Патент на изобретение №2265221

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ГЕСТОЗА ЛЕГКОЙ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ С РАННИХ СРОКОВ БЕРЕМЕННОСТИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области иммунологической лабораторной диагностики и может быть использовано для раннего прогнозирования развития гестоза легкой степени тяжести. Сущность изобретения состоит в том, что на сроке с 6 до 12 недель гестации в периферической венозной крови исследуют относительное содержание CD3⁺CD16⁺ лимфоцитов и при его значениях, равных или более 5,4%, прогнозируют развитие гестоза легкой степени тяжести. Техническим результатом является прогнозирование развития гестоза в ранние сроки и своевременное проведение комплекса лечебно-профилактических мероприятий. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования развития гестоза легкой степени тяжести в 3 триместре беременности у женщин при обследовании в 6-12 недель гестации.

Проблема гестоза остается одной из наиболее актуальных в современном акушерстве. Частота его колеблется от 2,3 до 16,6% и не имеет тенденции к снижению, несмотря на существенные достижения в изучении этиологии, патогенеза и разработку новых методов профилактики и лечения этого осложнения беременности [3]. Данная патология занимает одно из ведущих мест в структуре материнской и перинатальной заболеваемости и причин смертности [9]. Патогенетические механизмы данной патологии закладываются уже на ранних сроках беременности и только родоразрешение является эффективным методом лечения [9]. В связи с этим разработка методов раннего прогнозирования и профилактики гестоза представляет собой сложную клиническую проблему.

Известен способ прогнозирования позднего токсикоза беременных по определению в сыворотки крови активности супероксиддисмутазы. При величине активности более 5,1 Е/мл прогнозируют развитие позднего токсикоза[5].

Недостатки способа:

– в настоящее время в современном акушерстве не существует такого осложнения беременности, как “поздний токсикоз”, так как этиологические и патогенетические механизмы развития гестоза формируются с ранних сроков гестации [8];

– в изобретении не указывается срок беременности, в котором следует проводить исследование, и срок гестации, в котором прогнозируется развитие токсикоза;

– способ не является специфичным для прогнозирования гестоза, так как активность супероксиддисмутазы в сыворотки крови повышается и при других патологических процессах, связанных с усилением свободно радикального окисления, например, при гипертонической болезни, неспецифическом аортоартериите и др. [7];

– определение фермента супероксиддисмутазы представляет определенные трудности в связи с его малым периодом полужизни.

Также существует способ прогнозирования развития гестоза с ранних сроков по исследованию системы эндотелиоцитов. Для этого подсчитывают в крови количество циркулирующих свободных эндотелиоцитов, выявляют показатели гемостаза – фактор Виллебранда и определяют прогностический показатель Р по формуле: Р=0,018·К1+0,044·К2, где К1 – фактор Виллебранда в %; К2 – число свободных эндотелиоцитов. При значении Р>0 прогнозируется гестоз; при Р<0 – физиологическое течение беременности [4].

Недостатками способа являются:

– способ отличается трудоемкостью, так как требует постановки двух методик для вычисления прогностического критерия;

– сложность математической обработки результата по формуле;

– как уже говорилось выше, в настоящее время в современном акушерстве не существует такого осложнения беременности, как “поздний токсикоз”, так как этиологические и патогенетические механизмы развития гестоза формируются с ранних сроков гестации [8];

– вызывает сомнение пороговый уровень, равный 0, выбранный в качестве прогностического критерия, так как при расчете по данной формуле наличие хотя бы одного эндотелиоцита в крови или любого значения фактора Виллебранда делает этот показатель большим нулевого значения, кроме того, по этому способу физиологическое течение беременности прогнозируется при отрицательных значениях Р, что практически не может быть;

– возможность изменения данных показателей гемостаза не только у женщин с гестозом, но и при наличии у женщин патологии системы гемостаза (в том числе болезнь Виллебранда, тромбоцитопатии, тромбоцитопении) при отсутствии гестоза.

Наиболее близким к заявляемому способу по техническому решению является способ прогнозирования позднего токсикоза путем определения относительного содержания Т-супрессоров в периферической венозной крови и при величине показателя от 18% и менее прогнозируется развитие данного осложнения беременности [11].

Указанный способ выбран нами в качестве прототипа.

Недостатками способа-прототипа являются:

– не указывается срок беременности, в который рекомендуется проводить обследование, и срок гестации, в котором прогнозируется развитие токсикоза;

– в способе не указывается методика определения популяции супрессорных Т-лимфоцитов, что ограничивает возможность применения метода в различных лабораториях, так как ранее для их определения использовался морально устаревший метод розеткообразования после инкубации клеток с теофиллином, позднее этим термином обозначалась популяция CD8⁺ лимфоцитов, определяемая методом проточной цитофлюориметрии, люминесцентной микроскопии или с помощью частиц, покрытых моноклональными антителами, при этом результаты трех возможных методов не могут быть сопоставимы [6];

– популяция Т-лимфоцитов, ранее носившая название “супрессоров”, в современной иммунологии носит название цитотоксических Т-лимфоцитов и выполняет не только супрессорную функцию [12];

– при гестозах содержание СД8⁺ Т-клеток, наиболее точно отражающих количество цитотоксических Т-лимфоцитов, практически не изменяется [1];

– известно, что уровень цитотоксических лимфоцитов снижается при инфекционных и аутоиммунных заболеваниях (вирусный гепатит А и В, хронических отитах, увеитах, при пневмонии в остром периоде, хронических бронхитах, ревматизме, ревматоидном артрите, системной красной волчанке, при обострении хронического гломерулонефрпта) и некоторых соматических заболеваниях, в том числе при пиелонефрите и миокардите [2].

