Патент на изобретение №2265850

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ СОСТОЯНИЯ НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и неонатологии. Способ заключается в том, что одновременно определяют активность сукцинатдегидрогеназы и альфа-глицерофосфатдегидрогеназы в лимфоцитах периферической крови беременной за 1-3 дня до родов и при значениях активности сукцинатдегидрогеназы 4,12-8,75 гранул/лимф. и альфа-глицерофосфатдегидрогеназы 3,00-5,15 гранул/лимф. прогнозируют тяжелое состояние новорожденного с выраженными метаболическими нарушениями в первые три дня жизни, а при значениях активности сукцинатдегидрогеназы 13,50-18,25 гранул/лимф. и альфа-глицерофосфатдегидрогеназы 5,70-9,45 гранул/лимф. прогнозируют удовлетворительное состояние с метаболическими изменениями функционального характера. Способ обеспечивает повышение точности способа. 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и неонатологии, и может быть использовано для дородового прогнозирования состояния новорожденного.

К недостатку данных способов относится определенный субъективизм оценки, связанный с отсутствием применения высокочувствительных лабораторных методов. Наряду с этим, в указанных способах нередко имеются сомнительные результаты (до 8-10%) кроме допустимой ошибки.

Однако при данном способе биохимические исследования проводятся после рождения ребенка, что не позволяет предпринять лечебно-профилактические мероприятия и быть полезным при выборе оптимального способа родоразрешения в интересах новорожденного. Кроме этого, исследования в указанном способе не диагностируют метаболические нарушения в организме и тем самым не позволяют прогнозировать метаболические нарушения у детей в раннем неонатальном периоде.

Однако при указанном способе не учитываются метаболические нарушения в организме беременной и, следовательно, ее будущего новорожденного. Хотя известно, что метаболические нарушения у новорожденного могут определять тяжесть его состояния. Кроме того, к недостатку способа относится и то, что исследования в указанном способе проводятся в отдаленном от родов периоде (в начале III триместра беременности), что не позволяет получить высокую точность результата прогнозирования.

Целью предлагаемого изобретения является повышение точности способа.

Поставленная цель достигается в изобретении тем, что за 1-3 дня до родов в лимфоцитах капиллярной крови беременных женщин цитохимическим методом одновременно определяют активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и альфа-глицерофосфатдегидрогеназы (-ГФДГ) и при значениях активности СДГ 4,12-8,75 гранул/лимф. и -ГФДГ 3,00-5,15 гранул/лимф. прогнозируют тяжелое состояние новорожденного с выраженными метаболическими нарушениями в первые три дня жизни, при значениях активности СДГ 13,50-18,25 гранул/лимф. и -ГФДГ 5,70-9,45 гранул/лимф. прогнозируют удовлетворительное состояние новорожденного с метаболическими изменениями функционального характера.

Период адаптации новорожденного к внеутробной жизни характеризуется напряженностью метаболических процессов организма. Поэтому при оценке состояния новорожденного важными становятся знания о внутриклеточных биоэнергетических процессах.

“Маркером” митохондрий и показателем энергетических процессов в цикле Кребса является окислительно-восстановительный фермент – СДГ. Низкая активность СДГ будет свидетельствовать об угнетении функций цикла Кребса – ключевого звена метаболизма.

В то же время известно, что такой фермент, как -ГФДГ способствует проникновению кодегидрогеназ в интактные митохондрии, тем самым компенсаторно увеличивает число функционально активных митохондрий и улучшает метаболические процессы в клетке. Поэтому для правильной оценки энергетического потенциала клетки важным является одновременное исследование активности как СДГ, так и -ГФДГ.

Предлагаемый способ основан на цитохимическом исследование по методике Р.Н.Нарциссова активности окислительно-восстановительных ферментов в лимфоцитах (СДГ и

Полученные результаты сравнивают с показателями СДГ и -ГФДГ тех беременных, чьи новорожденные имели тяжелое состояние и метаболические нарушения в первые дни неонатального периода.

Преимуществом предлагаемого способа является объективная оценка энергетического потенциала клетки организма, основанная на определении активности СДГ и -ГФДГ, которые отражают состояние цикла Кребса и его резервного стимулятора – альфа-глицерофосфатного шунта.

