Патент на изобретение №2264627

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗА КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ ХЛАМИДИЙНОГО КОНЪЮНКТИВИТА

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано в медицинской практике для прогноза течения хламидийного конъюнктивита. В сыворотке крови определяют уровень гиалуроновой кислоты и при ее содержании ниже 10 мкг/мл до 50 дня заболевания прогноз клинического течения хламидийного конъюнктивита оценивают как благоприятный. При концентрации гиалуроновой кислоты выше 10 мкг/мл, начиная с 50 дня заболевания, прогнозируют неблагоприятное хроническое течение этого заболевания. Способ позволяет повысить частоту прогноза клинического течения хламидийного конъюнктивита на основе определения содержания гиалуроновой кислоты в сыворотке крови у больных хламидийным конъюнктивитом.

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано в медицинской практике для прогноза течения хламидийного конъюнктивита.

Прогноз многих офтальмоинфекций основан на изучении нарушений числа и спектра субпопуляций лимфоцитов крови и изменений цитокинового статуса больного (В.Б.Мальханов, 1997; A.Biglino, 1996).

Известен способ прогноза хламидийного конъюнктивита (Азнабаев М.Т., Мальханов В.Б., Латыпова Э.А., Шевчук Н.Е. “Хламидийный конъюнктивит (клиника, диагностика, лечение), Уфа, 2003) путем определения субпопуляций лимфоцитов методом непрямого иммунофлуоресцентного фенотипирования и уровня интерлейкинов в сыворотке крови. Авторами метода с целью прогноза осложненного течения хламидийного конъюнктивита использовалось определение относительного числа СD95+-лимфоцитов и уровня интерлейкина-4 в сыворотке крови.

Недостатками этого способа являются его трудоемкость, так как предусматривается использование одновременно двух различающихся по технологии методов: иммунофлуоресцентного способа фенотипирования лимфоцитов и определения содержания интерлейкинов путем иммуноферментного анализа. Кроме того, данный способ не конкретизирует период, когда возможно начать проведение этого прогноза, обладает небольшой эффективностью, так как частота правильного прогноза составила всего 48% и метод касается только форм хламидийного конъюнктивита, осложненных распространением воспалительного процесса на другие оболочки глаза и его придаточный аппарат.

Техническим результатом изобретения является повышение частоты прогноза клинического течения хламидийного конъюнктивита на основе определения содержания гиалуроновой кислоты в сыворотке крови у больных хламидийным конъюнктивитом.

Технический результат изобретения достигается способом прогноза клинического течения хламидийного конъюнктивита путем определения показателей неспецифическрго иммунного реагирования, отличающийся тем, что определяют уровень гиалуроновой кислоты в сыворотке крови и при ее содержании ниже 10 мкг/мл до 50 дня заболевания прогноз клинического течения хламидийного конъюнктивита оценивают как благоприятный, а при концентрации гиалуроновой кислоты выше 10 мкг/мл, начиная с 50 дня заболевания прогнозируют неблагоприятное хроническое течение этого заболевания.

Преимуществом предлагаемого способа прогноза течения хламидийного конъюнктивита является однократное определение содержания только одного показателя – гиалуроновой кислоты – в сыворотке крови, более высокая частота прогноза, доступность оборудования для его постановки. Подтверждением высокой эффективности предлагаемого способа прогноза является совпадение содержания гиалуроновой кислоты менее 10 мкг/мл в сроки заболевания до 50 дней с благоприятным течением хламидийного конъюнктивита в 100% случаев, а при ее содержании выше 10 мкг/мл начиная с 50 дня с хроническим течением – в 70% случаев, а в целом – в 83,3%.

Способ осуществляют следующим образом.

Из локтевой вены больного, начиная с 50 дня болезни, берут кровь натощак в строго стерильных условиях в количестве 7-8 мл. Пробирки с кровью больных центрифугируют для получения сыворотки. Выделение гиалуроновой кислоты из сыворотки крови проводят методом ионообменной хроматографии после предварительного ферментативного протеолиза.