Указанные недостатки могут быть устранены в предлагаемом способе.

Заявляемый технический результат достигается тем, что в 6-12 недель гестации в периферической венозной крови беременных женщин определяют относительное содержание СD3⁺СD16⁺ лимфоцитов и при значениях этого показателя, равных или более 5,4%, прогнозируют развитие гестоза легкой степени тяжести в 3 триместре беременности с точностью 78,12%, чувствительностью 75% и специфичностью 87,5%.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать гестоз легкой степени тяжести по определению относительного содержания CD3⁺CD16⁺ лимфоцитов в периферической венозной крови беременных женщин в сроки гестации 6-12 недель. Функция и принадлежность CD3⁺СD16⁺ лимфоцитов к популяции Т-лимфоцитов или ЕК клеток в настоящее время остаются до конца не изученными [15, 10]. Однако молекула CD16 является рецептором III типа к Fc фрагменту иммуноглобулина G, и, вероятно, данная популяция клеток способна к осуществлению реакции АЗКЦ (антителозависимой клеточной цитотоксичности). Ранее исследования уровня CD3⁺СD16⁺ клеток у беременных женщин с целью прогнозирования гестоза не проводились. Мы предполагаем, что повышение уровня CD3⁺СD16⁺ клеток в ранние сроки гестации отражает развитие патологических процессов при беременности с усилением цитотоксических реакций как на системном, так и на локальном уровне, что в дальнейшем приводит к развитию гестоза.

Способ осуществляется по стандартной методике следующим образом:

1) выделение лимфоцитов из периферической венозной крови (13);

2) 100 мкл лимфоцитов в концентрации 1×10⁶ кл/мл инкубируют с 20 мкл моноклональных анти-CD3, меченных FITC, и с 20 мкл моноклональных анти-СD16, меченных РЕ, в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, после чего клетки отмывают 1 раз 1 мл физиологического раствора центрифугированием при 1500 об/мин в течение 2 минут. Клетки ресуспендируют в 500 мкл физиологического раствора. Учет реакции проводят на проточном цитометре, определяя содержание CD3⁺CD16⁺ клеток в лимфоцитарном гейте. Результат читается в процентах (%) [14].

Существенными отличиями заявленного способа являются:

– предложен новый прогностический параметр относительного содержания CD3⁺CD16⁺ лимфоцитов в периферической венозной крови, равный или более 5,4%, для раннего с 6 до 12 недель беременности прогнозирования развития гестоза легкой степени тяжести в 3 триместре.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.

Пример 1: Беременная Л., 28 лет. Настоящая беременность четвертая. Первая беременность закончилась медицинским абортом по желанию женщины, вторая и третья беременности закончились самопроизвольными выкидышами в сроки 11 и 9 недель. В 1 триместре беременности женщина находилась на стационарном лечении по поводу угрозы прерывания беременности. При обследовании заявленным способом в сроке беременности 11-12 недель: относительное содержание CD3⁺CD16⁺ лимфоцитов в периферической венозной крови – 8,3%, что выше прогностического уровня на развитие гестоза, прогнозируется развитие гестоза. При наблюдении за время беременности АД у женщины оставалось в пределах 100/60-120/80 мм рт.ст., общая прибавка массы тела составила 15,9 кг, с 20 недель отмечались неравномерные прибавки массы до +1,5 кг за неделю. Из экстрагенитальной патологии выявлена вегетососудистая дистония по смешанному типу. С 30 недель беременности у женщины появляются отеки голеней, периодически в анализах мочи – протеинурия 0,033-0,066 г/л. В амбулаторных условиях проводится терапия гестоза с временным эффектом. В 37 недель госпитализирована в стационар с диагнозом: Беременность 37 недель. Гестоз легкой степени тяжести. Многоводие. В стационаре в анализе мочи выявлена протеинурия 0,066 г/л. Балльная оценка степени тяжести гестоза по Г.М.Савельевой составила 5 баллов, что соответствует гестозу легкой степени [2]. Беременность закончилась своевременными оперативными родами (по поводу нейросенсорной тугоухости) и рождением живого доношенного ребенка массой 4000 г, ростом 53 см и оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов. Заключение: прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 2: Беременная Б., 34 года. Настоящая беременность вторая. В анамнезе самопроизвольный выкидыш в 11 недель беременности. В 1 триместре беременности женщина находилась на стационарном лечении по поводу угрозы прерывания беременности. При обследовании заявленным способом в сроке беременности 6 недель: относительное содержание CD3⁺CD16⁺ лимфоцитов в периферической венозной крови – 5,4%, что равно прогностическому уровню на развитие гестоза, прогнозируется развитие. гестоза. При наблюдении во время беременности общая прибавка массы тела составила 1,8 кг. Выявлена следующая экстрагенитальная патология: ожирение 1 ст., варикозная болезнь нижних конечностей, диффузное увеличение щитовидной железы I ст. (эутиреоз), миопия высокой степени с изменениями на глазном дне. В 30 недель беременности в анализах мочи выявлена протеинурия до 0,066 г/л. В 32 недели отмечено повышение АД до 145/90 мм рт.ст., появление отеков голеней. Беременная Б. была госпитализирована в стационар с диагнозом: Беременность 33 недели. Гестоз легкой степени тяжести. Балльная оценка степени тяжести гестоза по Г.М.Савельевой составила 7 баллов, что соответствует гестозу легкой степени [2]. Беременность закончилась преждевременными оперативными родами ввиду дородового излития околоплодных вод в сроке 36-37 недель и рождением живого ребенка массой 3050 г., ростом 46 см и оценкой по шкале Апгар 7/8 баллов. Заключение: прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 3: Беременная Б., 35 лет. Настоящая беременность пятая. В анамнезе двое своевременных родов без осложнений и рождение живых доношенных детей и два медицинских аборта по желанию женщины. При обследовании заявленным способом в сроке беременности 11 недель: относительное содержание CD3⁺CD16⁺ лимфоцитов в периферической венозной крови – 0,7%, развитие гестоза не прогнозируется. За время наблюдения при беременности экстрагенитальной патологии выявлено не было, беременность осложнилась развитием анемии 1 ст. При обследовании в 37 недель признаков гестоза не выявлено. Беременность закончилась своевременными родами и рождением доношенного новорожденного массой 4100 г, ростом 57 см, с оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов. Заключение: прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Указанным способом обследовано 32 женщины в 6-12 недель гестации.

Результаты исследований сведены в таблицу 1.

Преимущества заявляемого способа:

1. Исследование периферической венозной крови у женщины проводится в сроке 6-12 недель беременности, что позволяет прогнозировать гестоз легкой степени тяжести в 3 триместре до его клинического проявления и своевременно провести комплекс профилактических мероприятий.

2. Определено значение относительного содержания CD3⁺CD16⁺ лимфоцитов в периферической венозной крови у женщин в 1 триместре беременности, равное или более 5,4%, при котором прогнозируется развитие гестоза легкой степени тяжести.

3. Высокая точность 78,12%, чувствительность 75,00% и специфичность 87,5% способа.

Таким образом, заявленный способ прост в исполнении и позволяет с высокой точностью прогнозировать с ранних сроков гестации (6-12 недель) развитие у женщин гестоза легкой степени тяжести в 3 триместре. Проведение исследований по данному способу выявит женщин с высоким риском развития гестоза и позволит провести им необходимый комплекс лечебно-профилактических мероприятий, что будет способствовать снижению частоты данного осложнения беременности, риска развития патологии плода и новорожденного и уменьшению экономических затрат на лечение.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Астраух Н.В. Особенности фенотипа и цитокинового профиля децидуальных лимфоидных клеток при гестозе. Автореф. дис. … канд. мед. наук. – М., 2002, – 23 с.

2. Клиническая иммунология: Учебник для студентов медицинских вузов / Под ред. А.В.Караулова. – М.: Медицинское информационное агентство, 1999. – 604 с.

4. Медвинский И.Д., Юрченко Л.Н. Способ прогноза развития гестоза с ранних сроков беременности. Авторское свидетельство №2154823.

5. Бонаренко С.А., Бурлев В.А., Гребенников Е.П. Способ прогнозирования позднего токсикоза беременных. Авторское свидетельство №1612265.

9. Сидорова И.С. Поздний гестоз. М., 1996, 236 с.

10. Сухих Г.Т., Ванько Л.В., Кулаков В.И. Иммунитет и генитальный герпес. – Издательство НГМА. – 1997. – 221 с.

11. Чернова Т.К., Мирович Д.Ю. Способ прогнозирования позднего токсикоза беременных. Авторское свидетельство №1748066.

12. Ярилин А.А. Основы иммунологии: Учебник. – М.: Медицина. – 1999. – 608 с.

15. Research products catalog / Becton Dickinson Company, 1998. – 800 p.

Формула изобретения

Способ прогнозирования гестоза легкой степени тяжести с ранних сроков беременности путем исследования периферической венозной крови женщин, отличающийся тем, что в сроке с 6 до 12 недель гестации исследуют относительное содержание CD3⁺CD16⁺ лимфоцитов и при его значениях, равных или более 5,4%, прогнозируют развитие гестоза легкой степени тяжести.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 06.01.2006

Извещение опубликовано: 20.02.2007 БИ: 05/2007