Патент на изобретение №2266753

(54) СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА

(57) Реферат:

Изобретение относится к ветеринарной иммунологии. Способ включает иммунизацию животных в возрасте 10-20 суток вакциной БЦЖ, исследование аллергической туберкулиновой пробой и реиммунизацию в возрасте 14-16 месяцев вакциной БЦЖ. Затем через каждые 12 месяцев животных реиммунизируют противотуберкулезной бесклеточной вакциной ТБЦ-2 подкожно в дозе 5-7 мг белка на одно животное до оздоровления фермы (хозяйства). Исследования на туберкулез проводят через 6 месяцев. Способ позволяет создавать у животных перманентный протективный иммунитет, за счет чего возможно повысить профилактический эффект в 1,5-2 раза. 6 табл.

Изобретение относится к ветеринарной иммунологии, в частности к способу специфической профилактики, и может быть использован для профилактики и оздоровления животноводческих ферм от туберкулеза.

Известен способ профилактики туберкулеза молодняка крупного рогатого скота (патент РФ №2146533, кл. А 61 К 39/04, 31/115; В.Н.Ласкавый, Э.Д.Лакман, 20.03.2000), который предусматривает введение телятам в возрасте от 1 до 10 суток внутримышечно в область крупа по 3-4 мл туберкулина и через 30-40 минут таким же способом вводят по 4-5 мл препарата, содержащего в качестве основного начала формальдегид, а в качестве целевых добавок NaCl и дистиллированную воду. Оба препарата вводят однократно и внутримышечно.

Недостатком данного способа является то, что такого рода иммунизация не создает у телят длительного противотуберкулезного иммунитета и поэтому в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах молодняк старших возрастов и коровы будут не защищены от туберкулеза.

Известен также способ профилактики туберкулеза животных (патент СССР №1790414, кл. А 61 К 39/04; А.С.Донченко с соавт., 23.01.93. Бюл. №3), который предусматривает иммунизацию животных вакциной БЦЖ с иммуномодулятором (высокомолекулярная РНК из дрожжей), затем иммуномодулятор вводят повторно без вакцины БЦЖ через 13-15 дней в том же количестве (0,5-50 мг/кг).

Недостатком данного способа является то, что использование для иммунизации иммуномодулятора повышает не только иммуногенные, но и усиливает реактогенные свойства вакцины БЦЖ, что снижает продолжительность протективного иммунитета у животных. Следовательно, известный способ профилактики длительно не защищает животных от заболевания туберкулезом.

Известен также способ специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота в неблагополучных хозяйствах с помощью вакцины БЦЖ (Наставление по применению вакцины БЦЖ при туберкулезе крупного рогатого скота, 26.02.1990 г.), согласно которому вакциной БЦЖ прививают телят однократно в возрасте 10-20 дней. Это позволяет сократить сроки оздоровления ферм с меньшими материальными затратами. Однако известный способ профилактики туберкулеза защищает животных в течение только одного года.

Задачей изобретения является повышение эффективности профилактики туберкулеза путем создания у животных перманентного (непрерывного) иммунитета против туберкулеза.

Способ профилактики осуществляется иммунизацией вакциной БЦЖ телят в возрасте до 20 суток, реиммунизацией вакциной БЦЖ телок в возрасте 14-16 месяцев, затем нереагирующих животных на ППД-туберкулин дополнительно иммунизируют противотуберкулезной бесклеточной вакциной ТБЦ-2 в дозе 5-7 мг белка на одно животное. Последующие реиммунизации вакциной ТБЦ-2 проводят через каждые 12 месяцев в течение 4-6 лет (время возможной реинфекции). Коров, ревакцинированных ТБЦ-2, исследуют аллергической туберкулиновой пробой через каждые 6 месяцев.

Противотуберкулезная бесклеточная вакцина ТБЦ-2 – новый тип неживой бесклеточной (молекулярной) вакцины. Способ получения вакцины включает культивирование микобактерий из штамма БЦЖ, выделение 2 фракций – цитоплазматической и фракции клеточных оболочек. Фракцию клеточных оболочек конъюгируют на целлюлозной матрице в присутствии треххлористого хрома, затем добавляют цитоплазматическую фракцию. Испытание препарата на лабораторных животных и молодняке крупного рогатого скота показало, что вакцина нового типа обладает высокой иммуногенностью (патент 2217164, МПК А 61 К 39/04 от 27.11.2003, бюл. №33).

Пример 1. Для опыта отобрали 20 телок и в возрасте 10-20 дней, привили вакциной БЦЖ в кожу шеи по 1 мг (1-я группа). Для контроля также отобрали 20 телок в возрасте до 20-ти дней, которым вакцину БЦЖ не вводили (2-я группа).

