Патент на изобретение №2266956

(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ БРУЦЕЛЛ

(57) Реферат:

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к клинической микробиологии, и может быть использовано для бактериологической диагностики бруцеллеза. Питательная среда содержит питательный бульон, пептон ферментативный, витаминный препарат “ЭКД”, Д(+) глюкозу, натрия хлорид, метабисульфит натрия, налидиксовую кислоту, кристаллический фиолетовый, агар микробиологический, дистиллированную воду. Изобретение позволяет повысить ростовые свойства питательной среды и удешевить ее стоимость. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, наиболее эффективно может быть использовано для бактериологической диагностики бруцеллеза.

Бруцеллез относится к зоонозным болезням, при которых основным источником заболевания у людей являются больные сельскохозяйственные животные.

В Российской Федерации ежегодно регистрируется до 500 случаев впервые выявленного бруцеллеза.

Разнообразие клинических проявлений бруцеллеза нередко затрудняет правильную постановку диагноза и требует применения лабораторных методов исследования.

Особые затруднения в диагностике бруцеллеза представляют случаи с неясным анамнезом, с нехарактерной клиникой ранних и особенно поздних проявлений инфекции, рецидивах, заболевания у заразившихся вакцинированных и при нередко встречающихся латентных формах инфекции. Во всех этих случаях лабораторные методы исследования часто приобретают решающее значение (1).

Известны питательные среды для выделения бруцелл агар Мартена, агар Альбими, сывороточно-декстрозный агар, глюкозоглицериновый агар, Эритрит-агар (2, 3, 4).

Указанные среды (сывороточно-декстрозный агар, глюкозоглицериновый агар) не стандартны, трудоемки в применении, кроме того все эти вышеперечисленные среды неселективные и не позволяют выделить культуру бруцелл из инфицированного материала.

Наиболее близким решением задачи того же назначения по совокупности признаков и достигаемому эффекту является питательная среда для выделения бруцелл фирмы Merck (4), содержащая источник азотистого питания – пептон мясной и пептон казеиновый, стимулятор роста – дрожжевой экстракт, а так же Д (+) глюкозу, натрия хлорид, агар, в качестве ингибиторов сопутствующей микрофлоры – бацитрацин, полимиксин, циклогексамид, этиловый фиолетовый.

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известной среды, принятой за прототип, является то, что среда обладает недостаточными ростовыми свойствами, кроме того, данная питательная среда импортного производства дорогостоящая.

Задача предлагаемого изобретения – повышение ростовых свойств среды и удешевление стоимости среды.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что предлагаемая среда дополнительно содержит в качестве источника азотистого питания питательный бульон для культивирования микроорганизмов, в качестве стимуляторов роста – витаминный препарат “ЭКД” и метабисульфит натрия, в качестве ингибиторов сопутствующей микрофлоры – кристаллический фиолетовый и налидаксовую кислоту при следующем соотношении компонентов (5, 6, 7) в г/л дистилированной воды:

Введение в состав предлагаемой среды кристаллического фиолетового и налидиксовой кислоты ингибирует полностью рост сопутствующей грамположительной и грамотрицательной микрофлоры и не оказывает влияние на рост бруцелл. Кроме того питательная среда обладает хорошими ростовыми свойствами, отмечается рост колоний бруцелл на 3 сутки, и то время как на среде-прототипе – на 4-5 сутки. Среда сконструирована из отечественных, гостированных компонентов и не требует внесения ex temporae антибиотиков после стерилизации среды.

Среду получают следующим образом:

Пример 1. В 1 л дистиллированной воды последовательно растворяют 14,0 г питательного бульона для культивирования микроорганизмов, 9,0 г пептона ферментативного, 4,0 г витаминного препарата “ЭКД”, 0,5 г Д(+) – глюкозы, 4,0 г натрия хлорида, 0,05 г метабисульфита натрия, 0,005 г кристаллического фиолетового, 10,0 г агара микробиологического.

Среду доводят до кипения и кипятят 2 минуты. Перед стерилизацией вносят налидиксовую кислоту (0,015 г налидиксовой кислоты растворяют в 0,5 мл 1% раствора NaOH при добавлении 4,5 мл дистиллированной воды) и вносят в питательную среду. Среду стерилизуют автоклавированием при температуре 112°С в течение 20 минут. Разливают в стерильные чашки Петри, предварительно остудив среду до 45°С. Чашки подсушивают в термостате при 37°С в течение (35±5) минут.