Отличительной особенностью способа является исследование окислительно-восстановительных ферментов в лимфоцитах крови будущей матери на последних сроках беременности. Это позволяет прогнозировать метаболические нарушения в организме новорожденного до его рождения.

Способ характеризуется простотой выполнения обследования и доступностью учреждениям практического здравоохранения.

Предлагаемый способ был успешно апробирован на базе детских отделений Городского клинического родильного дома №2 г.Астрахани. В течение 2002-2003 гг. в целом было обследовано 120 беременных и их новорожденных с различным течением раннего неонатального периода. Результаты исследования, а именно полученные значения активности СДГ и -ГФДГ лимфоцитов периферической крови беременных и их новорожденных, обработаны методом вариационной статистики и представлены в таблице.

Ниже приводятся результаты апробации.

Пример 1.

Ребенок Д. (история развития новорожденного №129), девочка, от шестой беременности, третьих родов. В анамнезе у матери три артитфициальных аборта и двое родов. Настоящая беременность протекала на фоне ОП-гестоза I-II степени и анемии с начала второго триместра.

За три дня до родов у беременной по методике Р.Н.Нарциссова проведено цитохимическое исследование активности СДГ и -ГФДГ лимфоцитов капиллярной крови. Для этого утром натощак у беременной была взята кровь из пальца и сделаны мазки-отпечатки. После чего высушенные мазки периферической крови фиксировали при комнатной температуре в течение 30 секунд в ацетон-трилоне (рН 5,2-5,4), приготовленного путем добавления к 200 мл 60% раствора ацетона 10-12 г трилона. Затем мазки промывали в двух сменах дистиллированной воды и высушивали на штативе. Далее помещали их в подогретую до 37°С инкубационную среду (рН 7,2-7,4), приготовленную в зависимости от выявляемого фермента разведением сухой навески 0,2М сукцината натрия или динатрия--глицерофосфата с 40 мл дистиллированной воды, инкубировали в течение 60 минут на водяной бане при температуре 37,0°С. По окончании инкубации стекла ополаскивали дистиллированной водой и окрашивали 0,5% водным раствором януса зеленого в течение 60 секунд, после чего снова промывали проточной водой и высушивали на штативе.

Окрашенные мазки после нанесения капли иммерсионного масла просматривали в световом микроскопе с бинокулярной насадкой объективом х90 и окуляром х7. Продукт реакции в цитоплазме лимфоцитов на фоне светло-голубого окрашивания ядра выявляли в виде крупных сферических гранул диформазана темно-фиолетового цвета, образовавшихся в результате взаимодействия фермента с соответствующим субстратом. Чтение результатов осуществлялось путем подсчета количества гранул в каждом из 30 лимфоцитов мазка периферической крови.

Оказалось, что средняя активность СДГ составляет 8,75 гр/лимф., а средняя активность -ГФДГ – 5,00 гр/лимф. Подобные значения после сравнения с данными таблицы позволяют прогнозировать тяжелое состояние новорожденного с выраженными метаболическими нарушениями в первые три дня жизни, что подтвердилось в дальнейшем.

Ребенок был рожден в тяжелом состоянии. Масса ребенка при рождении 3150 г, рост 49 см, оценка по шкале Апгар 5/7 баллов. Проведение цитохимического исследования периферической крови новорожденного в 1-й день жизни подтвердило ранее выявленную клеточную энергетическую недостаточность организма. Средняя активность окислительно-восстановительных ферментов лимфоцитов была низкой и составила для СДГ 6,94 гр/лимф., а для -ГФДГ – 4,07 гр/лимф. Метаболические нарушения новорожденного будут способствовать появлению перинатальных осложнений.

С 1-го дня жизни у ребенка было отмечено тяжелое состояние, снижение спонтанной двигательной активности, гипорефлексия, общая мышечная гипотония. Максимальная убыль массы тела составила к 3 дню 11%.

В последующем в комплекс лечебных мероприятий были включены препараты, улучшающие клеточный метаболизм.

Пример 2.