При определении гиалуроновой кислоты с целью ее экстракции в каждую пробирку, содержащую 3 мл сыворотки крови, добавляют 100 мкг/мл протеиназы “К”, 30 мкл/мл 1% додецилсульфата натрия и 50 кмг/мл 0,5 М ЭДТА, проводят ферментативный протеолиз при 42°С в течение 16 часов. Затем объем пробирки переносят в колонку с ДЕАЕ-целлюлозой, последовательно отмывают от примесей методом ионообменной хроматографии: сначала дистиллированной водой, а затем 0,15 М раствором NaCl (до снижения оптической плотности выходящих с колонки раствором до 0,01). Измерение оптической плотности производят по спектрофотометру при 220 нм против дистиллированной воды (раствор сравнения). Эллюирование гиалуроновой кислоты осуществляют 0,3 М раствором NaCl (условия спектрофотометрирования идентичны). Собранную гиалуроновую кислоту выпаривается до известного объема (1 мл). Для количественного определения гиалуроновой кислоты в парные пробирки (одна из которых – контроль) при охлаждении на ледяной бане и перемешивании наливают по 0,5 мл исследуемой жидкости, содержащей гиалуроновую кислоту, и 3 мл концентрированной серной кислоты. Пробы нагревают в течение 10 минут на кипящей водяной бане, а затем охлаждают до комнатной температуры. В опытные пробы добавляют 0,2 мл 0,01 М раствора карбазола в 95% этаноле, а в контрольные – 0,2 мл 95% этанола. Содержимое пробирок перемешивают, нагревают в кипящей водяной бане 10 минут (при этом развивается фиолетово-розовое окрашивание), охлаждают до комнатной температуры и фотометрируют на спектрофотометре при 530 нм в кюветах с толщиной оптического слоя 1 см (раствор сравнения – серная кислота). Измерение проводят против контрольной пробы. Количественное содержание выражается в микрограммах на 1 мл сыворотки. Нормальный уровень гиалуроновой кислоты у здоровых людей, как правило, не превышает 9 мкг/мл.

Предлагаемым способом изучено содержание гиалуроновой кислоты в сыворотке крови у 18 больных хламидийным конъюнктивитом в разгар заболевания. С этой целью из локтевой вены больных взяли кровь натощак в строго стерильных условиях в количестве 7-8 мл. Пробирки с кровью больных центрифугировали для получения сыворотки. Выделение гиалуроновой кислоты из сыворотки крови проводили методом ионообменной хроматографии после предварительного ферментативного протеолиза.

При определении гиалуроновой кислоты с целью ее экстракции в каждую пробирку, содержащую 3 мл исследуемой сыворотки крови, добавляли 100 мкг/мл протеиназы “К”, 30 мкл/мл 1% додецилсульфата натрия, 50 кмг/мл 0,5 М ЭДТА и проводили ферментативный протеолиз при 42°С в течение 16 часов. Затем объем пробирки переносили в колонку с ДЕАЕ-целлюлозой, последовательно отмывали от примесей методом ионообменной хроматографии: сначала дистиллированной водой, а затем 0,15 М раствором NaCl (до снижения оптической плотности выходящих с колонки раствором до 0,01). Измерение оптической плотности производили по спектрофотометру при 220 нм против дистиллированной воды (раствор сравнения). Эллюирование гиалуроновой кислоты осуществляли 0,3 М раствором NaCl (условия спектрофотометрирования идентичны). Собранную гиалуроновую кислоту выпаривали до известного объема (1 мл). Для количественного определения гиалуроновой кислоты в парные пробирки (одна из которых – контроль) при охлаждении на ледяной бане и перемешивании наливали по 0,5 мл исследуемой жидкости, содержащей гиалуроновую кислоту, и 3 мл концентрированной серной кислоты. Пробы нагревали в течение 10 минут на кипящей водяной бане, а затем охлаждали до комнатной температуры. В опытные пробы добавляли 0,2 мл 0,01 М раствора карбазола в 95% этаноле, а в контрольные – 0,2 мл 95% этанола. Содержимое пробирок перемешивали, нагревали в кипящей водяной бане 10 минут (при этом развивалось фиолетово-розовое окрашивание), охлаждали до комнатной температуры и фотометрировали на спектрофотометре при 530 нм в кюветах с толщиной оптического слоя 1 см (раствор сравнения – серная кислота). Измерение проводили против контрольной пробы. Результаты выражали в мкг/мл.

У 10 из 18 больных хламидийным конъюнктивитом течение хламидийного конъюнктивита было хроническим, т.е. продолжительностью более 2 месяцев, а у 8 – благоприятным, поддающимся антибиотикотерапии и не протекающем более 1-1,5 месяца. В первой группе больных, начиная с 50 дня заболевания, содержание гиалуроновой кислоты в сыворотке крови выше 10 мкг/мл было у 7 (70%) из них, причем клинически заболевание характеризовалось как неблагоприятное и носило хроническое рецидивирующее течение, длилось более 60 дней, а у 4-х было многолетнее – от 1 года до 5 лет. Во второй группе, состоящей из 8 больных с благоприятно протекающим хламидийным конъюнктивитом, показатели уровня гиалуроновой кислоты до 50 дня заболевания не превышали 10 мкг/мл у всех из них.

Таким образом, предлагаемый способ делает достоверным прогноз благоприятного течения хламидийного конъюнктивита в 8 случаях из 8 (100%), а хронического его течения – в 7 из 10 случаев (70%), то есть в целом он правилен в 83,3%.

Пример 1. Больной X., 1988 года рождения (м/к 6320-2003 г) находился на стационарном лечении в отделение по изучению инфекционных заболеваний глаз Уфимского НИИ глазных болезней по поводу хламидийного кератоконъюнктивита, лимбита. Болен более 2-х месяцев. Определение гиалуроновой кислоты в сыворотке крови проводилось по предлагаемому способу. На 50 день заболевания содержание гиалуроновой кислоты в сыворотке было ровно 17,75 мкг/мл. Определен прогноз неблагоприятного течения этого заболевания. Действительно, несмотря на комплексное лечение в стационаре – циклоферон внутримышечно 10 инъекций по схеме, ципрофлоксацин под конъюнктиву нижнего свода и внутривенно 2 раза в сутки в течение недели и амбулаторное долечивание (местно в конъюнктивальную полость 0,3% раствор ципрофлоксицина 3-4 инстилляций в день 2 недели) – у больного наблюдали непрерывно рецидивирующее течение хламидийного кератоконъюнктивита с формированием сосудистого паннуса в правом глазу. Таким образом, прогноз хронического течения хламидийного конъюнктивита, выявленный на основании высокого (более 10 мкг/мл) содержания гиалуроновой кислоты в сыворотке крови на 50 день болезни, подтвердился.

Пример 2. Больная Н, 1956 года рождения (м/к 4382-2003 г) поступила в клинику с диагнозом хламидийный конъюнктивит левого глаза. В разгар заболевания на 20 день болезни содержание гиалуроновой кислоты в сыворотке крови было ровно 4,87 мкг/мл. На основании этого был сделан прогноз благоприятного течения заболевания. Стихание воспалительного процесса (уменьшение отека, инфильтрации конъюнктивы век нижней переходной складки, уплощение и частичное рассасывание фолликулов, исчезновение гнойного отделяемого из конъюнктивальной полости) отмечали уже к 10 суткам от начала лечения, и клиническое выздоровление наступило через 1 месяц. При активном наблюдении в течение 6 месяцев рецидива хламидийного конъюнктивита не наблюдали. Прогноз благоприятного течения хламидийного конъюнктивита на основании уровня гиалуроновой кислоты в сыворотке на 20 день болезни менее 10 мкг/мл подтвердился.

Формула изобретения

Способ прогноза клинического течения хламидийного конъюнктивита путем определения показателей неспецифического иммунного реагирования, отличающийся тем, что определяют уровень гиалуроновой кислоты в сыворотке крови и при ее содержании ниже 10 мкг/мл до 50 дня заболевания прогноз клинического течения хламидийного конъюнктивита оценивают как благоприятный, а при концентрации гиалуроновой кислоты выше 10 мкг/мл начиная с 50 дня заболевания прогнозируют неблагоприятное хроническое течение этого заболевания.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 08.05.2006

Извещение опубликовано: 10.01.2008 БИ: 01/2008