Затем через 45 дней после иммунизации телят обеих групп исследовали на туберкулез с помощью однократной ППД-туберкулиновой пробы, больными считают среди привитых животных по утолщению кожной складки на 15 мм и выше (патент №1829929, МПК А 61 В 10/00 от 23.07.93, бюл №27) и среди непривитых телят по утолщению кожной складки на 3 мм и выше (Наставление по применению (ППД) туберкулинов для млекопитающих и птиц. Утверждено Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ от 16.02.1999 года).

С целью оценки иммунного статуса в периферической крови животных опытных групп определили число иммунокомпетентных клеток в абсолютном содержании (иммунологические параметры). Реакцией спонтанного розеткообразования (Е-рок) определили количество Т-лимфоцитов; реакцией непрямого глобулинового розеткообразования (ЕА-рок) – клетки-киллеры; комплементарным розеткообразованием (ЕАС-рок) – В-лимфоциты; лимфоциты, реагирующие с антигенами микобактерий с помощью розеткообразования (ЕТ-рок) с эритроцитами быка, адсорбировавшими туберкулин. Подсчет лейкоцитов и лейкограмм проводили по общепринятым методикам.

Далее иммунологические параметры исследовали дискретно-динамическим методом, который автоматизирован специальной программой для ЭВМ (заявка на выдачу патента №00669275 от 21.01.2003 г.). По результатам этих исследований составлены дифференциально-прогностические таблицы, позволяющие оценить иммунный статус животных, привитых противотуберкулезными препаратами.

В результате исследований установили (табл.1) высокую активность иммунокомпетентных клеток у 75% животных через 5 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ, у 40% животных через 12 месяцев (табл.2) и у 35% животных через 14 месяцев (табл.3).

Результаты этих исследований убеждают о необходимости проведения реиммунизаций телок в возрасте 14 месяцев вакциной БЦЖ внутрикожно в дозе 1 мг на одно животное.

Иммунный статус у животных после ревакцинации определяли также с помощью дискретно-динамического анализа. Установили у 70% животных (табл.4) повышенную активность иммунокомпетентных клеток через 6 месяцев и у 25% животных через 14 месяцев после ревакцинации.

Последующую реиммунизацию коров опытной группы провели через 14 месяцев бесклеточной вакциной ТБЦ-2. Перед реиммунизацией животных исследовали туберкулиновой аллергической пробой и установили, что у всех коров кожная реакция на ППД-туберкулин отсутствовала. Коровам опытной группы вакцину ТБЦ-2 ввели подкожно в дозе 6 мг белка на одно животное.

Через 6 месяцев после введения вакцины ТБЦ-2 животных исследовали туберкулиновой аллергической пробой и оценку иммунного статуса коров провели дискретно-динамическим анализом. Туберкулиновой аллергической реакции у коров не обнаружено. Иммунный статус коров, реиммунизированных вакциной ТБЦ-2, описан в таблице 5, где у 12 из 20 коров (60%) установили повышенную активность иммунокомпетентных клеток.

Аналогичные исследования коров проведены через 9 месяцев после реиммунизации вакциной ТБЦ-2. Животных, реагирующих на ППД-туберкулин, не выявлено, оценка иммунного статуса коров показана в дифференциально-прогностической таблице 6.

Таким образом, в эксперименте разработана схема вакцинации крупного рогатого скота, позволяющая создавать у животных перманентный протективный иммунитет, этим самым повысить профилактический эффект в 1,5-2 раза.

Пример 2. Производственное испытание схемы вакцинации крупного рогатого скота провели в ОПХ СибМИС Таврического района Омской области.

В хозяйстве по причине туберкулеза в 1999 году поголовье крупного рогатого скота сдали на убой. После проведения санитарных мероприятий в одно из подготовленных помещений разместили 144 телки в возрасте 14-16 месяцев из благополучных по туберкулезу ферм. При исследовании на туберкулез по всей группе дважды получили отрицательный результат. При исследовании через 4 месяца после завоза выделили 18 животных, реагирующих на туберкулин. Провели диагностический убой животных и у двух патологоанатомическим исследованием установили туберкулез.

Затем дважды двойной туберкулиновой пробой исследовали оставшихся животных, отделили реагирующих на ППД-туберкулин и нереагирующих животных привили вакциной БЦЖ внутрикожно в дозе 1 мг на одно животное.

Через 14 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ коров исследовали туберкулиновой аллергической пробой и установили, что у всех животных реакция отсутствовала. Также дискретно-динамическим анализом иммунологических параметров было установлено уменьшенное число взаимосвязей в системе иммунитета, что явилось основанием провести реиммунизацию коров бесклеточной вакциной ТБЦ-2. Коров через 6 и 12 месяцев после реиммунизации исследовали аллергической реакцией и установили, что все животные не реагируют на ППД-туберкулин.

Следовательно, реиммунизация вакциной ТБЦ-2 предохраняет животных от заболевания туберкулезом и позволяет контролировать стадо крупного рогатого скота на туберкулез аллергической реакцией 2 раза в год (через 6 месяцев после ревакцинации). В последующем по результатам дискретно-динамического анализа ревакцинацию провели еще дважды с интервалом 12 месяцев, что позволило в условиях неблагополучной по туберкулезу крупного рогатого скота ферме сохранить благополучие стада более 3 лет (срок наблюдения), предотвратить экономический ущерб только за один год на сумму 432 тыс. рублей.

В дальнейшем родившихся телят от коров данного стада иммунизируют вакциной БЦЖ в возрасте 10-20 дней, затем через 30-45 дней после иммунизации их дополнительно исследуют на туберкулез с помощью однократной туберкулиновой пробы, нереагирующих телят допрививают, реагирующих по увеличению кожной складки до 15 мм и более изолируют, после откорма сдают на убой. Из вакцинированного молодняка комплектуют отдельные группы по полу и возрасту и содержат обособленно. Повторное исследование однократной туберкулиновой пробой привитого молодняка проводят через 14 месяцев, реагирующих сдают на убой, нереагирующих телок формируют в отдельное стадо (телки перед осеменением) и ревакцинируют БЦЖ. В дальнейшем с этими животными поступают как описано ранее.

Последующие вакцинации коров ТБЦ-2 проводят ежегодно в течение 4-6 лет (время возможной реинфекции) после оздоровления хозяйства (фермы) от туберкулеза. Исследование коров на туберкулез проводят 2 раза в год через 6 месяцев. Из числа реагирующих отбирают 2-3 коровы для проведения контрольно-диагностического убоя.

Таблица 1
Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у телок через 5 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ, тыс/мкл
№ п/п	Сочетание, вариабельный параметр (базис)	Интактные				Привитые
		n	t-критерий по Стьюденту	вариабельный	базис	n	t-критерий по Стьюденту	вариабельный	базис
1	В-лимфоциты (Т-киллеры)	20	3,46	0,71	0,65	20	2,55	0,29	0,46
2	Т-киллеры (лейкоциты)		2,92	1,21	6,65
3	Антигенреактивные лимфоциты (лейкоциты)		2,50	0,73	6,65
4	Лейкоциты (В-лимфоциты)		2,42	6,20	1,05
5	В – (Т-лимфоциты)		2,29	0,76	1,01
6	Лейкоциты (Т-киллеры)		2,27	6,20	0,65
7	Т-лимфоциты (лейкоциты)						4,29	0,80	6,20
8	Т-лимфоциты (нейтрофилы)						3,63	0,53	1,10
9	Лимфоциты (нейтрофилы)						2,89	3,26	1,10
10	Антигенреактивные лимфоциты (Т-киллеры)						2,82	0,28	0,46
11	Нейтрофилы (лимфоциты)						2,72	1,03	3,38
12	Лейкоциты (Т-лимфоциты)						2,58	5,13	0,64
13	В – (антигенреактивные лимфоциты)						2,49	0,64	0,42
14	Нейтрофилы (Т-лимфоциты)						2,20	0,94	0,64
Количество иммунных животных		7	35%			15	75%

Таблица 2
Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у телок через 12 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ, тыс/мкл
№ п/п	Сочетание, вариабельный параметр (базис)	Интактные				Привитые
		n	t-критерий по Стьюденту	вариабельный	базис	n	t-критерий по Стьюденту	вариабельный	базис
1	Антигенреактивные-(В-лимфоциты)	20	3,31	0,12	1,85	20
2	Лейкоциты (В-лимфоциты)		4,26	6,92	1,85
3	Лейкоциты (Т-киллеры)		2,75	6,23	0,99		3,08	>=10,4	>=2,12
4	Т-киллеры (лейкоциты)						3,14	>=2,22	>=8,50
Количество иммунных животных		6	30%			8	40%

Таблица 3
Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у телок через 14 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ, тыс/мкл
№ п/п	Сочетание, вариабельный параметр (базис)	Интактные				Привитые
		n	t-критерий по Стьюденту	вариабельный	базис	n	t-критерий по Стьюденту	вариабельный	базис
1	Е- (лейкоциты)	20	3,20	2,02	7,30	20
2	ЕТ- (нейтрофилы)		2,17	1,26	1,55
3	Т-киллеры (Т-лимфоциты)						3,30	1,41	1,17
4	В-лимфоциты (Т-киллеры)						2,44	1,06	1,64
5	В- (Т-лимфоциты)						2,23	1,14	1,17
Количество иммунных животных		6	30%			7	35%