Ребенок А. (история развития новорожденного №313), мальчик, от четвертой беременности, первых родов. В анамнезе у матери три артифициальных аборта в сроках до 12 недель беременности. Настоящая беременность протекала на фоне ОГ-гестоза I-II степени, угрозы прерывания в 22-24 недели, кандидозного кольпита. По данным ультразвукового исследования (УЗИ) и кардиотокографии (КТГ) выявлялись признаки фетоплацентарной недостаточности.

За два дня до родов у женщины были взяты мазки-отпечатки периферической капиллярной крови и выполнено цитохимическое исследование по методике Р.П.Нарциссова, как в примере 1. Оказалось, что уровень активности СДГ составляет 4,12 гр/лимф., а средняя активность -ГФДГ – 3,85 гр/лимф. Диагностируемые у беременной значения клеточных окислительно-восстановительных ферментов позволяют с высокой точностью прогнозировать тяжелое состояние новорожденного с метаболическими нарушения, что и подтвердилось в дальнейшем.

Ребенок родился с массой 2450 г, ростом 47 см, оценкой по шкале Апгар на 5/7 баллов, отмечен синдром задержки внутриутробного развития плода. Наблюдалось тяжелое состояние новорожденного в первые дни жизни.

Исследование дегидрогеназ лимфоцитов в периферической крови у новорожденного показало, что средняя активность СДГ составляет 3,54 гр/лимф., а -ГФДГ – 3,13 гр/лимф. Подобные значения подтверждают клеточную энергетическую недостаточность у новорожденного, которая ранее (до родов) была уже диагностирована предлагаемым способом.

Со вторых суток в поведении ребенка стали заметны изменения его неврологического статуса, которые проявлялись в виде синдрома угнетения ЦНС, подтверждающие тяжесть состояния. Отмечено раннее появление желтухи – на 2-е сутки. Максимальная убыль массы тела на 3-и сутки составила 10%.

Пример 3.

Ребенок П. (история развития новорожденного №914), мальчик, от четвертой беременности, вторых родов. Первая беременность завершилась срочными родами, вторая – прерыванием по социальным показаниям в 21-22 недели, третья – самопроизвольным выкидышем в сроке 6-7 недель. Настоящая беременность протекала на фоне умеренно выраженной анемии, О-гестоза I-II степени, угрозы прерывания в 5-6 недель и 24-26 недель беременности.

Накануне родов, за один день до них, было проведено цитохимическое исследование периферической крови беременной как в примере 1. Обнаружено: средняя активность СДГ – 7,50 гр/лимф., а -ГФДГ – 4,75 гр/лимф. Полученные значения свидетельствуют о наличии клеточной метаболической недостаточности у беременной, которая будет наблюдаться, и у ее будущего ребенка. Это полностью подтвердилось в дальнейшем.

Ребенок родился в тяжелом состоянии с массой 3050 г, ростом 49 см, оценкой по шкале Апгар 6/7 баллов.

Средняя активность СДГ в периферической крови новорожденного в 1 день жизни составила 5,95 гр/лимф., -ГФДГ – 3,86 гр/лимф. Невысокий клеточный энергетический потенциал новорожденного соответствует тяжелому состоянию с нарушением метаболизма.

На вторые сутки у новорожденного отмечено угнетение физиологических рефлексов, в том числе и сосательного. Тоны сердца были приглушены, отмечалась аритмия. Максимальная убыль массы тела на 3-и сутки составила 11%. Для улучшения состояния новорожденного и его клеточного метаболизма была назначена метаболическая терапия.

Пример 4.

Ребенок А. (история развития новорожденного №1125), девочка, от третьей беременности. В анамнезе у матери одни срочные роды и один самопроизвольный выкидыш в 6 недель беременности. При данной беременности наблюдалась умеренно выраженная анемия и угроза прерывания в 24-26 недели беременности.

За три дня до родов было произведено исследование периферической крови беременной по определению активности окислительно-восстановительных ферментов. Установлено, что средняя активность СДГ составляет 10,50 гр/лимф., а -ГФДГ – 11,00 гр/лимф. Подобные значения, как видно это из таблицы, не позволяют сделать прогноз о тяжести состояния новорожденного в первые дни жизни, и этим определяется неточность способа (9%).

