого.

Среду доводят до кипения, рН должен соответствовать 7,3±0,2, разливают в стерильные пробирки по 9,5 мл, стерилизуют автоклавированием при температуре 110°С в течение 20 минут. Охлаждают до температуры 30-37°С и засевают тест-культурами. После посева микробной взвеси тест-штаммов пробирки с питательным бульоном перемешивают и инкубируют при температуре 37°С в течение 22±2 часа.

Пример 2. В колбе с 1 л дистиллированной воды растворяют 10,0 г панкреатического гидролизата рыбы, 5,0 г хлорида натрия, 5,0 г глюкозы, 2,0 г экстракта кормовых дрожжей, 3,8 г натрия гидрофосфата, 1,0 г калия дигидрофосфата, 20,0 г желчи очищенной сухой, 0,015 г бриллиантового зеленого.

Далее согласно примеру 1.

Пример 3. В колбе с 1 л дистиллированной воды растворяют 10,1 г панкреатического гидролизата рыбы, 5,1 г хлорида натрия, 5,1 г глюкозы, 2,1 г экстракта кормовых дрожжей, 3,9 г натрия гидрофосфата, 1,1 г калия дигидрофосфата, 21,0 г желчи очищенной сухой, 0,016 г бриллиантового зеленого. Далее согласно примеру 1.

Биологические показатели предлагаемой и известных питательных сред для накопления энтеробактерий представлены в таблице.

Из таблицы видно, что предлагаемая среда имеет преимущество по сравнению с контрольной средой (прототипом – ЕЕ-бульоном Mossel (Himedia)). На данном бульоне и других средах сравнения эффективность накопления шигелл составляет 10³-10⁴ раз, тогда как на предлагаемой питательной среде тот же показатель на два порядка выше и составляет 2,2·10⁶ раз при сохранении высоких ингибиторных свойств. На ЕЕ-бульоне и предлагаемой среде наблюдается полная 100% ингибиция грамположительных кокков и спорообразующих грамположительных палочек.

Питательная среда разработана на основе сухих отечественных ингредиентов, проста в применении, дешевле среды прототипа.

Источники информации

1. М.М.Меджидов. Справочник по микробиологическим питательным средам. М.: Медицина, 2003, с.141-142.

2. EE-Broth, Mossel. Culture Media Catalogue Himedia, 2002-2003, p.303-305.

3. И.В.Голубева, В.А.Килессо и др. Энтеробактерий. Руководство для врачей. Под редакцией академика АМН СССР В.И.Покровского. М.: Медицина, 1985, с.262.

4. ФС 42-224 ВС-88. Питательный бульон для культивирования микроорганизмов, сухой.

Формула изобретения

Питательная среда для накопления энтеробактерий, содержащая питательную основу, глюкозу, натрий гидрофосфат, калий дигидрофосфат, желчь очищенную сухую, бриллиантовый зеленый, воду дистиллированную, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит хлорид натрия и экстракт кормовых дрожжей, в качестве питательной основы – панкреатический гидролизат рыбы, при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды: