Патент на изобретение №2154826
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ПОСТАНОВКИ АГГЛЮТИНАЦИОННОГО ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА
(57) Реферат: Способ может быть использован в медицине, а именно в иммунологии. В качестве твердых фаз используют оксиды, гидроксилы, фосфаты, соли карбоновых кислот металлов. Перед сорбцией биолигандов твердые фазы подвергают модификации соединениями общей формулы R – (X = O)n, где X – азот, углерод, R – ароматический радикал, n = 1-2. Способ обеспечивает повышение точности анализа. 4 табл. Изобретение относится к области биотехнологии и медицины, может быть использовано в диагностике различных инфекционных и соматических патологий. При этих заболеваниях в организме больного возникают антитела, комплементарные антигенам, лежащим в основе патогенеза заболевания. Эти антитела и антигены могут обнаруживаться в периферической крови, однако, до настоящего времени не созданы диагностические препараты, отличающиеся стабильностью иммунохимических свойств и позволяющие осуществлять данную реакцию бесприборно. Отсутствуют надежные и простые методы для скрининговых исследований больных и населения, относящихся к группам риска, что важно для коррекции терапии и определения прогноза заболевания. Цель изобретения – разработка экспресс-метода для определения наличия вида антител и антигенов – маркеров различных нозологий, увеличение чувствительности анализа, расширение сырьевой базы для этого способа. Аналогом данного метода является способ определения различных антигенов либо антител путем лечения одного из компонентов; антигенов либо комплементарных им антител, именуемых в дальнейшем биолигандами, различными метками – радиологическими, ферментными, флуоресцентными, эритроцитарными [1]. Аналогом данного метода является способ определения антител против вируса клещевого энцефалита в сыворотке крови с помощью реакции непрямой гемагглютинацни [2]. Аналогом данного метода является также способ определения антирезусных антител при аутоиммунной гемолитической анемии [3] с помощью прямой реакции гемагглютинации [4]. Прототипом данного технического решения является способ постановки агглютинационного иммунохимического анализа, описанный в [4]. Данный способ постановки агглютинационного иммунологического анализа, включающий постановку реакции агглютинации с использованием оксидов, гидроксидов, фосфатов и солей карбоновых кислот металлов с сорбированными на их поверхности биоспецифическими лигандами путем соединения последних с биологическими жидкостями, имеет ряд недостатков. Недостатками прототипа можно считать: 1) многоэтапность и длительность приготовления реагентов; 2) нестойкость приготовленных реагентов в связи с низким значением pH исходного буферного раствора; 3) недостаточную чувствительность агглютинационного иммунологического анализа. Указанные недостатки преодолеваются, если в качестве дисперсных твердых фаз для последующей сорбции биоспецифических препаратов (биолигандов) используют дисперсные препараты: частицы оксидов, гидроксидов, фосфатов, солей карбоновых кислот металлов, которые перед сорбцией биоспецифических препаратов (биолигандов) модифицируют соединениями общей формулы: R-(X=O)n, где X – азот, углерод, R – ароматический радикал, n = 1-2. Указанные соединения в случае X = азот представляют собой ароматические нитрозопроизводные [5] . В случае X = углерод эти соединения представляют собой хиноны [6] . Ароматические нитрозопроизводные и хиноны используют в анилокрасочной промышленности в качестве промежуточных продуктов в производстве различных красителей. Применение их в качестве модификаторов твердых фаз при агглютинационном иммунохимическом анализе ранее описано не было. Оксиды, гидроксиды, фосфаты, соли карбоновых кислот объединены общим понятием “дисперсные препараты” [7], т.к. для них характерны нерастворимость в воде и водных буферных растворах и дисперсность, позволяющая проводить агглютинацию в требуемом практикой временном интервале от 20 мин до 1 ч. Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения. Пример 1 Осуществляют нагружение частиц оксида железа (Fe2O3) по прототипу и по предлагаемому способу. В качестве модификаторов используют нитрозобензол (НБ), динитрозобензол (ДНБ), бензохинон (БХ) и нафтохинон (ИХ). В качестве биолигандов используют противокоревой  -глобулин человека, туберкулезный антиген и антитела к поверхностному антигену рака молочной железы. Результаты эксперимента представлены в табл. 1.
Пример 2Осуществляют нагружение частиц гидроокиси меди по прототипу и по предлагаемому способу. В качестве модификаторов используют нитрозодиметиланилин (НДМА), динитробензол (ДНБ), бензохинон (БХ) и нафтохинон (НХ). В качестве биолигандов используют препараты, аналогичные примеру 1. Результаты эксперимента представлены в табл. 2. Пример 3 Осуществляют нагружение частиц оксалата кальция по прототипу и по предлагаемому способу. В качестве модификаторов и биолигандов используют соединения, аналогичные примеру 1. Результаты эксперимента представлены в табл. 3. Пример 4. Осуществляют нагружение частиц фосфата алюминия по прототипу и по предлагаемому способу. В качестве модификаторов используют препараты, аналогичные примеру 1. В качестве биолигандов применяют генно-инженерные антигены ВИЧ, фракцию 1 чумного микроба, поликлональные антитела к поверхностному антигену вируса гепатита B. Результаты эксперимента представлены в табл. 4. Таким образом, из представленных примеров явно видны преимущества заявляемого технического решения по сравнению с прототипом в плане обеспечения большей чувствительности анализа. Наряду с этим обеспечивается расширение сырьевой базы: гидрозольные препараты оказывается возможным изготавливать не только на импортном оксиде железа, но и на отечественных гидроксидах, фосфатах и солях карбоновых кислот. Литература 1. Ройт А. Основы иммунологии. – М.: Мир, 1991. – c. 91-93 2. Никитин В.М. Справочник методов иммунологии. Кишинев, 1982. – 304 с. 3. Никитин В.М. Справочник методов иммунологии. – Кишинев, 1982. – 304 с. 4. Мешандин А. Г. Физико-химические аспекты сорбционных процессов при синтезе твердофазных биолигандов.- М., 1994. – c. 31-34. 5. Химическая энциклопедия. – Т. 3. – М., 1992. – c. 274-275. 6. Химическая энциклопедия. – Т. 5. – М., 1998. – С. 270-272. 7. Карякин Ю.В., Ангелов И.И. Чистые химические вещества. – М., 1974 – 407 c. Формула изобретения
R – (X – O)n, где Х – азот, углерод; R – ароматический радикал; n = 1 – 2. РИСУНКИ
MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 22.08.2000
Номер и год публикации бюллетеня: 1-2003
Извещение опубликовано: 10.01.2003
|
||||||||||||||||||||||||||