Ребенок родился с массой 3200 г, ростом 50 см, оценкой по шкале Апгар на 7/8 баллов. Средняя активность СДГ в 1 день жизни составила 8,35 гр/лимф., -ГФДГ – 8,95 гр/лимф. В данном случае судить о тяжести состояния сложно, т.к. низкие значения активности СДГ компенсируются высокими показателями активности -ГФДГ, а потому состояние ребенка может быть как удовлетворительным, так и тяжелым на фоне реализации перинатальных факторов.

Наблюдение за ребенком показало следующее. Состояние ребенка было удовлетворительным. Отмечалась выраженность транзиторного катара кожи и шелушения. Активность физиологических рефлексов была сохранена. Максимальная убыль массы тела на 3-и сутки составила 9%. Патологических изменений в течение раннего неонатального периода не выявлено.

Пример 5.

Ребенок П. (история развития новорожденного №1005), девочка, от первой беременности. Осложнений в течение беременности не наблюдалось.

За два дня до родов было выполнено цитохимическое исследование периферической крови беременной, как в примере 1. Результаты исследования: средняя активность СДГ – 13,50 гр/лимф., а -ГФДГ – 7,50 гр/лимф. Полученные значения после сравнения с данными таблицы позволяют утверждать, что у новорожденного в раннем постнатальном периоде будет отмечено удовлетворительное состояние с метаболическими изменениями функционального характера.

Масса ребенка при рождении составила 3600 г, рост – 50 см, оценка по шкале Апгар – 8/8 баллов, состояние удовлетворительное. Средняя активность СДГ в периферической крови новорожденного в 1-ый день жизни – 8,10 гр/лимф., -ГФДГ ˜ 10,00 гр/лимф. Максимальная убыль массы тела отмечена к концу 2-х суток жизни и составила 5%. Физиологическая желтуха и физиологический катар кожи были умеренно выраженными. Пуповинный остаток отпал на 3 сутки, пупочная ранка быстро эпителизировалась.

Пример 6.

Ребенок С. (история развития новорожденного №1065), мальчик, от второй беременности, первых родов. В анамнезе у матери встречался самопроизвольный выкидыш в сроке 6-7 недель беременности. При настоящей беременности наблюдалась анемия легкой степени и угроза прерывания в 5-6 недель гестации. Женщина имеет миопию III-IV степени, ввиду чего родоразрешена путем операции кесарева сечения.

За один день до операции проведено исследование периферической крови беременной по методике Р.П.Нарциссова. Средняя активность СДГ составила – 18,25 гр/лимф., а -ГФДГ – 4,0 гр/лимф. Подобные значения, как видно из таблицы, попадают в диапазон, позволяющий прогнозировать удовлетворительное состояние новорожденного с метаболическими изменениями функционального характера. Это полностью подтвердилось клиническим наблюдением за ребенком после рождения, а также полученными результатами цитохимического исследования периферической крови новорожденного.

Масса ребенка при рождении составила 3900 г, рост – 52 см, оценка по шкале Апгар – 7/8 баллов, состояние удовлетворительное. Средняя активность СДГ в периферической крови ребенка во 2-й день жизни – 15,60 гр/лимф., -ГФДГ – 9,50 гр/лимф. Максимальная убыль массы тела отмечена к концу 2-х суток жизни и составила 4%. Физиологическая желтуха и физиологический катар кожи были слабо выраженными. На 3-и сутки отпал пуповинный остаток и пупочная ранка быстро эпителизировалась.

Пример 7.

Ребенок Ю. (история развития новорожденного №1023), девочка, от второй беременности, первых срочных родов. В анамнезе у матери один артифициальный аборт в 9 недель беременности. Настоящая беременность протекала на фоне раннего токсикоза легкой степени. Соматическая и гинекологическая патология не обнаружена. При ультразвуковом исследовании (УЗИ) патологии со стороны плода в течение беременности не выявлено.

За два дня до родов у будущей матери было выполнено цитохимическое исследование периферической крови по методике Р.П.Нарциссова, как в примере 1. Оказалось, что средняя активность СДГ составила 16,50 гр/лимф., а -ГФДГ – 6,00 гр/лимф. Подобные значения, как это видно из таблицы 1, позволяют прогнозировать удовлетворительное состояние новорожденного с метаболическими изменениями функционального характера.

Ребенок родился в удовлетворительном состоянии с массой 3650 г, ростом 52 см, оценкой по шкале Апгар на 8/9 баллов. Показатели активности ферментов лимфоцитов периферической крови новорожденного во 2-й день жизни составили: СДГ – 13,00 гр/лимф., -ГФДГ – 6,82 гр/лимф. Полученные значения активности окислительно-восстановительных ферментов свидетельствуют о высоком клеточном энергетическом потенциале новорожденного.

Наблюдение за новорожденным в динамике подтвердило прогноз о рождении ребенка в удовлетворительном состоянии с метаболическими изменениями функционального характера. В дальнейшем было отмечено физиологическое течение раннего неонатального периода.

Предлагаемым способом достигается положительный эффект, заключающийся в повышении точности (91%) дородового прогнозирования состояния новорожденного.

Наряду с этим определение активности окислительно-восстановительных ферментов лимфоцитов (СДГ и -ГФДГ) могут быть использованы для обоснованного назначения метаболической терапии как будущей матери, так и ее новорожденному, а также для оценки ее эффективности.

Применение данного способа прогнозирования и последующая метаболическая терапия будут способствовать снижению частоты патологических состояний у новорожденных. Предлагаемый способ может быть использован в широкой клинической акушерской и педиатрической практике.

Таблица 1. Средняя активность СДГ и -ГФДГ лимфоцитов периферической крови беременных перед родами за 1-3 дня и их новорожденных
Группы обследованных	n	СДГ (гранул/лимф.)	-ГФДГ (гранул/лимф.)
Беременные, у которых	32	7,60±1,10*	4,12±0,55*
прогнозируют рождение		4,12-8,75**	3,0-5,15**
новорожденных в тяжелом состоянии с выраженными метаболическими нарушениями		p1<0,01	р1<0,05
Беременные, у которых прогнозируют	35	15,21±1,60*	6,98±1,20*
рождение новорожденных в удовлетворительном состоянии с метаболическими изменениями функционального характера		13,50-18,25**	5,70-9,45**
Новорожденные, у которых	32	6,02±0,80*	3,36±0,96*
наблюдается тяжелое состоянии		3,26-6,92**	2,40-4,32**
и метаболические нарушениями в первые три дня жизни		р2<0,001	р2<0,05
Новорожденные, у которых	35	13,02±1,30*	7,90±1,20*
наблюдается удовлетворительное состояние и метаболические изменения функционального характера (условно здоровые дети)		11,56-15,63**	6,44-10,68**
Примечание:
СДГ – сукцинатдегидрогеназа;
-ГФДГ – альфа-глицерофосфатдегидрогеназа;
Гранул/лимф. – число гранул на 1 лимфоцит;
n – число наблюдаемых;
* – М±m, где М – это среднеарифметическая величина, a m – это стандартная ошибка среднеарифметической величины;
** – разброс значений средней активности СДГ и -ГФДГ;
p1 – критерий достоверности значений в сравнении с группой беременных, у которых прогнозируют рождение условно здоровых новорожденных;
р2 – критерий достоверности значений в сравнении с группой условно здоровых новорожденных.

Формула изобретения

Способ прогнозирования состояния новорожденных детей путем исследования капиллярной крови беременных женщин, отличающийся тем, что за 1-3 дня до родов в лимфоцитах цитохимическим методом одновременно определяют активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и альфа-глицерофосфатдегидрогеназы (-ГФДГ) и при значениях активности СДГ 4,12-8,75 гранул/лимф и альфа-глицерофосфатдегидрогеназы 3,00-5,15 гранул/лимф, прогнозируют тяжелое состояние новорожденного с выраженными метаболическими нарушениями в первые три дня жизни, при значениях активности сукцинатдегидрогеназы 13,50-18,25 гранул/лимф и альфа-глицерофосфатдегидрогеназы 5,70-9,45 гранул/лимф, прогнозируют удовлетворительное состояние новорожденного с метаболическими изменениями функционального характера.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 01.01.2006

Извещение опубликовано: 20.02.2007 БИ: 05/2007