Пример 2. В 1 л дистиллированной воды последовательно растворяют 15,0 г питательного бульона для культивирования микроорганизмов, 10,0 г пептона ферментативного, 5,0 г витаминного препарата “ЭКД”, 1,0 г Д(+) – глюкозы, 5,0 г натрия хлорида, 0,1 г метабисульфита натрия, 0,001 г кристаллического фиолетового, 11,0 г агара микробиологического.

Среду доводят до кипения и кипятят 2 минуты. Перед стерилизацией вносят налидиксовую кислоту (0,02 г налидиксовой кислоты растворяют в 0,5 мл 1% раствора NaOH при добавлении 4,5 мл дистиллированной воды) и вносят в питательную среду. Далее согласно примеру 1.

Пример 3. В 1 л дистиллированной воды последовательно растворяют 16,0 г питательного бульона для культивирования микроорганизмов, 11,0 г пептона ферментативного, 6,0 г витаминного препарата “ЭКД”, 1,5 г Д(+) – глюкозы, 6,0 г натрия хлорида, 0,15 г метабисульфита натрия, 0,0015 г кристаллического фиолетового, 12,0 г агара микробиологического.

Среду доводят до кипения и кипятят 2 минуты. Перед стерилизацией вносят налидиксовую кислоту (0,025 г налидиксовой кислоты растворяют в 0,5 мл 1% раствора NaOH при добавлении 4,5 мл дистиллированной воды) и вносят в питательную среду. Далее согласно примерам 1, 2. Контроль качества среды осуществляли путем посева тест-штаммов Brucella abortus ВА 19 из разведения 10^-6 и 10^-7, Echerichia coli 168/59, Proteus vulgaris HX 19 N 222, Stafylococcus aureus 209-P из разведения 10^-3. Через 72-120 часов инкубации посевов в термостате при 37°С определяют наличие роста.

Результаты бактериологического контроля предлагаемой и известной сред представлены в таблице.

Из таблицы видно, что предлагаемая среда обладает более высокими ростовыми свойствами. На предлагаемой среде бруцеллы формируют типичные колонии на 3 сутки, в то время как на известной среде на 4-5 сутки.

Представленные преимущества предлагаемой среды позволят повысить эффективность диагностики бруцеллеза при бактериологическом исследовании клинического материала на наличие бруцелл.

Источники информации

1. Г.И.Лямкин, Л.В.Ляпустина, О.В.Малецкая, И.А.Соколова, И.Ф.Таран, Л.И.Ткаченко, В.Г.Дальвадянц, А.В.Тамбовцев. Состояние и перспективы лабораторной диагностики бруцеллеза. “Клиническая лабораторная диагностика”, 2002, №12, с.46-47.

2. П.А.Вершилова, Бруцеллез. Москва, 1972, с.55-57.

3. Ю.А.Козлов, Питательные среды. Москва, 1950, с.62, 169.

4. Каталог сухих микробиологических питательных сред. Махачкала, 1998, с.48.

5. Каталог фирмы “Мерк”, 1990, с.66.

6. ФС 42-3520-98.

7. ФС 42-3G ВС-91.

8. Химические реактивы и высококачественные химические вещества, Каталог, Москва, Химия, 1983, с.145, 365, 284.

Формула изобретения

Питательная среда для выделения бруцелл, содержащая источник азотистого питания, стимулятор роста, агар микробиологический, Д(+) глюкозу, натрия хлорид, ингибиторы сопутствующей микрофлоры, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит в качестве источника азотистого питания питательный бульон для культивирования микроорганизмов и пептон ферментативный, в качестве стимулятора роста – витаминный препарат “ЭКД” и метабисульфит натрия, в качестве ингибитора сопутствующей микрофлоры – налидиксовую кислоту и кристаллический фиолетовый при следующем содержании компонентов, г/л дистиллированной воды:

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 24.12.2007

Извещение опубликовано: 10.04.2009 БИ: 10/2009