Таблица 4
Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у телок и нетелей, привитых вакциной БЦЖ, тыс/мкл
		Через 6 месяцев после вакцинации				Через 14 месяцев после вакцинации
№ п/п	Сочетание, вариабельный параметр (базис)	n	t-критерий по Стьюденту	вариабельный	Базис	n	t-критерий по Стьюденту	вариабельный	Базис
1	Т-лимфоциты (лейкоциты)	20	2,71	0,90	6,40	20	4,56	0,79	7,80
2	Лейкоциты (Т-лимфоциты)		4,29	8,10	1,30		2,73	7,93	0,69
3	Нейтрофилы (Т-киллеры)						2.55	1,50	0,61
4	Лейкоциты (Т-киллеры)		4,29	8,10	1,14		2,44	8,38	0,61
Количество иммунных животных		14	70%			5	25%

Таблица 5
Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у коров через 6 месяцев после ревакцинации ТБЦ-2, тыс/мкл
№ п/п	Сочетание, вариабельный параметр (базис)	n	t-критерий по Стьюденту	Вариабельный	Базис
1	В – (Т-лимфоциты)	20	5,00	0,42	0,36
2	Т-киллеры (лейкоциты)		4,50	1,07	4,90
3	Антигенреактивные (В-лимфоциты)		4,45	0,10	0,44
4	Лейкоциты (Т-киллеры)		4,11	4,87	1,14
5	Антигенреактивные (Т-лимфоциты)		3.80	0,08	0,36
6	Лейкоциты (Т-лимфоциты)		3,76	4,87	0,36
7	Т-лимфоциты (антигенреактивные)		3,46	0,40	0,07
8	Т-лимфоциты (Т-киллеры)		3,37	0,47	1,14
9	Т-киллеры (Т-лимфоциты)		3,35	1,16	0,36
10	Т-лимфоциты (лейкоциты)		3,30	0,40	4,90
11	Лейкоциты (В-лимфоциты)		3,17	5,00	0,44
12	Т – (В-лимфоциты)		3,13	0,42	0,44
13	В-лимфоциты (лейкоциты)		2,60	0,51	4,90
14	Лейкоциты (антигенреактивные)		2,53	4,90	0,07
15	В-лимфоциты (антигенреактивные)		2,51	0,45	0,07
16	Т-киллеры (антигенреактивные)		2,41	1,07	0,07
17	В-лимфоциты (Т-киллеры)		2,38	0,59	1,14
18	Т-киллеры (В-лимфоциты)		2,37	1,26	0,44
19	Антигенреактивные (нейтрофилы)		2,36	0,13	0,68
20	Антигенреактивные (лейкоциты)		2,30	0,09	4,90
21	Нейтрофилы (В-лимфоциты)		2,24	0,80	0,44
Количество иммунных животных		12	60%

Таблица 6
Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у коров через 9 месяцев после ревакцинации ТБЦ-2, тыс/мкл
№ п/п	Сочетание, вариабельный параметр (базис)	n	t-критерий по Стьюденту	Вариабельный	Базис
1	Т-лимфоциты (лейкоциты)	20	5,56	0 53	4,70
2	В-лимфоциты (лейкоциты)		3,48	0,46	4,70
3	Т – (В-лимфоциты)		3,26	0,60	0,49
4	Лейкоциты (Т-лимфоциты)		3,25	4,82	0,51
5	Лейкоциты (В-лимфоциты)		3,15	4,83	0,49
6	Лейкоциты (Т-киллеры)		2,57	4,90	0,97
7	В – (Т-лимфоциты)		2,57	0,43	0,51
8	В-лимфоциты (Т-киллеры)		2,27	0,44	0,97
9	В-лимфоциты (антигенреактивные)		2,23	0, 54	0,30
Количество иммунных животных		9	45%

Формула изобретения

Способ профилактики туберкулеза, включающий иммунизацию животных в возрасте 10-20 суток вакциной БЦЖ, затем исследование аллергической туберкулиновой пробой и реиммунизацию в возрасте 14-16 месяцев вакциной БЦЖ, отличающийся тем, что затем через 12 месяцев не реагирующих на туберкулин животных реиммунизируют противотуберкулезной бесклеточной вакциной ТБЦ-2 подкожно в дозе 5-7 мг белка на одно животное, после чего реиммунизацию вакциной ТБЦ-2 проводят через каждые 12 месяцев до оздоровления фермы (хозяйства), а исследования на туберкулез проводят через 6 месяцев.